1、乙肝病毒感染的檢測(cè)手段和診斷指標(biāo),乙肝病毒HVB（hepatitis B virus）,引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒，也稱丹氏顆粒。 我國(guó)的乙肝病毒感染率約60%-70%；乙肝表面抗原攜帶率約占總?cè)丝诘?.18%。,乙肝病毒的檢測(cè)手段,免疫學(xué)方法 酶免疫法（ELISA） 時(shí)間分辨熒光分析技術(shù)（TRFIA） 膠體金法 分子生物學(xué)方法 HBV-DNA法（PCR） bDNA法,乙肝病毒檢測(cè)指標(biāo),酶免疫法（ELISA）,酶免疫法（ELISA）,酶免疫法（ELISA）,酶免疫法（ELISA）,目的：對(duì)乙肝血清標(biāo)志物進(jìn)行定性的分析 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定 缺點(diǎn)：敏感度相對(duì)較低；出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)（前帶/后帶

2、）和受到交叉污染的可能性較大；不能夠?qū)σ腋尾《緲?biāo)志物實(shí)施動(dòng)態(tài)觀察；對(duì)低水平HBV感染標(biāo)志物的漏檢率相對(duì)較高。,時(shí)間分辨熒光分析技術(shù)（TRFIA）,示蹤劑：鑭系元素 流程： 具有雙功能基團(tuán)的鑭系元素對(duì)抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記 通過(guò)時(shí)間延遲將非特異性的熒光去除 發(fā)生特異性結(jié)合時(shí)，抗原抗體復(fù)合物在可以增強(qiáng)液中發(fā)生解離，在特定的激發(fā)光的激發(fā)作用下發(fā)出一種特定波長(zhǎng)的熒光，在固定的時(shí)間對(duì)特異性熒光進(jìn)行檢測(cè)即可 意義：適用于急診或手術(shù)前對(duì)HBV病毒進(jìn)行定性檢查，其主要優(yōu)點(diǎn)在于檢測(cè)速度較快、操作簡(jiǎn)單方便，對(duì)操作技術(shù)和檢測(cè)環(huán)境的要求相對(duì)較低。,膠體金法,膠體金：由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸

3、鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。 原理：膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。 類型：免疫膠體金光鏡染色法 免疫膠體金電鏡染色法 膠體金免疫層析法 等,膠體金法,優(yōu)點(diǎn)：檢測(cè)速度相對(duì)較快，在取得血清的情況下，一般情況下在十分鐘之內(nèi)就可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀。 缺點(diǎn)：只能對(duì)乙肝病毒實(shí)施定性檢測(cè)，準(zhǔn)確率與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)比較相對(duì)低，且對(duì)于弱陽(yáng)性的表現(xiàn)度相對(duì)較差，造成弱陽(yáng)性標(biāo)本的漏讀和誤讀的可能性相對(duì)較大，性價(jià)比跟準(zhǔn)確

4、度方面都要略遜于ELISA。,傳統(tǒng)PCR PCR-ELISA 實(shí)時(shí)定量PCR,HVB-DNA法（PCR）,原理：探針雜交 方法：bDNA是人工合成的側(cè)鏈DNA片段，每個(gè)側(cè)鏈上都可以帶標(biāo)記物。在用于檢測(cè)的微孔板上包被有一套人工合成的HBV-DNA特異性核苷酸捕獲探針，當(dāng)HBV-DNA從細(xì)胞中釋放出來(lái)時(shí)，被板上的捕獲探針?biāo)东@。另一套靶向延伸探針既能與捕獲的HBV-DNA雜交，又能與預(yù)放大探針雜交。隨后，放大探針與預(yù)放大探針雜交，形成bDNA復(fù)合物。標(biāo)記有多個(gè)堿性磷酸酶的探針固定到該復(fù)合物上，與發(fā)光底物共同孵育，記錄發(fā)光強(qiáng)度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得HBV-DNA濃度。 意義：目標(biāo)物不被擴(kuò)增,但檢測(cè)信號(hào)

5、被放大,從而提高了靈敏度。,bDNA法（branched DNA）,參考文獻(xiàn),【1】胡曉丹,目前乙肝病毒不同臨床檢測(cè)方法的對(duì)照研究J.國(guó)際病毒學(xué)雜志,2015,Vol.22,supplement.142-143. 【2】王健,閔福援,乙肝病毒血清標(biāo)志物的檢測(cè)方法及其臨床意義J.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，Vol.28, No.1.113-115. 【3】張寶華,黃婷,乙型肝炎病毒檢測(cè)方法的相關(guān)性分析J.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 ,2010, Vol.7, No.4.69-71. 【4】王家杰,何慶明,劉佳文,李寶玲,李金紅,乙型肝炎病毒標(biāo)志物定量檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)J.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 ,2015, Vol.3, N