1、名校名 推薦第二節(jié)培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用一、選擇培養(yǎng)基1含義能讓特定的微生物生長(zhǎng)，抑制其他微生物生長(zhǎng)，從而將所需要的微生物從混雜的微生物群體中分離出來(lái)的培養(yǎng)基。2操作原理配制選擇培養(yǎng)基時(shí)，可加入某些物質(zhì)或除去某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，也可以加入某種化學(xué)物質(zhì)，從而抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)繁殖。二、平板培養(yǎng)基的制備稱(chēng)量：根據(jù)培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱(chēng)取各原料成分。溶解：在錐形瓶中加適量蒸餾水后， 在電爐上邊加熱邊攪拌直至瓊脂完全溶化， 然后加蒸餾水至 1 000 ml 。先測(cè)原始 ph調(diào)節(jié) ph 再用 naoh或 hcl溶液調(diào)節(jié)ph至7.2 7.4分裝、包扎：做好標(biāo)記。滅菌：置于高壓蒸汽滅菌鍋中，121 下滅菌20

2、 min 。倒平板：將滅菌后的培養(yǎng)液冷卻至50左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。接種操作為什么要在酒精燈火焰旁進(jìn)行？【提示】接種時(shí)應(yīng)確保一個(gè)無(wú)菌的環(huán)境。預(yù)習(xí)完成后，請(qǐng)把你認(rèn)為難以解決的問(wèn)題記錄在下面的表格中1名校名 推薦問(wèn)題 1問(wèn)題 2問(wèn)題 3問(wèn)題 42名校名 推薦一、培養(yǎng)基的種類(lèi)3名校名 推薦二、無(wú)菌技術(shù)1概念：無(wú)菌技術(shù)不僅能防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染，保持微生物的純培養(yǎng)，而且在分離、轉(zhuǎn)接時(shí)亦能防止其他微生物污染。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵。無(wú)菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開(kāi)，主要包括以下幾個(gè)方面：(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清洗和消毒(disinf

3、ection)。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌(sterilization)。(3) 為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(4) 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|。2消毒與滅菌的區(qū)別與聯(lián)系消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物 ( 不包括芽孢和孢子) 。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。消毒屬于部分滅菌。三、接種技術(shù)1用接種環(huán)接種(1) 先點(diǎn)燃酒精燈，再取兩支盛有培養(yǎng)基的試管，其中一支內(nèi)有菌種。用拇指和其他四指夾住試管，使管口平齊，管內(nèi)培

4、養(yǎng)基斜面向上( 如圖 1) 。(2) 手持接種環(huán)，將接種環(huán)的環(huán)端和接種時(shí)可能進(jìn)入試管的部分放在火焰上，來(lái)回灼燒4名校名 推薦多次 ( 如圖 2) 。圖 1圖 2(3) 在火焰附近用握有接種環(huán)的那只手的小指、無(wú)名指、中指和掌心拔去兩支試管上的試管塞，迅速將試管口通過(guò)火焰2 3 次，以殺滅試管口上沾染的微生物( 如圖 3) 。(4) 將滅過(guò)菌的接種環(huán)伸入菌種管，先將環(huán)部接觸培養(yǎng)基斜面頂端等部位使其冷卻，再輕輕挑取少許菌體。在抽出接種環(huán)時(shí)，注意其帶菌部分不要觸及管壁或通過(guò)火焰( 如圖 4) 。圖 3圖 4(5) 迅速將上述帶菌的接種環(huán)伸入待接種的試管中，在培養(yǎng)基斜面上由底部向上輕輕劃“s”型曲線(xiàn)，將

5、菌種接種到培養(yǎng)基上。劃曲線(xiàn)時(shí)不要將培養(yǎng)基的表面劃破( 如圖 5) 。(6) 將試管口與試管塞通過(guò)火焰23 次，迅速塞緊試管。 多次灼燒接種環(huán)后， 放回原處。將接種過(guò)菌種的試管，放在恒溫箱中(37 ) 培養(yǎng)24 h( 如圖 6) ，觀察接種和培養(yǎng)的結(jié)果。圖 5圖 62稀釋平板涂布操作涂布平板時(shí)， 稀釋平板涂布的操作比較復(fù)雜，且各個(gè)細(xì)節(jié)均需保證“無(wú)菌”，應(yīng)特別注意：(1) 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。(2) 吸管頭不要接觸任何其他物體。(3) 吸管要在酒精燈火焰周?chē)褂谩?4) 移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌。操作時(shí)，移液后用手指輕壓上端的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。(5) 將涂布器末端浸在盛有體積

6、分?jǐn)?shù)為 70%的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。5名校名 推薦選擇培養(yǎng)基的配制原理下面是某實(shí)驗(yàn)室中將用到的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)下表回答下面的問(wèn)題。編號(hào)成分含量kh2po41.4 gna2hpo42.1 gmgso7h o0.2 g42葡萄糖10.0 g尿素1.0 g瓊脂15.0 g將上述物質(zhì)溶解后，用自來(lái)水定溶到1 000 ml(1) 在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的是_，提供氮源的是 _。(2) 絕大多數(shù)微生物都能利用_ ，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解_。( 填編號(hào) )(3) 分析該培養(yǎng)基的配方，該培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選

7、擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？【審題導(dǎo)析】分析表中找出特殊物質(zhì)或確定選擇營(yíng)養(yǎng)成分 缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 的微生物【精講精析】表中營(yíng)養(yǎng)成分中只有葡萄糖含有碳元素，只有尿素含有氮元素。絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對(duì)微生物有選擇作用。選擇的原理是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)?！敬鸢浮?1) 葡萄糖尿素(2) (3) 有選擇作用。以尿素為氮源的微生物才能生長(zhǎng)。解決選擇培養(yǎng)基的問(wèn)題，關(guān)鍵看培養(yǎng)基中的特殊成分( 或缺少的成分 ) ，因?yàn)樗鼈儗?duì)應(yīng)著一類(lèi)微生物，如：纖維素為唯一碳源分解纖維素的微生物缺氮源固氮微生物加青霉素有抗青霉素基因的細(xì)菌、

8、真菌6名校名 推薦1在培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)能分離出所需的微生物。下列前項(xiàng)是在培養(yǎng)基中加入的物質(zhì)，后項(xiàng)是能分離出的微生物，正確的是()a氫氧化鈉，酵母菌b鹽酸，放線(xiàn)菌c適量的青霉素，霉菌d適量的伊紅和美藍(lán)，大腸桿菌【解析】 氫氧化鈉和鹽酸都不利于微生物的生長(zhǎng)； 青霉素可以抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)， 因而能選出酵母菌和霉菌；加入伊紅和美藍(lán)能夠鑒別出大腸桿菌的存在，但不能選擇出來(lái)?！敬鸢浮縞選擇培養(yǎng)基的應(yīng)用(2014 全國(guó)卷 ) 植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1) 分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3 種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成 _。(2

9、) 在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅 (cr)時(shí)， cr可與纖維素形成 _色復(fù)合物。用含有 cr 的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。(3) 為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基 ( 成分見(jiàn)下表 ) ：酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂cr溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：“”表示有，“”表示無(wú)。據(jù)表判斷， 培養(yǎng)基甲 _( 填“能”或“不能” ) 用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是 _ ；培養(yǎng)基乙 _( 填“能”或“不能” ) 用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_ 。【解析】(1) 纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，

10、即c 酶、 cx 酶1和葡萄糖苷酶， 前兩種酶能使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。7名校名 推薦(2) 剛果紅是一種染料，可以與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后， 紅色復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。(3) 纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，而用于分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，并且培養(yǎng)基中需含有纖維素，才能與 cr形成紅色復(fù)合物，有纖維素分解菌時(shí)才能形成以纖維素分解菌為中心的透明圈?！敬鸢浮?1) 纖維二糖葡萄糖(2) 紅透明圈(3) 不能液體培養(yǎng)基不

11、能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成cr纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌2分離菌落特征明顯的微生物，還可以用()a劃線(xiàn)法和稀釋平板涂布法b液體培養(yǎng)基培養(yǎng)法c加青霉素的選擇培養(yǎng)基d振蕩式培養(yǎng)法【解析】分離微生物可以使用固體培養(yǎng)基，采用劃線(xiàn)法或稀釋平板涂布法分離出來(lái)。【答案】a1若在固體培養(yǎng)基中放入纖維濾紙作唯一碳源，下列哪種微生物可以生存()a可以分泌纖維素酶的微生物b由于缺乏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所有微生物均無(wú)法生存c所有微生物均可以生存d病毒【答案】a2用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是()a未接種的選擇培養(yǎng)基b未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基c接種了的

12、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基d接種了的選擇培養(yǎng)基【答案】c3有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。下列敘述錯(cuò)誤的一項(xiàng)是()a在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以原油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上。從8名校名 推薦功能上講，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基b無(wú)菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染c為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周?chē)纸馊Φ拇笮?，分解圈小說(shuō)明該菌株的降解能力強(qiáng)d通常情況下，在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌【解析】本題考查高效降解原油的菌株篩選的有關(guān)知識(shí)。欲

13、篩選出能降解原油的菌株，培養(yǎng)基中只含有原油而無(wú)其他碳源，這樣， 不能降解原油的細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生存，這類(lèi)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，故a正確；無(wú)菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)室操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，故 b 正確； 降解原油能力越強(qiáng)的菌株，在菌落周?chē)纬傻姆纸馊υ酱?，?c錯(cuò)誤； 實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌，故d正確?！敬鸢浮縞學(xué)業(yè)達(dá)標(biāo)測(cè)評(píng)( 二 )一、選擇題1鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)在培養(yǎng)基中加入一些物質(zhì)配制而成，這些物質(zhì)是()a 指示劑或化學(xué)藥品b青霉素或瓊脂c高濃度食鹽d維生素或指示劑【解析】鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而

14、成，用以鑒別不同種類(lèi)的微生物?！敬鸢浮縜2天然培養(yǎng)基與合成培養(yǎng)基是按照什么分類(lèi)的()a物理狀態(tài)b化學(xué)成分c用途d配制方法【解析】培養(yǎng)基的分類(lèi)有多種方法，按照化學(xué)成分可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基?！敬鸢浮縝3制備培養(yǎng)基的步驟是()溶解稱(chēng)量計(jì)算倒平板滅菌調(diào) ph分裝abcd【解析】制備培養(yǎng)基的步驟是：計(jì)算、稱(chēng)量、溶解、調(diào)ph、分裝、滅菌、倒平板。9名校名 推薦【答案】c4關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基的說(shuō)法，敘述錯(cuò)誤的是()a操作順序?yàn)橛?jì)算、稱(chēng)量、溶化、倒平板、滅菌b將稱(chēng)好的牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同放入燒杯c待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時(shí)進(jìn)行倒平板d等平板冷卻凝固約5 min 10 min 后將平板倒過(guò)來(lái)

15、放置【解析】制備牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基時(shí)，正確的操作順序是：計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌、倒平板。【答案】a5有關(guān)稀釋涂布平板法，敘述錯(cuò)誤的是()a首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋b然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面c適宜條件下培養(yǎng)d結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落【解析】稀釋涂布平板法接種后培養(yǎng)，培養(yǎng)基表面有的可以形成單個(gè)菌落，有的則不能?！敬鸢浮縟6下列斜面培養(yǎng)基正確的畫(huà)線(xiàn)示意圖，正確的是()【解析】正確的接種方法是將帶菌的接種環(huán)伸入待接種的試管中，在培養(yǎng)基面上由底部向上輕劃“ s”型曲線(xiàn)，將菌種接種到培養(yǎng)基上。【答案】a7(2016 江蘇高考改編) 漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類(lèi)，在

16、環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過(guò)程，相關(guān)敘述不正確的是()a生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品b篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落c在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線(xiàn)進(jìn)一步純化10名校名 推薦d對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法【解析】生活污水中含木質(zhì)素的物質(zhì)相對(duì)較少，產(chǎn)漆酶菌株也較少，不宜作為分離產(chǎn)漆酶菌株的樣品，a 選項(xiàng)錯(cuò)誤；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時(shí)可通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，b 選項(xiàng)正確；在涂布平板上生長(zhǎng)的菌落可能還有其他雜菌，可再通過(guò)平板

17、劃線(xiàn)法進(jìn)一步純化，c 選項(xiàng)正確?！敬鸢浮縜8在細(xì)菌的連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中，要以一定速度不斷添加新的培養(yǎng)基，同時(shí)以同樣速度放出“老”的培養(yǎng)基。 右圖表示培養(yǎng)基的稀釋率( 培養(yǎng)基的更新速率) 與培養(yǎng)容器中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度、細(xì)菌代時(shí) ( 細(xì)菌數(shù)目增加一倍所需的時(shí)間) 、細(xì)菌密度的關(guān)系。下列相關(guān)敘述不正確的是()a在稀釋率很低的情況下，稀釋率的增加會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌密度增加b稀釋率從a點(diǎn)到 b 點(diǎn)的變化過(guò)程中，細(xì)菌生長(zhǎng)速率不斷提高c稀釋率超過(guò)b 點(diǎn)后，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)高導(dǎo)致細(xì)菌死亡率增大，細(xì)菌密度降低d為持續(xù)高效地獲得發(fā)酵產(chǎn)品，應(yīng)將稀釋率控制在b 點(diǎn)附近【解析】當(dāng)稀釋率大于b 點(diǎn)時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度還會(huì)進(jìn)一步增加，代時(shí)也還

18、會(huì)進(jìn)一步縮小， 但是由于培養(yǎng)液更新的速度太快，細(xì)菌很快就會(huì)隨“老”的培養(yǎng)基被放出，而在這個(gè)培養(yǎng)環(huán)境中存留的時(shí)間非常的短暫，最后導(dǎo)致細(xì)菌的密度較低。c 敘述錯(cuò)誤。 abd敘述正確?！敬鸢浮縞二、非選擇題9在細(xì)菌的純培養(yǎng)中， 可在無(wú)菌條件下， 用已滅菌的接種環(huán)( 或接種針 ) ，把純種細(xì)菌 ( 培養(yǎng)在試管中 ) 接種在含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的固體培養(yǎng)基上( 一般可用培養(yǎng)皿放置) ，該種細(xì)菌在適宜條件下會(huì)迅速繁殖，形成菌落。 請(qǐng)根據(jù)提供的材料設(shè)計(jì)一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)探究抗生素a 和抗生素b 的殺菌效果。(1) 在下圖中畫(huà)出設(shè)計(jì)方案示意圖并注明名稱(chēng)( 三個(gè)培養(yǎng)皿均含相同培養(yǎng)基， 無(wú)菌條件操作) 。(2) 預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并分析：經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，號(hào)培養(yǎng)皿和號(hào)培養(yǎng)皿均沒(méi)有菌落，抗生素 a 和抗生素 b 殺菌效11名校名 推薦果相同；若、號(hào)培養(yǎng)皿內(nèi)均有大量菌落，說(shuō)明抗生素a 和抗生素b 均無(wú)殺菌功效。【答案】(1)(2) 若號(hào)培養(yǎng)皿內(nèi)無(wú)菌落，而號(hào)培養(yǎng)皿內(nèi)菌落與號(hào)相同，說(shuō)明抗生素a 有殺菌功效，而抗生素b 無(wú)殺菌功