1、,血清膽固醇的定量測定 血清清蛋白與-球蛋白的分離與鑒定 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的鑒定及活力測定,實驗內(nèi)容,血清膽固醇的定量測定（鄰苯二甲醛法）,膽固醇及其酯在硫酸存在下與鄰苯二甲醛作用，產(chǎn)生的紫紅色物質(zhì)對550nm波長的光有最大吸收。100ml樣品中膽固醇含量在400mg之內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。,實驗數(shù)據(jù),實驗結(jié)果,標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0019x 家雞的血清總膽固醇含量：19.47mg/100ml 烏雞的血清總膽固醇含量：27.89mg/ml 查資料得：雞的血清膽固醇含量在51196mg/100ml之間是在可信范圍。,分析與討論,實驗所得的數(shù)據(jù)偏低，可能的原因： 1.試管未干燥，沾有較多的水分

2、，使得標(biāo)準(zhǔn)膽固醇應(yīng)用液被稀釋，濃度偏低。 2.此次所用的血清本身膽固醇含量比一般的個體偏低。 3.取血清的過程中，有些殘留在試管壁上。,血清清蛋白與-球蛋白的鹽析、透析與濃縮,上清液（主要是清蛋白 ） 離心 血清離心 取沉淀 沉淀（主要是-球蛋白）離心取 沉淀 將得到的樣品裝入透析袋中，置于燒杯中，用流水沖刷一小時。,血清清蛋白與-球蛋白的鑒定（醋酸纖維素薄膜電泳法）,醋酸纖維素薄膜是用二乙酸纖維素制成的，它具有均一的泡沫樣的結(jié)構(gòu)，厚度僅為 120m，有強滲透性，對分子移動無阻力。 浸泡點樣電泳染色漂洗,實驗結(jié)果（家雞血清電泳圖譜）,分析與討論,查資料得：電泳圖譜中，清蛋白與點樣線的距離比球蛋

3、白遠(yuǎn)。 1.條帶的顏色較深，是因為漂洗不夠徹底。 2.全血清條帶有多條重疊，是因為血清中有多種蛋白。 3.血清清蛋白條帶出現(xiàn)兩條線，可能是因為鹽析時，球蛋白中摻有其它蛋白。,谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的鑒定,觀察肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶所催化的氨基移換反應(yīng)。通過紙層析法檢查底物谷氨酸的減少和產(chǎn)物丙氨酸的生成。,實驗結(jié)果（家雞肝臟）,分析與討論,酶液處有兩個條帶，離圓心較近的為谷氨酸，較遠(yuǎn)的為丙氨酸，而且與另一端的谷氨酸相比，量較少。煮沸的酶液只有一個條帶，是因為谷丙轉(zhuǎn)氨酶已失活，無法將谷氨酸轉(zhuǎn)換為丙氨酸。條帶附近還是有淺色的痕跡，可能是因為點樣時，不小心碰到了別處。,血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力單位測定,本實驗用丙氨酸和-酮戊二酸為底物，經(jīng)轉(zhuǎn)氨作用生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物質(zhì)堿性條件下呈棕紅色，其顏色的深淺與丙酮酸的含量成正比，可用比色法進行定量測定。通過與標(biāo)準(zhǔn)溶液的比較，即可計算出酶的活力單位數(shù)。,實驗數(shù)據(jù),實驗結(jié)果,標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0019x 家雞的GPT活力單位數(shù)：10 烏雞的GPT活力單位數(shù)：30,分析與討論,查資料知道實驗所得的數(shù)據(jù)偏低， 可能的原因： 1.試管未干燥，導(dǎo)致待測液濃度降低