1、DNA的粗提取與鑒定,討論2：如何證明他們是遺傳物質？,討論3：怎樣才能將細胞內的這些物質分離出來？,討論1：構成生物體的遺傳物質是什么？,1、提取生物大分子的基本思路 選用一定的物理或化學方法分離具有不同物理或化學性質的生物大分子,2、生物大分子 主要指蛋白質、酶和核酸,3、提取DNA的基本思路 利用DNA與RNA、蛋白質和脂質等在物理和化學性質方面的差異，提取DNA，去除其他成分,（一）提取DNA的方法,實驗原理,1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的。當NaCl的物質的量濃度為0.14 molL時,DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶

2、液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些物質則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質較少的DNA。 3.DNA遇二苯胺（沸水?。境伤{色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。,1、 在沸水浴中， DNA遇二苯胺會染成藍色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑,（二）DNA的鑒定,2、甲基綠 （綠色）,（一）實驗材料的選取,1、材料：魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動物的紅細胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。（從中選取23種實驗材料）,2、原則：選用DNA含量相對較高、容易提取的生物組織。,雞血,3、合適的材料：,動物細胞的破

3、碎較易，例如，在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水 ，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可,（二）破碎細胞，獲取含DNA的濾液,1、動物細胞,答：蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲溶液，水分可以大量進入血細胞內，使血細胞脹裂，從而釋放出DNA。,討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？,2、植物細胞 植物細胞需要先用一定的洗滌劑和食鹽溶解細胞膜,實例：提取洋蔥DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液,討論：加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？,答：洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解,討論：

4、如果研磨不充分，會對實驗結果產生怎樣的影響？,具體做法。10mL雞血20mL蒸餾水同方向攪拌3層尼龍布過濾濾液,答：研磨不充分會使細胞核內的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實驗結果，導致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍色等,為什么反復地溶解與析出DNA，能夠去除雜質,（三）去除濾液中的雜質,答：用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽溶液中不能溶解的雜質；用低鹽溶液使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質。因此，通過反復溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質,方案一、在濾液中加入NaCl，使NaCl溶液濃度為2mol/L，過濾除去不溶的雜質，再加入蒸餾水，調

5、節(jié)NaCl溶液濃度為0.14mol/L，析出DNA，過濾除去溶液中的雜質，在用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。,討論：方案二與方案三的原理有什么不同？,答：方案二是利用蛋白酶分解雜質蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質分開；方案三利用的是DNA和蛋白質對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質變性，與DNA分離,方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，反應1015分鐘。 方案三、將濾液放在60750C的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘。,為了純化提取的DNA需要將濾液作進一步處理,討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細胞成分？,答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質,具體做法: 方案一：30mL濾液35gNaCl

6、同方向攪拌，DNA溶解加入蒸餾水DNA析出過濾得到過濾物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液 方案二：30mL濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）靜置1015分鐘DNA濾液 方案三：30濾液6075處理過濾獲得DNA濾液,（四） DNA的析出與鑒定,DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液（體積分數(shù)為95 ） ，靜置23min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水。,1、DNA的析出,鑒定DNA時在試管中先加入物質的量的濃度為2mol/L 的NaCl溶液5ml于兩只試管中，其中一只加入DNA絲狀物，各加入二苯胺4m

7、l 試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否有藍色,2、 DNA的鑒定,1、以血液為實驗材料時，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。 2、加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成絮狀沉淀。 3、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。,制備雞血細胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心 破碎細胞，釋放DNA 加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌 過濾，除去細胞壁、細胞膜等。 溶解核內DNA 加入NaCl至2mol/L，同一方向緩慢攪拌 DNA析出加