1、ABO血型鑒定 不規(guī)則抗體篩選,玻片法（正定型） 試管法（正定型,反定型）,鹽水法 聚凝胺法 抗人球法,ABO血型鑒定實驗原理,抗原抗體反應(yīng)在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象從而測知受試者紅細(xì)胞膜上有無A或/和B抗原判斷血型 抗體在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊.見圖,IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖,IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖,IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集,試劑,抗A、抗B試劑血清 5%的A型、B型及O型試劑紅細(xì)胞懸液 受檢者血清 5%的受檢者紅細(xì)胞懸液 (從指尖或耳

2、垂取血一滴，加入含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5紅細(xì)胞懸液。采血時應(yīng)注意先用75酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細(xì)胞（約0.20.5 ml）用生理鹽水洗滌3次，然后加入適量生理鹽水調(diào)配成5%濃度。),四 實驗步驟.swf,1. 玻片法 （1） 取雙凹玻片一塊，用干凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端用記號筆標(biāo)明A及B，并分別各滴入A及B標(biāo)準(zhǔn)血清一滴。 （2） 用滴管吸取紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。 （3） 竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根 分別用來混合A型和B型標(biāo)準(zhǔn) 血清和紅細(xì)胞懸液 （4）觀察結(jié)果。如有凝集反應(yīng)可見到呈紅色點狀或小片狀凝集塊浮

3、起。先用肉眼看有無凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應(yīng)，可見紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。 （5） 判斷血型 根據(jù)被試者紅細(xì)胞是否被A，B型標(biāo)準(zhǔn)血清所凝集，判斷其血型。,2.試管法(正定型),A B A標(biāo)準(zhǔn)血清 2滴 B標(biāo)準(zhǔn)血清 2滴 受試者的紅細(xì)胞懸液 1滴 1滴 混勻后1000rpm離心1min或3000rpm離心15秒。 。 取出觀察結(jié)果。完全凝集的管底部有紅細(xì)胞的凝塊，管底細(xì)胞邊緣呈花邊狀，輕彈試管凝塊不散；完全不凝的試管，血細(xì)胞均勻的沉到管底，邊緣整齊，用手輕彈試管，紅細(xì)胞像一縷煙似的立即上升，隨即成為均勻的懸液;輕微凝集的，必須將液體轉(zhuǎn)到載玻片上鏡檢后判定凝集程度。,試管

4、法(反定型),Ac Bc Oc 受檢者血清 2滴 2滴 2滴 5%的A型紅細(xì)胞懸液 1滴 5%的B型紅細(xì)胞懸液 1滴 5%的O型紅細(xì)胞懸液 1滴 立即以1000rpm離心1分鐘或3000rpm離心15秒。 輕輕扣動試管底部，觀察結(jié)果-同前,血型判定swf,五 注意事項,玻片、試管都要標(biāo)記！， A及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對不能相混,不要依靠用染料顏色標(biāo)記血清。工作中要形成自己的習(xí)慣！ 所用玻片、試管實驗前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。 紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清液面，竹簽一端去混勻一側(cè)就不能去接觸另一側(cè)。 一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，便于核實是否漏加血清。 離心時間、速度嚴(yán)格要求，以防假陽

5、 性或假陰性結(jié)果。 試驗用血清和試劑紅細(xì)胞都應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化。 要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時應(yīng)注意觀察凝集強(qiáng)度，有助于A、B亞型的發(fā)現(xiàn)，觀察后立即記錄觀察結(jié)果。,正反定型結(jié)果不一致的常見原因有哪些？,（）人為因素：試劑不標(biāo)準(zhǔn)、失效或污染；操作中加錯樣本或試劑、離心速度不足或過度、細(xì)胞與血清比例不當(dāng)、結(jié)果判斷錯誤等。 （）客觀因素：因某些疾病導(dǎo)致抗原減弱如：白血病，MDS（骨髓增生異常綜合征）患者血型抗原減弱導(dǎo)致誤定血型。受檢者抗體效價低（如嬰幼兒、老年人、大量輸液的患者，血漿蛋白低下等）某些藥物干擾如輸注右旋糖酐后會干擾血型檢定。,為什么這次試驗沒有安排玻片法的反定型？,因為存在于病人或獻(xiàn)血者血清中的抗及抗，個體差異很大，如果效價較弱，在玻片上不足以凝集大量抗原陽性的紅細(xì)胞，造成假陰牲的結(jié)果所以采用玻片法作反定型的結(jié)果常不可靠。而用試管離心法作反定型，則促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)，形成肉眼可見的凝塊，使結(jié)果更為可靠,二 實驗原理,血型就是紅細(xì)胞膜上特異抗原的類型。在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。血型鑒定是將受試者的紅細(xì)胞加入標(biāo)準(zhǔn)A型血清（含有抗B抗體）與標(biāo)準(zhǔn)B