1、1,第五章 核酸類藥物,2,第一節(jié) 概述,核酸是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子，攜帶和傳遞遺傳信息。,3,98%分布于細(xì)胞核，其余分布于核外如線粒體，葉綠體。,主要分布于細(xì)胞質(zhì)（90%），剩余10%位于細(xì)胞核。,(deoxyribonucleic acid, DNA),(ribonucleic acid, RNA),脫氧核糖核酸,核糖核酸,攜帶遺傳信息，決定細(xì)胞和個(gè)體的基因型(genotype)。,參與細(xì)胞內(nèi)DNA遺傳信息的表達(dá)。某些病毒RNA也可作為遺傳信息的載體。,核酸,堿基,戊糖,核苷,磷酸,核苷酸,4,核酸類藥物是具有藥用價(jià)值的核酸、核苷酸、核苷以及堿基的統(tǒng)稱。除了天然存在的堿基、

2、核苷、核苷酸外，它們的類似物、衍生物或這些類似物、衍生物的聚合物也屬于核酸藥物。,5,一、RNA的制備 （一）材料的選擇與預(yù)處理 制備RNA的材料要選擇含核酸量豐富的組織。 RNA的含量和細(xì)胞的活躍程度有關(guān)，在蛋白質(zhì)合成旺盛的細(xì)胞中，其核酸的含量也相應(yīng)地較高。,第二節(jié) 核酸類藥物的一般制備方法,6,1. 酸處理法 將經(jīng)酸和有機(jī)溶劑處理后的殘留物用1mol/L的過氯酸液于4下處理18 h，從中抽提出RNA，沉淀部分再用0.5mol/L的過氯酸液70 下處理20 min提取DNA。 此法的缺點(diǎn)是有些材料的DNA在冷過氯酸抽提時(shí)被少量提取，從而使RNA部分中混有少量的DNA。 2. 堿處理法 將殘留

3、物用1mol/L的NaOH溶液于37 處理過夜，則RNA被堿解為堿溶性核苷酸，DNA不溶解。加入過氯酸或三氯乙酸使溶液酸化，至酸濃度為5%-10%,此時(shí)，RNA的分解產(chǎn)物溶解在上清液中，DNA等則被沉淀下來。此法的優(yōu)點(diǎn)是RNA和DNA分開得較為徹底，缺點(diǎn)是RNA中還含有其他含磷化合物，如磷肽，磷酸肌醇等。,7,（二）提取與純化,1. 提取 （1）乙醇沉淀法 （2）去污劑處理法 （3）酚法,8,2. 純化 （1）密度梯度離心法 （2）柱色譜法 （3）凝膠電泳法,9,（三）含量測定,定磷法 （1）核酸樣品用硫酸消化，將有機(jī)磷轉(zhuǎn)化成無機(jī)磷； （2）制定定磷標(biāo)準(zhǔn)曲線； （3）測定回收率和樣品總磷量。

4、(NH4)MoO4+H2SO4 H2MoO4+(NH4) 2SO4 H3PO4+12H2MoO4 H3P(Mo3O10) 4+12H2O H3P(Mo3O10) 4 Mo2O3 MoO3（鉬藍(lán)） 定糖法,Vit C,RNA中的戊核糖可在鹽酸的水解作用下游離出來，進(jìn)一步形成糠醛，然后與地衣酚反應(yīng)，反應(yīng)物程鮮綠色，在670nm有最大吸收峰。,10,二、DNA的制備,材料的選擇與處理 2. 提取與純化 3. 含量測定 （1）定磷法 同RNA （2）定糖法 又稱二苯胺法，在酸性溶液中，將DNA與二苯胺共熱，形成藍(lán)色化合物，該化合物在595nm有最大吸收。當(dāng)DNA濃度在20-200ug/mL時(shí)，光吸收度

5、與DNA濃度呈正比。,11,三、核苷酸、核苷及堿基的制備,（一）制備方法 1. 直接提取法 2. 水解法 （1）酶水解法 （2）堿水解法 （3）酸水解法 3. 化學(xué)合成法 4. 酶合成法 5. 微生物發(fā)酵法,12,光合磷酸化法制備ATP的工藝流程,13,ATP的藥理作用與臨床應(yīng)用,在生物體內(nèi)，ATP廣泛參與各種生化過程，除參與核酸形成外，主要起著供應(yīng)能量和磷酸基團(tuán)的作用。 ATP除了作為危重病人搶救的輔助藥物外，還可對(duì)慢性肝炎、肝硬化、腎炎、心肌炎、冠狀動(dòng)脈硬化、進(jìn)行性肌肉萎縮、再生障礙性貧血、腦血管意外后遺癥、中心性血管痙攣性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、耳聾、耳鳴等有一定療效。,14,第五

6、章 酶類藥物,15,第一節(jié) 概述,一、酶類藥物發(fā)展簡史,酶類藥物是直接用各種劑型的酶以改變體內(nèi)酶活力，或改變體內(nèi)某性質(zhì)生物活性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的數(shù)量等，從而達(dá)到治療某些疾病的目的。 1926年，Sumner將尿素酶結(jié)晶是藥用酶工業(yè)化的起點(diǎn)。 1952年，Innerfield首次將結(jié)晶的胰蛋白酶用于治療血栓性靜脈炎，真正揭開了酶在醫(yī)療應(yīng)用的序幕。 20世紀(jì)60年代后期，逐漸發(fā)展到從微生物發(fā)酵液中獲得大量的酶。 70年代后，開始利用人的某些組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和基因工程手段來獲取有關(guān)的酶，使酶類藥物的應(yīng)用得到了迅速發(fā)展。,16,對(duì)酶類藥物的要求,1. 藥用酶應(yīng)在生理環(huán)境（pH中性）下具有最高活力和穩(wěn)定性

7、。 2. 對(duì)其作用的底物具有較高的親和力。 3. 在血清中半衰期較長。 4. 要求純度高，特別是對(duì)注射用的酶類藥物純度要求更高。 5. 酶應(yīng)免疫源性較低或無免疫源性。,17,二、酶的分子組成及分類,1. 酶分子的組成 單體酶 寡聚酶 多酶復(fù)合體,18,2. 酶的分類,19,三、酶類藥物的臨床應(yīng)用,1. 消化酶類 2. 抗炎、黏痰溶解酶 3. 與纖維蛋白溶解作用有關(guān)的酶類 4. 抗腫瘤的酶類 5. 其它生理活性酶 6. 復(fù)合酶,20,表6-2 酶類藥物一覽表,21,22,第二節(jié) 酶類藥物的一般制備方法,酶制備過程的特點(diǎn)： 一是某種酶在生物體內(nèi)含量甚少，且有分布部位特異性。 二是酶可以通過測定其活

8、力加以跟蹤。 酶制備一般包括四個(gè)步驟：酶的原材料的選擇與處理；酶的提?。幻傅募兓?；酶活力的測定和純度檢測。,23,一、酶的原材料選擇與預(yù)處理,（一）原材料的選擇 （1）了解目的酶在生物材料中的分布特點(diǎn)，選擇適宜的生物材料。 （2）考慮生物在不同發(fā)育階段及營養(yǎng)狀況時(shí)，酶含量的差別及雜質(zhì)干擾的情況。 （3）原料來源是否豐富，原料易得，原料產(chǎn)地較近。 （4）提取步驟是否簡便易行。 用植物組織作原料，要擇時(shí)采集并就地去除不用部分，將有用部分保鮮處理。,24,（二）原材料的預(yù)處理,1. 機(jī)械法 2.反復(fù)凍融法 3. 超聲波法 4. 酶解法 5. 丙酮粉法,25,二、酶的提取 1. 水溶液法 常用稀鹽溶液

9、或緩沖液提取，經(jīng)過預(yù)處理的原料，包括組織糜，勻漿，細(xì)胞顆粒，丙酮粉都可用水溶液抽提。 水溶液的pH選擇對(duì)抽提具有影響，應(yīng)考慮的因素有： 酶的穩(wěn)定性 酶的溶解性 酶與其他物質(zhì)結(jié)合的性質(zhì) 選擇pH的總原則是，在酶穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，選擇偏離等電點(diǎn)的適當(dāng)?shù)膒H。,26,2. 有機(jī)溶劑法 某些結(jié)合酶，由于和脂質(zhì)結(jié)合牢固，需用有機(jī)溶劑除去脂質(zhì)，且不能使酶變性。常用有機(jī)溶劑是丁醇。 丁醇性質(zhì)：親脂性強(qiáng)、兼具親水性、在脂與水分子間能起表面活性劑的橋梁作用。 丁醇提取方法：均相法和兩相法 3. 表面活性劑法,27,三、酶的純化,不同的酶，因性質(zhì)不同，其純化工藝可能有很大不同。 評(píng)價(jià)一個(gè)純化工藝好壞，主要看兩個(gè)指

10、標(biāo)：酶比活和總活力回收率。 （一）雜質(zhì)的除去 1. 調(diào)pH和加熱沉淀法（核糖核酸酶，溶菌酶的提?。?2. 蛋白質(zhì)表面變性法（CAT用氯仿提?。?3. 選擇性變性法（細(xì)胞色素C可用三氯醋酸提取） 4. 降解或沉淀核苷酸法 5. 利用結(jié)合底物保護(hù)法除去雜蛋白（D-甲基苯甲酸為D-氨基酸氧化酶的保護(hù)劑）,28,（二）脫鹽和濃縮 1. 脫鹽 （1）透析 （2）凝膠過濾 2. 濃縮 （1）蒸發(fā) （2）超濾法 （3）凝膠吸水法 （4）冷凍干燥法,29,（三）酶的結(jié)晶,1. 鹽析法 2. 有機(jī)溶劑法 3. 透析平衡法 4. 等電點(diǎn)法,30,四、酶活力的測定與純度檢驗(yàn),1. 活力測定 無論在酶的抽提純化過程中

11、或是對(duì)酶的性質(zhì)進(jìn)行研究過程中為了了解所選擇方法是否適宜，幾乎每一步驟前后都應(yīng)進(jìn)行酶的活力測定，做出總活力和比活力的比較。 2.純度檢測 在酶的分離提純中，總活力用于計(jì)算某一抽提或純化步驟后酶的回收率（Y），而比活力則用于計(jì)算某一純化步驟的效果，即純度的提高（E），其關(guān)系如下： Y=某步驟后的總活力/某步驟前的總活力 E=某步驟后的比活力/某步驟前的比活力,31,五、菠蘿蛋白酶,是從菠蘿汁或加工菠蘿削下的廢皮中提取的一種蛋白水解酶，粗菠蘿水解酶是各種成分的混合物，除蛋白水解酶系外，還含有磷酸酯酶、過氧化物酶、纖維素酶、其它糖苷酶及非蛋白物質(zhì)。 實(shí)驗(yàn)證明，菠蘿蛋白酶具有消炎抗水腫作用，作用特點(diǎn)是能

12、選擇性水解纖維蛋白，對(duì)與凝血有關(guān)的纖維蛋白原僅有微弱的作用，不影響正常血液的凝固。能分解肌纖維，可單獨(dú)或與胰蛋白酶制成合劑使用，消除各種單純性炎癥、水腫、血腫，促進(jìn)抗生素和化療藥物的滲透和擴(kuò)散。 臨床適用于治療支氣管哮喘、急性肺炎、產(chǎn)后乳房充血、乳腺炎、產(chǎn)后血栓靜脈炎、視網(wǎng)膜炎等。試用于同抗生素配伍治療關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)周圍炎、蜂窩組織炎和小腿潰瘍等。,32,（一）化學(xué)性質(zhì)和組成 白色至淺棕黃色無定形粉末。略溶于水，水溶液無色至淡黃色，有時(shí)有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚，為一種巰基酶。半胱氨酸能激活酶的活性，但受重金屬抑制。最適pH7.0，相對(duì)分子量33000。 主要作用原理：使多肽類水解為低分子

13、量的肽類。,33,（二）生產(chǎn)工藝（白陶土吸附法）,（吸附） 白陶土 10,菠蘿蛋白酶成品,濕菠蘿蛋白酶精制品,澄清液,粗制品,（沉淀） HCl pH4,（溶解） 自來水， NaOH,洗脫液,（鹽析、抽濾） HCl，（NH4）2SO4 pH=4.55,吸附物,（洗脫） Na2CO3或NaOH （NH4）2SO4 pH=6.57,壓出液,菠蘿皮,（壓榨） 苯甲酸鈉,（干燥、粉碎）,pH77.5,34,（三）檢驗(yàn)方法,1. 性狀 富有菠蘿香氣，淺黃色或淺棕黃色粉末。 2. 蛋白酶水解活力測定 （1）原理 菠蘿蛋白酶在一定溫度與pH條件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸終止酶反應(yīng)，并沉淀除去未水解的

14、蛋白，濾液對(duì)紫外光有吸收，用紫外分光光度計(jì)法測定，根據(jù)吸光度計(jì)算酶活力。 （2）酶活力單位定義 在測定條件下 pH7.0，（37+0.2），每分鐘水解酪蛋白釋放出的三氯乙酸可溶物在275nm的吸光度與1g酪氨酸的吸光度相當(dāng)時(shí)，所需酶量為1U。,35,（3）測定步驟 適當(dāng)稀釋樣品后，精密量取樣品待測液1mL，置于具塞試管中，于，37預(yù)溫10min，迅速加入37預(yù)溫的酪蛋白溶液5mL，從開始加入起準(zhǔn)確反應(yīng)10min，加入三氯乙酸溶液5mL，混勻，保溫10min后過濾。 另量取1mL待測樣品液于37預(yù)溫10min，精密加入三氯乙酸溶液5mL，準(zhǔn)確反應(yīng)10min，加入酪蛋白溶液5mL，搖勻，保溫10m

15、in后過濾，濾液作為上述溶液的空白對(duì)照。用分光光度計(jì)在275nm的波長處測吸光度A。 以水做空白對(duì)照，在275nm的波長處測定50g/mL酪氨酸吸光度A。,36,（四）菠蘿蛋白酶在醫(yī)藥、保健品業(yè)的應(yīng)用 1、抑制腫瘤細(xì)胞的生長 經(jīng)相關(guān)臨床研究觀察表明，菠蘿蛋白酶能抑制腫瘤細(xì)胞的生長。 2、對(duì)心血管疾病的防治 菠蘿蛋白酶作為蛋白水解酶對(duì)心血管疾病的防治是有益的。它能抑制血小板聚集引起的心臟病發(fā)作和中風(fēng), 緩解心絞痛癥狀,緩和動(dòng)脈收縮, 加速纖維蛋白原的分解。 3、用于燒傷脫痂 菠蘿蛋白酶能選擇性地除 皮, 使新皮移植得以盡早進(jìn)行。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明, 菠蘿蛋白酶對(duì)鄰近的正常皮膚無不良影響。局部使用抗生素

16、不影響菠蘿蛋白酶的效果。,37,4、消炎作用 菠蘿蛋白酶在各種組織中能有效地治療炎癥和水腫(包括血栓靜脈炎、骨骼肌損傷、血腫、口腔炎、糖尿病人潰瘍及運(yùn)動(dòng)損傷)，菠蘿蛋白酶具有激活炎癥反應(yīng)的潛力。菠蘿蛋白酶還可治療腹瀉。 5、增進(jìn)藥物吸收 將菠蘿蛋白酶與各種抗生素(如四環(huán)素, 阿莫西林等)聯(lián)用, 能提高其療效。相關(guān)研究表明, 它能促進(jìn)抗生素在感染部位的傳輸, 從而減少抗生素的用藥量。據(jù)推斷, 對(duì)于抗癌藥物, 也有類似的作用。此外，菠蘿蛋白酶能促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。,38,第七章 多糖類藥物,第一節(jié) 糖類藥物概述 按照含有糖基數(shù)目的不同分為: 單糖：葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖和維生素C等。 低聚糖：蔗

17、糖、麥芽糖、乳糖等。 多糖：（糖類藥物研究的最多是多糖類藥物 ）多糖如有旋糖酐、甘露聚糖、香菇多糖、茯苓多糖等。 還有一些糖類藥物是糖的衍生物，如6-磷酸葡萄糖，1，6-二磷酸果糖，磷酸肌醇等。,39,多糖的藥理作用,（1）調(diào)節(jié)免疫功能 主要表現(xiàn)為影響抗體活性，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，激活或提高吞噬細(xì)胞的功能。增強(qiáng)機(jī)體的抗炎、抗氧化和抗衰老作用。 （2）抗感染作用，多糖可以提高機(jī)體組織細(xì)胞對(duì)細(xì)菌，原蟲，病毒和真菌感染的抵抗力。 （3）促進(jìn)細(xì)胞DNA，蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、生長。,40,（4）抗輻射損傷作用，抗射線的損傷，有抗氧化、防輻射作用。 （5）抗腫瘤和抗凝血作用，肝素是天然抗凝劑。 （

18、6）降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化功能。硫酸軟骨素、小分子肝素、殼聚糖等具有降血脂、降血膽固醇，抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，用于防治冠心病和動(dòng)脈硬化。,41,多糖,結(jié)合型,游離型,脂多糖：與脂類結(jié)合在一起,糖蛋白：與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起,多糖的相對(duì)分子量較大，有直鏈和支鏈兩種，多可溶于水，水溶液具有一定的黏度，能被酸、堿和酶水解成單糖或低聚糖。,42,多糖根據(jù)來源不同可分為： (1) 植物多糖：黃芪多糖，人參多糖。 (2) 動(dòng)物多糖：肝素，透明質(zhì)酸，硫酸軟骨素等。 (3) 微生物多糖：香菇多糖，靈芝多糖。,43,第二節(jié) 糖類藥物的一般制備技術(shù),一、單糖、低聚糖及其衍生物的制備 用水或在中性條件下以50乙醇，也可以

19、用82乙醇，在7078下回流提取。溶劑用量一般為材料的10倍，需多次提取。 植物材料磨碎經(jīng)乙醚或石油醚脫脂，拌加碳酸鈣，以50乙醇溫浸，浸液合并，于4045減壓濃縮至適當(dāng)體積，用中性醋酸鉛去雜蛋白及其他雜質(zhì)，鉛離子可通H2S除去，再濃縮至粘稠狀。 以甲醇或乙醇溫浸，去不溶物如無機(jī)鹽或殘留蛋白質(zhì)等。 醇液經(jīng)活性炭脫色、濃縮、冷卻、滴加乙醚，或置于硫酸干燥器中旋轉(zhuǎn)，析出結(jié)晶。單糖或小分子寡糖也可以在提取后，用吸附層析法或離子交換法進(jìn)行純化。,44,二、多糖的分離與純化,多糖可來自動(dòng)物、植物和微生物 ，植物體內(nèi)含有水解多糖衍生物的酶，必須抑制或破壞酶的作用后，才能制取天然存在形式的多糖。 提取多糖的

20、材料必須新鮮或及時(shí)干燥保存，避免受高溫破壞因此，速凍冷藏是保存材料的有效方法。 提取所用溶劑根據(jù)多糖的溶解性質(zhì)而定。,45,（一）多糖的提取 提取多糖時(shí)，一般先需進(jìn)行脫脂，以便多糖釋放。方法是將材料粉碎，用甲醇或11乙醇乙醚混合液，加熱攪拌13小時(shí)，也可用石油醚脫脂。動(dòng)物材料可用丙酮脫脂、脫水處理。,46,1、稀堿液提取 用于難溶于冷水、熱水，可溶于稀堿液者。這一類多糖主要是不溶性膠類，如木聚精、半乳聚糖等。用冷水浸潤材料后用0.5 molL NaOH提取，提取液用鹽酸中和、濃縮后，加乙醇沉淀得多糖。 如在稀堿中仍不易溶出者，可加入硼砂，對(duì)甘露聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸絡(luò)合物的多糖，此法可得相

21、當(dāng)純的物質(zhì)。,47,2、溫?zé)崴崛?易溶于溫水、難溶于冷水和乙醇者。材料用冷水浸過，用熱水提取，必要時(shí)可加熱至8090攪拌提取。 提取液用正丁醇與氯仿混合液除去雜蛋白（或用三氯乙酸除雜蛋白），離心除去雜蛋白后的清液，透析后用乙醇沉淀得多糖。,48,3、粘多糖 因大部粘多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合于細(xì)胞中，因此需用酶解法或堿解法使糖-白質(zhì)間的結(jié)合鍵斷裂，促使多糖釋放。 （1）堿解法 多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合的糖肽鍵對(duì)堿不穩(wěn)定，故可用堿解法使糖與蛋白質(zhì)分開。 （2）酶解法 蛋白酶水解法已逐步取代堿提取法而成為提取多糖的最常用方法。 鑒于蛋白酶不能斷裂糖肽鍵及其附近的肽鍵，為除去長肽段，常與堿解法合用。 常用的酶制劑有

22、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和鏈霉菌蛋白酶及枯草桿菌蛋白酶。,49,（二）多糖的純化 1. 乙醇沉淀法 乙醇沉淀法是制備粘多糖的最常用手段。乙醇的加入，改變了溶液的極性，導(dǎo)致糖溶解度下降。 向溶液中加入一定濃度的鹽，如醋酸鈉，醋酸鉀、醋酸銨或氯化鈉有助于使粘多糖從溶液中析出，鹽的最終濃度5即足夠。 多次乙醇沉淀法脫鹽，也可以用超濾法或分子篩法（SephadexG-10或G-15）進(jìn)行多糖脫鹽。 沉淀物可用無水乙醇、丙酮、乙醚脫水，真空干燥即可得疏松粉末狀產(chǎn)品。,50,2. 分級(jí)沉淀法 不同多糖在不同濃度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同濃度的有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀分子大小不同的粘多糖。 在Ca2

23、+、Zn2+等二價(jià)金屬離子的存在下，采用乙醇分級(jí)分離粘多糖可以獲得最佳效果。,51,3. 季胺鹽絡(luò)合法 粘多糖與一些陽離子表面活性劑如十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）和十六烷基氯化砒啶（CPC）等能形成季胺鹽絡(luò)合物。 絡(luò)合物在低離子強(qiáng)度的水溶液中不溶解，在離子強(qiáng)度大時(shí)，絡(luò)合物可以解離、溶解、釋放。,52,（三）多糖藥物的鑒定檢測方法,1. 定量測定 （1）苯酚-硫酸法 （2）蒽酮-硫酸法 （3）氨基己糖的比色測定 先在鹽酸溶液中將氨基己糖經(jīng)堿性乙?；?，再與對(duì)二甲基苯甲酸發(fā)生呈色反應(yīng)，從而進(jìn)行定量測定。,53,2.鑒別,（1）測定糖基組成 （2）高壓電泳法鑒定多糖均一性 （3）超離心法鑒定多糖

24、均一性 （4）凝膠柱色譜法鑒定多糖均一性 （5）分子量測定,54,第三節(jié) 香菇多糖,一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 為白色粉末狀固體，對(duì)光和熱穩(wěn)定。溶于水和0.5mol/L的NaOH，不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。,55,二、生產(chǎn)工藝,1.常規(guī)提取法 鮮香菇 搗碎 浸漬 過濾 濃縮 乙醇沉淀 乙醇、乙醚洗滌 干燥 成品 2. 復(fù)合酶提取法 3. 深層培養(yǎng)提取法,56,三、質(zhì)量檢測,1.試劑 濃硫酸：分析純，95.5% 苯酚：80g苯酚加20g水使之溶解，可置冰箱中長期貯存。 6%苯酚：臨用前用80%苯酚配制。 標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖、葡萄糖或標(biāo)準(zhǔn)香菇多糖。,57,2. 方法 （1）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖20

25、mg溶于500mL容量瓶中加水至刻度，分別吸取0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL及，1.8mL各用水補(bǔ)充至2.0mL，然后加入6%苯酚1.0mL以及濃硫酸5.0mL，靜止10min，搖勻，室溫放置20min。在490nm處測光密度，以2.0mL水按同樣顯色操作作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。 （2）樣品含量測定。吸取1mL樣品，按上述步驟操作，測光密度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量。,58,第八章 脂 類 藥 物,第一節(jié) 概 述,脂類物質(zhì)是廣泛存在于生物體中的脂肪及類似脂肪的、能夠被有機(jī)溶劑提取出來的化合物，由于分子中的碳?xì)?/p>

26、比例都較高，能夠溶解在乙醚、氯仿、苯等有機(jī)溶劑中，不溶于水。脂類化合物的這種性質(zhì)，稱之為脂溶性，利用這一性質(zhì)，將脂類物質(zhì)用有機(jī)溶劑從生物體中提取出來。 實(shí)際上，脂類藥物往往是互溶在一起的，依據(jù)脂溶性這一共同特點(diǎn)歸為一大類成為脂類，而不是一個(gè)準(zhǔn)確的化學(xué)名詞。,59,脂類藥物是具有重要生理生化、藥理藥效作用的脂類物質(zhì)。 大體可分為以下幾類： 膽汁酸類，如膽酸、脫氧膽酸。 不飽和脂肪酸類，如花生四烯酸、亞麻油酸等； 磷脂類，如：卵磷脂、腦磷脂； 固醇類，如：膽固醇、麥角固醇； 色素類，如：膽紅素、血紅素等； 其他，如鯊烯等。,60,一、脂類藥物的制備方法 1. 直接抽提法 2. 水解法 3. 化學(xué)合成 4. 生物合成法,61,二、脂類藥物的分離,1. 溶解度法 2. 吸附分離法 3. 超臨界流體萃取技術(shù),62,超臨界流體（supercritical fluid, SF） 是指某種氣體（液體）或氣體（液體）混合物在操作壓力和溫度均高于臨界點(diǎn)時(shí)，使其密度接近液體，而其擴(kuò)散系數(shù)和黏度均接近氣體，其性質(zhì)介于氣體和液體之間的流體。 超臨界流體萃取法（supercritical fluid extraction, SFE）技術(shù)就是利用超臨界流體為溶劑，從固體或液體中萃取出某些有效組分，并進(jìn)行分離的一種技術(shù)。 超臨界流體萃取法的特點(diǎn)在于充分利用超臨界流體兼有氣、液兩重性的特點(diǎn)