1、HIV、TP、HCV的檢驗(yàn)及意義,1,HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),2,檢測(cè)樣本,HIV抗體 酶免-血清/血漿，尿液 快速檢測(cè)-血清/血漿/全血，唾液 CD4：抗凝全血 病載、基因型、耐藥：血漿,3,樣本保存,抗體檢測(cè)：短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于28， 一周以上應(yīng)存放于-20以下。 篩查陰性樣品，建議至少保存12個(gè)月； 篩查陽(yáng)性樣品，無(wú)論確證結(jié)果如何，均應(yīng)將剩余的樣品保存至少10年 核酸檢測(cè)：血漿4天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于4，3個(gè)月以內(nèi)應(yīng)存放于-20以下，3個(gè)月以上應(yīng)置于-70以下。 CD4：室溫（1825）保存和運(yùn)輸。要求48小時(shí)內(nèi)染色，染色后6小時(shí)內(nèi)分析；如采血后24小時(shí)內(nèi)染色，可在染色后24小時(shí)

2、內(nèi)分析。,4,HIV抗體檢測(cè),篩查試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn) 快速檢測(cè)（RT） 確證試驗(yàn) 免疫印跡試驗(yàn)（WB） 條帶免疫試驗(yàn) 放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA） 免疫熒光試驗(yàn)（IFA）,5,初篩和復(fù)檢流程,6,確證流程,7,質(zhì)量控制,試劑盒內(nèi)部對(duì)照 ：按照試劑盒要求設(shè)置 使用室內(nèi)質(zhì)控品：外購(gòu)、陽(yáng)性對(duì)照/樣本稀釋 ELISA檢測(cè) 20次內(nèi)即刻法質(zhì)控 20次后， Levey-Jennings質(zhì)控圖 更換試劑廠家必須重新制作質(zhì)控圖， 同種試劑不同批號(hào)可繼續(xù)使用（注明批號(hào)） 發(fā)現(xiàn)失控、位移及時(shí)查找原因，必要時(shí)重新開始質(zhì)控 快速檢測(cè) 更換批號(hào)進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)證 注意反應(yīng)時(shí)間、溫度、

3、數(shù)量控制,8,設(shè)備檢定、維護(hù),強(qiáng)檢設(shè)備 酶標(biāo)儀、移液器、高壓鍋、溫度計(jì)（可自行比對(duì)） 自行維護(hù) 生物安全柜、洗板機(jī)、洗眼器、水平（梅毒）旋轉(zhuǎn)儀 溫度控制 冰箱、溫箱/水浴箱內(nèi)放置經(jīng)檢定（比對(duì)）的溫度計(jì) 高壓滅菌放置指示卡 洗眼器定期進(jìn)行維護(hù),9,SOP文件,（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運(yùn)輸； （2）檢測(cè)方法和步驟； （3）試劑使用和保存； （4）儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)； （5）質(zhì)量控制要求及程序； （6）結(jié)果解釋與報(bào)告； （7）保密程序； （8）實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存； （9）不確定樣品追蹤和處理； （10）實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)及實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒。,10,實(shí)驗(yàn)室記錄,檢測(cè)登記表 試驗(yàn)

4、原始記錄（ ELISA、快速、RPR/TURST ） 報(bào)告單/化驗(yàn)單 復(fù)檢化驗(yàn)單篩查陽(yáng)性填寫，信息收集完整 儀器使用、維護(hù)保養(yǎng)記錄 質(zhì)控資料 消毒記錄 廢棄物處理登記 冰箱溫度記錄 人員健康檔案（體檢、疫苗接種記錄，化驗(yàn)單、體檢報(bào)告）,11,實(shí)驗(yàn)室生物安全,實(shí)驗(yàn)室：級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2） 建立安全制度：S-SOP、意外事故處理預(yù)案、信息安全及保密制度 培訓(xùn)和管理：全員培訓(xùn)、標(biāo)準(zhǔn)防護(hù)原則 個(gè)人防護(hù)：防護(hù)用品與設(shè)施、健康監(jiān)護(hù) 安全操作：樣品采集與管理、儀器設(shè)備使用、利器使用 消費(fèi)與污物處理,12,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù),13,梅毒螺旋體-梅毒的病原體分類：,螺旋體目（Spirochaetale

5、s） 螺旋體科（Spirochaetaceae） 密螺旋體屬（Treponema） 蒼白螺旋體種（Treponema pallidum） 分幾個(gè)亞種,14,梅毒螺旋體（TP）,小而纖細(xì)的螺旋狀微生物 長(zhǎng)520m，粗細(xì)0.2m 有6 12個(gè)規(guī)則的螺旋 基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞 行動(dòng)緩慢而有規(guī)律 - 圍繞其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)中前后移動(dòng) - 伸縮其圈間之距離而移動(dòng) - 全身彎曲如蛇行,15,生物學(xué)特性-1,免疫性：人對(duì)TP產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫。細(xì)胞免疫對(duì)感染過(guò)程的影響尚不清楚。 特異性抗體：TP可導(dǎo)致人體產(chǎn)生多種抗體。其中 TP的脂質(zhì)激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生的特異性抗體，在初次感染后產(chǎn)生，保持終生，但

6、對(duì)清除機(jī)體內(nèi)的TP無(wú)作用。另一些種特異性抗體可與很多種非致病性螺旋體發(fā)生交叉反應(yīng)。,16,生物學(xué)特性-2,反應(yīng)素：TP破壞機(jī)體組織，使組織釋放一種抗原性心磷脂,以及螺旋體自身的磷脂類物質(zhì)，可以激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生反應(yīng)素，能同從動(dòng)物如牛心肌中提取的心磷脂發(fā)生反應(yīng)，通過(guò)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。 反應(yīng)素水平與梅毒感染過(guò)程相平行，抗梅治療后約半年轉(zhuǎn)陰，但反應(yīng)素并非感染TP后所特有。,17,生物學(xué)特性-3,致病性：自然條件下TP只感染人，尚未證明梅毒螺旋體能產(chǎn)生內(nèi)毒素和外毒素，致病機(jī)理尚不清楚。 傳染性：感染早期傳染性最強(qiáng)，隨著病程的延長(zhǎng)傳染性越來(lái)越小。臨床上未經(jīng)治療的病人，在感染后12年內(nèi)最具有傳染性，一般認(rèn)為4年以上幾

7、乎不通過(guò)性接觸傳染，但保持對(duì)胎兒的傳染性。 抵抗力：TP在體外僅能存活數(shù)小時(shí)，40時(shí)失去傳染力，煮沸立即死亡；對(duì)干燥特別敏感，一般的消毒劑均能容易將其殺滅。血庫(kù)的血液和血漿中可存活24小時(shí)以上，三日后全部死亡。,18,生存條件,厭氧寄生物，在人體內(nèi)可長(zhǎng)期生存，體外不易存活 干燥、肥皂水及一般消毒劑如1:1000苯酚、新潔爾滅、酒精均可于短時(shí)間將其殺死 在血液中4經(jīng)3日可死亡，故在血庫(kù)冰箱冷藏3日以上的血液就無(wú)傳染性 溫度的影響：41-42時(shí)可生活1-2小時(shí)，在48僅半小時(shí)即失去感染力，100立即死亡。對(duì)寒冷抵抗力強(qiáng)，在0時(shí)，可生活48小時(shí)，如將梅毒病損標(biāo)本置于冰箱內(nèi)，經(jīng)1周仍可致病。在低溫（-

8、78）保存數(shù)年，仍可保持其形態(tài)、活動(dòng)及毒性 在封存的生理鹽水稀釋的組織液中可生活10小時(shí)左右 在潮濕的器具或濕毛巾中，亦可生存數(shù)小時(shí) 在干燥環(huán)境中可見迅速死亡,19,宿 主,梅毒螺旋體只感染人類 人是梅毒的唯一傳染源,20,傳播途徑,性接觸是主要的傳染途徑 未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性 隨著病期的延長(zhǎng)，傳染性越來(lái)越小 到感染后4年，通過(guò)性接觸一般無(wú)傳染性 母 嬰 傳 播 在妊娠7周時(shí)，梅毒螺旋體即可通過(guò)胎盤傳染（未經(jīng)治療者），病期4年雖已無(wú)性傳播，但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒,病期越長(zhǎng)，傳染性越小;,21,常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法,病原學(xué)檢測(cè) 血清學(xué)檢測(cè),22,病原學(xué)檢查,原理：一期、二

9、期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行檢測(cè)。 方法：（1）暗視顯微鏡檢查 （2）鍍銀染色法 （3）核酸檢測(cè)（血液標(biāo)本？） 注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功，僅能通過(guò)接種兔睪丸等部位進(jìn)行有限增殖。,23,病原學(xué)檢查的臨床意義,螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對(duì)于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。 如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。,24,梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法,(1) 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)

10、 （非特異性梅毒抗體） (2) 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （特異性梅毒抗體）兩類方法。 問題： 為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測(cè)方法？,25,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理,梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對(duì)螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。 未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長(zhǎng)期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。 問題： 臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么需要做定性和定量?jī)煞N檢測(cè)方法？,26,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理,方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn) (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）

11、（3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn) (VDRL)等。 基本成分是心磷脂 卵磷脂和膽固醇 抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見 上述方法的敏感性和特異性都基本相似,27,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖,28,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn),1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速？轉(zhuǎn)幅？,2、定性試驗(yàn) 加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi) 加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原 反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果,？滴/mL，1滴=？ul,29,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn),1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)幅,2、定性試驗(yàn)

12、 加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi) 加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原 反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果,60滴/mL，1滴=17ul,100r/min 約18mm,30,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn),3、定量試驗(yàn) 稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開 加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。 下同定性試驗(yàn)。,？,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:256,1:128,1:512,問題：定量試驗(yàn)原倍血清滴度是多少？,問

13、題：定量試驗(yàn)血清稀釋需要使用試管嗎？,31,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn),3、定量試驗(yàn) 稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開 加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。 下同定性試驗(yàn)。,1:1,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:256,1:128,1:512,32,TRUST 1:16,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷,RPR 1:256,1:1,1:2,1:4,1:8,1:16,1:1,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512,1:32,1:6

14、4,1:128,1:256,1:512,33,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義,早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽(yáng)性。,34,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。 因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。,35,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn),假陽(yáng)性反應(yīng) 技術(shù)性假陽(yáng)性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽(yáng)性反應(yīng)，經(jīng)過(guò)重復(fù)試驗(yàn)即可排除。 生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)(一般滴

15、度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)如TPPA等進(jìn)行排除。 假陰性反應(yīng)：前帶現(xiàn)象、后帶現(xiàn)象 血清固定：臨床問題,36,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理,抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測(cè)梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。 感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽(yáng)性，則患者終身陽(yáng)性。 問題：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的定量試驗(yàn)在梅毒診療中有意義嗎？,37,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn) (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn) (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(cè) (

16、RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）,38,TPPA,TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。 TPPA是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。,39,+,明膠顆粒,梅毒抗原,+,抗原致敏顆粒,抗原致敏顆粒,血液中抗體,抗原抗體凝集,TPPA試驗(yàn)原理示意圖,40,41,4+： 粒子光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊 3+： 粒子光滑覆蓋大部分底 2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細(xì)胞環(huán) 1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周圍有一明顯細(xì)胞環(huán)

17、 ： 粒子沉集孔底，中央形成一小點(diǎn) ： 粒子緊密沉積孔底中央,TPPA試驗(yàn)結(jié)果判讀,a:均為RPR陽(yáng)性標(biāo)本,41,ELISA/ CLIA,ELISA試驗(yàn)是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測(cè)儀判定試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)。 本法可用于大樣本血清檢測(cè)。 化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA 化學(xué)發(fā)光法的敏感性？,42,梅毒免疫層析快速檢測(cè)方法（全血法）,43,梅毒免疫層析快速檢測(cè)方法（血清、血漿法）,44,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽(yáng)性標(biāo)本的確證試驗(yàn)，排除RPR 假陽(yáng)性。 不能

18、區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。 不能作為療效觀察的指標(biāo)。,45,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋（梅毒臨床診斷參考依據(jù)）,問題：此結(jié)果解釋適用于先天（胎傳）梅毒嗎？,46,先天（胎傳）梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷 預(yù)防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實(shí)施方案,47,梅毒暴露嬰兒的評(píng)估,梅毒暴露嬰兒： 嬰兒RPR檢測(cè)不能使用臍帶血，因其易被母體血液污染，從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果 檢查先天梅毒臨床表現(xiàn)：非免疫性水腫、黃疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、末端肢體假性麻痹 對(duì)可疑病灶或體液進(jìn)行暗視野顯微鏡檢查,48,先天梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),梅毒暴露嬰兒： 暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽(yáng)性 梅毒螺旋體IgM抗體

19、陽(yáng)性* RPR/TRUST檢測(cè)陽(yáng)性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍及以上 RPR/TRUST監(jiān)測(cè)隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升 滿18月齡后， TPPA檢測(cè)陽(yáng)性（哪一類抗體？）,* IgM抗體反映近期感染，可幫助鑒別嬰兒先天梅毒,49,梅毒IgM抗體（TP-IgM）,IgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應(yīng)答反應(yīng)。IgM分子比IgG較大，所以IgM抗體不能通過(guò)胎盤屏障。而母親的IgG抗體可以通過(guò)胎盤屏障傳給胎兒。因此若在新生兒血中檢測(cè)到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據(jù)，而IgM抗體可為先天梅毒的診斷依據(jù)。 IgM抗體檢測(cè)其特異性較高，IgM抗體反映近期感染，可幫助鑒別嬰兒先天梅毒

20、。但敏感性較低，因此，IgM抗體檢測(cè)陰性，不能排除先天梅毒感染。,50,先天梅毒檢測(cè)流程,51,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略思考,方法選擇依據(jù) 敏感性、特異性（試劑評(píng)估） 操作流程（可及性） 試劑的價(jià)格、結(jié)果時(shí)間（可接收性） 根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。 可采用任何一類梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法作為篩查試驗(yàn)。,？初篩目的和方法選擇,52,53,54,陽(yáng)性,54,血清學(xué)檢測(cè)試劑的種類,55,HCV的檢測(cè)及意義,56,丙型病毒性肝炎為法定傳染性疾病。,57,Alberti, J Hepatol 1999; 31: 17-24 Seef, Hepatology 2002; 36: S35-46 Fan et al

21、, World J Gastroenterol 2004; 10: 2867-2869,在全球，丙肝是死亡率第十的傳染性疾病 在中國(guó)，丙肝是死亡率第五的傳染性疾病,丙肝： 高危害,通常為沉默感染，人體感染HCV20年、或更長(zhǎng)時(shí)間無(wú)任何癥狀表現(xiàn)。,58,丙肝：無(wú)預(yù)防性疫苗，但可治愈,丙肝疾病將是中國(guó)的沉重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān): 1170-2160億元/ 年 乙型肝炎疫苗的推廣，新感染病例顯著下降；由于丙型肝炎缺乏有效的預(yù)防性疫苗，有可能成為影響人民健康的主要肝臟疾病 我國(guó)首部丙肝防治指南所指出的，通過(guò)聚乙二醇干擾素+利巴韋林，使用足夠劑量治療一年，丙肝的治愈率可以達(dá)到七、八成左右，這也是目前國(guó)際上丙肝治療的

22、最佳方案。,Ghany M, et al. Hepatology 2009; 49: 133574,59,60,中國(guó)丙肝臨床早期篩查亟待加強(qiáng),中國(guó)疾病預(yù)防控制中心公共衛(wèi)生監(jiān)測(cè)與信息服務(wù)中心，施小明, 等. 疾病監(jiān)測(cè) 2006; 21: 493.,185/358,465/1826,100/432,數(shù)據(jù)源自國(guó)內(nèi)30個(gè)省(自治區(qū)、直轄市)共250家醫(yī)療機(jī)構(gòu)，采樣15501例，有效樣本13714例,丙肝是中國(guó)漏報(bào)率最高的法定傳染病,61,假陰性和假陽(yáng)性是困惑抗HCV檢測(cè)的主要問題,間接法自身的缺陷可能出現(xiàn)假陽(yáng)性和IgM的漏檢。采用第2代(Abbott)和第3代(Ortho)EIA試劑，假陽(yáng)性率可達(dá)30

23、% 抗原位點(diǎn)的選擇以及抗原的純化是影響檢測(cè)靈敏度和特異性的重要因素； SLE, RA，某些感染性疾病等引起高濃度的免疫球蛋白造成假陽(yáng)性（RF的干擾；高濃度非特異性IgG可吸附到固相載體上或包被的抗原上） SOD超氧化歧化酶干擾 廠家之間的靈敏度和特異性存在著一定差異，從而導(dǎo)致抗-HCV檢測(cè)結(jié)果不一致； 同一廠家的不同批試劑間亦會(huì)有較大差異。,62,采用間接ELISA法檢測(cè)抗體是評(píng)估HCV感染的初篩手段 HCV特異性抗體陽(yáng)性反映了患者體內(nèi)病毒存在，一旦抗HCV陽(yáng)性，終生難以轉(zhuǎn)陰。 HCV抗體檢測(cè)的雙抗原夾心ELISA法 HCV抗原檢測(cè)方法的建立 HCV的RNA和抗原在患者體內(nèi)呈間歇陽(yáng)性； 病毒基

24、因型復(fù)雜易變異，基因水平的檢測(cè)質(zhì)量不夠穩(wěn)定； 重組免疫印跡實(shí)驗(yàn)（RIBA）被認(rèn)為是HCV監(jiān)測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。,必須規(guī)范HCV實(shí)驗(yàn)檢測(cè)評(píng)估和報(bào)告體系,63,Chiron公司推出了相應(yīng)的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)重組免疫印跡實(shí)驗(yàn)（RIBA）。 RIBA被認(rèn)為是HCV抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。HCV抗體檢測(cè)結(jié)果不一致的標(biāo)本，使用確認(rèn)試劑檢測(cè)。 至少2條HCV特異性條帶且為1+的條帶反應(yīng)模式判讀為陽(yáng)性結(jié)果。陰性為無(wú)HCV特異性反應(yīng)條帶。,Recombinant immunoblot assay (RIBA),Other tests such as Matrix HCV 2.0(Abbott), Liatek-III (Organ

25、on), Inno-Lia HCV Ab III (Innogenetics), Murex Western blot (Abbott), Deciscan HCV Plus (Bio-Rad) and HCV blot 3.0 (Genelabs),RIBA被認(rèn)為是HCV抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。,64,HCV Blot 3.0（ MP，麗珠）（18/36T）,GST質(zhì)控帶,注：1，2，3為陽(yáng)性樣本 4為陰性樣本,萬(wàn)泰HCV RIBA試劑 （24T）,65,幾個(gè)月前報(bào)告“陽(yáng)性”，目前報(bào)告“陰性”？ 臨界值標(biāo)本、弱陽(yáng)性標(biāo)本，如何處理？ 產(chǎn)婦發(fā)現(xiàn)抗-HCV陽(yáng)性，可以哺乳嗎？ 無(wú)輸血及血制品史 偶爾在

26、外治療牙病 三家醫(yī)院結(jié)果為什么不一致？ A院“S/CO3.5”，B院“弱陽(yáng)”，C院“陰性” 老人內(nèi)鏡術(shù)后檢查抗-HCV陽(yáng)性，惹上麻煩？,問題舉例,66,結(jié)果“時(shí)（-）時(shí)（+）”,ELISA（+）、膠體金（-）”,67,醫(yī)院檢測(cè)（-）、而血站檢測(cè)（+）”,嬰幼兒結(jié)果“（弱+）”,68,某方法孕婦多次出現(xiàn)“（假+）”,并非僅僅是孕婦出現(xiàn)“（假+）”,69,對(duì)于不是很強(qiáng)的“（+）”結(jié)果的處理,出現(xiàn)“（+）”結(jié)果時(shí)的處理方式,70,遇見這樣的事情，您不困惑？,71,二、丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中的策略,72,丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范2011年9月20日頒布實(shí)施,起草單位： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心 使用范圍： 全國(guó)所有的丙型肝炎病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室 解釋權(quán)： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心 實(shí)施： 衛(wèi)生部授權(quán)，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心發(fā)布實(shí)施,73,在臨床診斷中規(guī)定了HCV抗體篩查陽(yáng)性反應(yīng)后必須進(jìn)行補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)（免疫印跡或核酸檢測(cè)） 在臨床診斷中引入S/CO比值的使用 明確了丙肝檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制,74,基本原則,1.對(duì)于篩查試驗(yàn)陰性樣品，不需要做進(jìn)一步檢測(cè)，可報(bào)告“抗HCV陰性” 2.對(duì)于篩查試驗(yàn)陽(yáng)性樣品，可選擇S/CO比值進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)，或非S/CO比值的補(bǔ)充試驗(yàn) a. 高比值，可報(bào)告“抗HCV陽(yáng)性”，不需要做補(bǔ)充試驗(yàn)；低比值，應(yīng)