1、橙皮中黃酮類化合物的提取研究,指導(dǎo)教師：孫衛(wèi)青 答 辯 人：徐江巖,目 錄,前言,1 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)簡介 2 生物活性 3 提取和測定方法的研究現(xiàn)狀 4 研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢 5 研究的目的和意義,結(jié)構(gòu)與性質(zhì)簡介,黃酮類化合物是植物光合作用產(chǎn)生的一類重要的天然有機(jī)化合物，泛指由兩個(gè)苯環(huán)(A環(huán)和B環(huán))通過三個(gè)碳鏈相互連接而成的一系列化合物(C6-C3-C6)。根據(jù)中央三碳的氧化程度，B環(huán)連接位置，以及三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀等特點(diǎn)，可將主要的天然黃酮類化合物分類，分別是黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮類、二氫黃酮醇類,大多以糖苷的形式存在。,生物活性,黃酮類化合物廣泛存在于牧草、水果、蔬菜和藥用植物中,植物長期自

2、又選擇過程中產(chǎn)生的一些次級(jí)代謝產(chǎn)物。迄今為止,在植物中已發(fā)現(xiàn)近10000種結(jié)構(gòu)獨(dú)特的黃酮類化合物。黃酮類化合物不僅結(jié)構(gòu)樣多,且不同類型的還表現(xiàn)出了不同的生物功能和活性。主要有抗氧化自由基作用、抗炎、抗過敏、抗菌、抗病毒活性、護(hù)肝活性、黃酮類化合物和維生素C在生物學(xué)系統(tǒng)中存在著相互作用的關(guān)系、雌激素作用、抗癌活性。,研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢,國內(nèi)多數(shù)研究人員停留在對黃酮類化合物、類檸檬苦素粗制品的研究上,多數(shù)公司經(jīng)營HLPC純度的黃酮類化合物或它們的改性物多是國外產(chǎn)品。對癌細(xì)胞有很好抵抗作用的多甲氧基黃酮,價(jià)格昂貴,國內(nèi)還沒有純度達(dá)標(biāo)產(chǎn)品。從橙皮中提取的辛弗林、橙皮昔已經(jīng)作為藥物應(yīng)用于臨床；黃酮類化合

3、物可以改善飲料的品味,橙皮普氫化后產(chǎn)物的甜度是蔗糖1500倍；類似于銀杏黃酮、大豆黃酮的保健品也已經(jīng)在國內(nèi)外市場上上市。歐美、日本、等國家或地區(qū)把黃酮類化合物、類檸檬苦素在清除人體內(nèi)有害自由基、殺死癌細(xì)胞的藥用研究看作醫(yī)學(xué)界一個(gè)熱點(diǎn),我國的很多大學(xué)、醫(yī)院、研究所的科學(xué)工作者也己嘗試這方面研究。,研究的目的和意義,黃銅類化合物是一種天然的抗氧化劑，具有很高的藥用價(jià)值，如抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、消炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用。黃酮類化合物還在食品、化妝品、藥品等行業(yè)中廣泛應(yīng)用。,材料與方法,（1）試驗(yàn)材料及藥品及儀器 實(shí)驗(yàn)材料：橙子皮 藥

4、品：飽和石灰水，鹽酸，氫氧化鈉，石油醚(30-60)，乙醚，乙醇，正丁醇，大孔樹脂。 （2）試驗(yàn)方法 試驗(yàn)選定浸泡時(shí)間、pH值、固液質(zhì)量體積比、超聲時(shí)間四個(gè)因素來研究黃酮類化合物的溶解性。在每組試驗(yàn)中，用電子天平稱量5份原料粉末于150ml廣口玻璃瓶中，每份2.00g。然后加入飽和的石灰水調(diào)節(jié)pH值的一定體積、一定濃度的水溶液，靜態(tài)浸泡，超聲一段時(shí)間后，過濾。然 后 在 4000rpm 下 離 心20min ，大孔樹脂吸附，取上清液于100ml容量瓶中，定容，取2mL提取液經(jīng)NaNO-Al(NO)3顯色后，在波長 510nm下測吸光度。,材料與方法,（3）黃酮含量的測定方法 取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液（0.

5、115mg.ml）精確吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml置于25ml試管中,加5%亞硝酸鈉0.3 ml，放置6min,再加入10%硝酸鋁0.3mL,放置6min,加入4%氫氧化鈉4.0ml，加水至10ml刻度,搖勻。510nm處測定吸光值。 以吸光值（A）為縱坐標(biāo)y，蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)x，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1)。得到蘆丁質(zhì)量濃度x與吸光度y關(guān)系曲線的回歸方程為： y=8.3437x+0.0033，R=0.9932.,材料與方法,提取液中總黃酮的含量測定：稱取脫脂柑橘皮粉2.00g，提取完畢后，容量瓶定容至100ml，取2ml提取液測其吸光度，測定方法同上。

6、 根據(jù)公式（1）計(jì)算由標(biāo)準(zhǔn)曲線換得的總黃酮的濃度，計(jì)算公式： C=y-0.00338.3437 （2） y 單因素試驗(yàn)或正交試驗(yàn)中測得的吸光度（A） 根據(jù)公式（2）計(jì)算提取液中總黃酮提取率，計(jì)算公式： W（%）=c2.00 （3） W柑橘皮總黃酮提取率（%） C由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算得的總黃酮濃度（mg/ml）,結(jié)果與分析,單因素實(shí)驗(yàn) 稱取相同質(zhì)量的橙皮粉末5份各2.00g，設(shè)定提取液體積50ml，pH值11.0，超聲時(shí)間15min，浸泡時(shí)間分別為1h，3h，6h，9h,12h。然后再4000rpm下離心20min，大孔樹脂吸附，分別取上清液于100ml容量瓶中，定容，取2ml提取液經(jīng)NaNO-Al(

7、NO)3顯色后，在波長 510nm下測吸光度。,結(jié)果與分析,浸泡時(shí)間對黃酮提取液吸光度的影響,結(jié)果與分析,提取液pH值對黃酮提取液吸光度的影響,結(jié)果與分析,提取液體積對黃酮提取液吸光度的影響,結(jié)果與分析,超聲時(shí)間對黃酮提取液吸光度的影響,結(jié)果與分析,正交試驗(yàn) 它根據(jù)正交性從全面試驗(yàn)中挑選出部分有代表性的點(diǎn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這些點(diǎn)具備了齊整可比,均勻分散的特點(diǎn)。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)是試驗(yàn)優(yōu)化的常用方法。所謂試驗(yàn)優(yōu)化，是指在最優(yōu)化思想的指導(dǎo)下，進(jìn)行最優(yōu)設(shè)計(jì)的一種優(yōu)化方法。它從不同的優(yōu)良性出發(fā)，合理設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案，有效控制試驗(yàn)干擾，科學(xué)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，全面進(jìn)行優(yōu)化分析，直接實(shí)現(xiàn)優(yōu)化目標(biāo)，已成為現(xiàn)代優(yōu)化技術(shù)的一個(gè)重要方面

8、。本文采用3水平的L9 (34）四因素三水平的正交試驗(yàn)確定最佳提取工藝。,結(jié)果與分析,黃酮提取工藝中的影響因素和水平,結(jié)果與分析,正交試驗(yàn)表,結(jié)果與分析,提取液pH對黃酮的提取影響最大，其次是固液質(zhì)量比、浸泡時(shí)間，影響最小的是超聲處理時(shí)間。既影響提取的主次因素為BCAD。最佳因素水平為A1B3C2D2,即最佳提取工藝為浸泡時(shí)間8h、提取液pH12、體積45ml、超聲處理時(shí)間15min。,討論與結(jié)論,本研究以澄清石灰水為溶劑從橙皮中提取黃酮類化合物，以浸泡時(shí)間、提取液pH、固液質(zhì)量比、超聲處理時(shí)間為影響因素，單因素實(shí)驗(yàn)中各個(gè)因素的最優(yōu)條件范圍分別為22.5倍原料干重提取液，pH為11.0左右的石灰水，常溫侵泡9h后，超聲處理15min。在正交試驗(yàn)中優(yōu)組合為，浸泡時(shí)間8h、提取液pH為11.0、提取液體積45ml、超聲處理時(shí)間15min。黃酮的提取工藝影響程度為提取液pH固液質(zhì)量比浸泡時(shí)間超聲處理時(shí)間。優(yōu)組合時(shí)，黃酮提取率最高，為3.586%。,致謝,在本試驗(yàn)的設(shè)計(jì)、操作和論文的撰寫過程中，得到了長江大