1、1. Fluo-3 AM （鈣離子熒光探針）原理 Fluo-3 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，和細(xì)胞內(nèi)游離的鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光。生理意義 細(xì)胞內(nèi)鈣離子增多是細(xì)胞損傷的結(jié)果，因此此探針能表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長(zhǎng)506nm 發(fā)射波長(zhǎng) 526nm （綠色）備注 推薦使用2. Mag-fura-2 AM（鈣離子熒光探針）原理Fura-2 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fura-2AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura-2，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fura-2可

2、以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后在330-350nm激發(fā)光下可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，而在380nm激發(fā)光下則會(huì)導(dǎo)致熒光減弱。這樣就可以使用340nm和380nm這兩個(gè)熒光的比值來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細(xì)胞厚度差異等一些誤差因素。生理意義 細(xì)胞內(nèi)鈣離子增多是細(xì)胞損傷的結(jié)果，因此此探針能表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長(zhǎng)為340nm和380nm 發(fā)射波長(zhǎng) 510nm （藍(lán)色）備注 儀器濾光片不適用 3 Fluo-4-AM （鈣離子熒光探針）原理Fluo 4 是一種將Fluo 3結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了電子吸引力更強(qiáng)的F，它的

3、最大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)處偏離10 nm左右。所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo 4的熒光強(qiáng)度比Fluo 3強(qiáng)1倍。由于Fluo 4與鈣離子的親和力和Fluo 3近似，所以使用上和Fluo 3也基本相同生理意義 細(xì)胞內(nèi)鈣離子增多是細(xì)胞損傷的結(jié)果，因此此探針能表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長(zhǎng)494nm 發(fā)射波長(zhǎng)516nm （綠色）備注 用激光器激發(fā)時(shí)熒光強(qiáng)度強(qiáng)，因此不推薦4. DCFH-DA （活性氧熒光探針）原理DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒

4、光的DCF。生理意義 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長(zhǎng)485nm 發(fā)射波長(zhǎng) 520nm （綠色）備注 推薦使用5. DHR 123 （活性氧熒光探針） 原理 本身無(wú)熒光, 在超氧化酶存在時(shí)可被過(guò)氧化氫 (H2O2)氧化, 轉(zhuǎn)變成發(fā)射綠色熒光的羅丹明123 (Rhodamine 123), 因此廣泛應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS), 如過(guò)氧化物, 次氯酸和過(guò)氧亞硝基陰離子等。生理意義 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧表征細(xì)胞損傷程度激發(fā)波長(zhǎng)507nm 發(fā)射波長(zhǎng) 529nm （綠色）備注 氧化后成羅丹明123，熒光強(qiáng)度可能受到線粒體膜電位的影響6. RhodamineI23 （線粒體膜電位熒光探針）原理

5、細(xì)胞膜通透的陰離子綠色熒光染料, 能夠迅速被活線粒體攝取, 而無(wú)細(xì)胞毒性。 生理意義 標(biāo)記線粒體膜電位激發(fā)波長(zhǎng)488nm 發(fā)射波長(zhǎng)515 575nm （綠色）生理意義 檢測(cè)線粒體膜電位備注 正在使用7. Hoechst 33342 （DNA熒光探針）原理 Hoechst 33342是一種可對(duì)DNA 染色的細(xì)胞核染色試劑，常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)。Hoechst染料可透過(guò)細(xì)胞膜在聚AT序列的富集區(qū)域的小溝處與DNA結(jié)合并對(duì)DNA染色而發(fā)出強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。生理意義 標(biāo)記雙鏈DNA激發(fā)波長(zhǎng)355nm 發(fā)射波長(zhǎng)465nm （藍(lán)色）備注 正在使用8. FDA 原理 FDA可透過(guò)細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)

6、。生理意義 反映細(xì)胞膜完整性和細(xì)胞活力激發(fā)波長(zhǎng)495nm 發(fā)射波長(zhǎng)520nm （綠色）備注 正在使用9. PI （DNA熒光探針）原理 它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但能透過(guò)凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞的膜而將細(xì)胞核染紅，與細(xì)胞核中的DNA結(jié)合的PI發(fā)出的熒光，與未結(jié)合的PI相比，強(qiáng)度會(huì)增強(qiáng)20-30倍。生理意義 檢測(cè)死細(xì)胞及凋亡晚期細(xì)胞激發(fā)波長(zhǎng)530nm 發(fā)射波長(zhǎng)615nm （紅色）備注 嘗試過(guò)，但效果不好10. EB （核酸熒光探針）原理 EB，不能透過(guò)細(xì)胞完整的細(xì)胞膜。溴化乙錠含有一個(gè)可以嵌入DNA堆積堿基之間的一個(gè)三環(huán)平面基團(tuán)。它與DNA的結(jié)合幾乎沒(méi)有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中，大

7、約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。當(dāng)染料分子插入后，其平面基團(tuán)與螺旋的軸線垂直并通過(guò)范德華力與上下堿基相互作用。這個(gè)基團(tuán)的固定位置及其與堿基的密切接近，導(dǎo)致與DNA結(jié)合的染料呈現(xiàn)熒光，其熒光產(chǎn)率比游離溶液中染料有所增加。生理意義 檢測(cè)死細(xì)胞激發(fā)波長(zhǎng)545nm 發(fā)射波長(zhǎng)605nm （紅色）備注 有強(qiáng)致癌性，不推薦11. DAPI （DNA熒光探針）原理 DAPI可以穿透細(xì)胞膜與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)揮標(biāo)記的作用，產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的熒光，且對(duì)活細(xì)胞無(wú)毒副作用。和EB相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。生理意義

8、標(biāo)記凋亡和死細(xì)胞的DNA激發(fā)波長(zhǎng)364nm 發(fā)射波長(zhǎng)454nm （藍(lán)色）備注 與Hoechst功能相近，可以嘗試12. Calcein AM 原理 Calcein-AM由于在Calcein(鈣黃綠素)的基礎(chǔ)上加強(qiáng)了疏水性，因此能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。當(dāng)其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會(huì)將其水解為Calcein(鈣黃綠素)留在細(xì)胞內(nèi),發(fā)出強(qiáng)綠色熒光，且細(xì)胞毒性很低，適合用于活細(xì)胞染色。生理意義 檢測(cè)細(xì)胞膜完整性激發(fā)波長(zhǎng)494nm 發(fā)射波長(zhǎng)517nm （綠色）備注 跟FDA功能類(lèi)似，細(xì)胞毒性很低，可以長(zhǎng)時(shí)間標(biāo)記細(xì)胞，但價(jià)格比較貴13. BCECF-AM (pH熒光探針)原理 BCECF-AM是一種可以穿透細(xì)胞

9、膜的熒光染料，BCECF-AM沒(méi)有熒光，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解成BCECF，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。BCECF在適當(dāng)?shù)膒H值情況下可以被激發(fā)形成綠色熒光。生理意義 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)pH激發(fā)波長(zhǎng)490nm 發(fā)射波長(zhǎng)526nm （綠色）備注 感覺(jué)意義不大14. Tubulin-Tracker Red (微管紅色熒光探針)原理Tubulin-TrackerRed探針為熒光染料Alexa Fluor 555標(biāo)記的抗-Tubulin小鼠單克隆抗體(克隆號(hào)為DM1A)，可以識(shí)別-Tubulin的425-450aa?？梢杂糜谌?、小鼠、大鼠、牛、豬、豚鼠和禽類(lèi)(avian)樣品-Tubulin的檢測(cè)。生理意義 標(biāo)

10、記細(xì)胞內(nèi)微管激發(fā)波長(zhǎng)555nm 發(fā)射波長(zhǎng)565nm （紅色）備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用15. Lyso-Tracker Red (溶酶體紅色熒光探針)原理 Lyso-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的DND 99進(jìn)行了熒光標(biāo)記的帶有弱堿性的熒光探針，可以選擇性地滯留在偏酸性的溶酶體中，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)于溶酶體的特異性熒光標(biāo)記。中性紅(NeutralRed)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以對(duì)溶酶體進(jìn)行熒光染色，但中性紅和吖啶橙的染色缺乏特異性。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞溶酶體激發(fā)波長(zhǎng)577nm 發(fā)射波長(zhǎng)590nm

11、（紅色）備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用16. Golgi-Tracker Red (高爾基體紅色熒光探針)原理 Golgi-TrackerRed為采用MolecularProbes公司的BODIPYTR進(jìn)行了熒光標(biāo)記的C5-ceramide。Ceramide或其類(lèi)似物可以選擇性地和高爾基體結(jié)合，因此熒光標(biāo)記的ceramide可以用作高爾基體特異性的熒光探針。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞高爾基體激發(fā)波長(zhǎng)589nm 發(fā)射波長(zhǎng)617nm (紅色)備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用17. ER-Tracker Red (內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒

12、光探針)原理 ER-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進(jìn)行了熒光標(biāo)記的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide，中文名為格列苯脲，是一種2型糖尿病治療藥物，可以結(jié)合主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的sulphonylurea受體。因此熒光標(biāo)記的glibenclamide就可以用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性的熒光探針。ER-Tracker Red對(duì)于細(xì)胞的毒性極低。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激發(fā)波長(zhǎng)587nm 發(fā)射波長(zhǎng)615nm備注 紅色熒光比較難拍，且價(jià)格較貴，作為篩選用可行性不大，可做機(jī)制研究用18. Mito-Tracker Green (線粒體綠色熒光探針) (綠色)原理 Mito-TrackerGreen為采用MolecularProbes公司的carbocyanine進(jìn)行了熒光標(biāo)記的一種Mito-Tracker，可以用作線粒體特異性的熒光探針。和rhodamine123或JC-1相比，Mito-Tracker Green對(duì)于線粒體的染色不依賴(lài)于線粒體膜電位。生理意義 標(biāo)記細(xì)胞線粒體激發(fā)波長(zhǎng)490nm 發(fā)射波長(zhǎng)516nm備注 與羅丹明123不完全相同