1、.,乳制品中微生物的檢測,組員： 邵顧 薛蓉雅 許華 劉孟晨,.,目錄,乳酸菌簡介 抗生素簡介 乳酸菌的檢驗 抗生素殘留量的檢驗,.,乳酸菌簡介,1、代謝類型：異養(yǎng)厭氧型 2、生物類型：原核生物細菌 乳酸菌 乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。 凡是能從葡萄糖或乳糖的發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸的細菌統(tǒng)稱為乳酸菌。這是一群相當龐雜的細菌，目前至少可分為18個屬，共有200多種。除極少數(shù)外，其中絕大部分都是人體內(nèi)必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其廣泛存在于人體的腸道中。目前已被國內(nèi)外生物學家所證實，腸內(nèi)乳酸菌與健康長壽有著非常密切的直接關系。,.,生理功能 1防治有些

2、人種普遍患有的乳糖不耐癥（喝鮮奶時出現(xiàn)的腹脹、腹瀉等癥狀）。 2促進蛋白質(zhì)、單糖及鈣、鎂等營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，產(chǎn)生維生素B族等大量有益物質(zhì)。 3使腸道菌群的構成發(fā)生有益變化，改善人體胃腸道功能，恢復人體腸道內(nèi)菌群平衡，形成抗菌生物屏障，維護人體健康。 4、抑制腐敗菌的繁殖，消解腐敗菌產(chǎn)生的毒素，清除腸道垃圾。 5抑制膽固醇吸收，降血脂、降血壓作用。 6免疫調(diào)節(jié)作用，增強人體免疫力和抵抗力。 7抗腫瘤、預防癌癥作用。 8提高SOD酶活力，消除人體自由基，具抗衰老、延年益壽作用。,作用。,.,抗生素簡介,抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細菌、真菌、放線菌屬）或高等動植物在生活過程中所產(chǎn)

3、生的具有抗病原體或其它活性的一類次級代謝產(chǎn)物，能干擾其他生活細胞發(fā)育功能的化學物質(zhì)?，F(xiàn)臨床常用的抗生素有微生物培養(yǎng)液液中提取物以及用化學方法合成或半合成的 化合物。目前已知天然抗生素不下萬種。,.,用途簡介,抗生素以前被稱為抗菌素，事實上它不僅能殺滅細菌而且對霉菌、支原體、衣原體等其它致病微生物也有良好的抑制和殺滅作用，近年來通常將抗菌素改稱為抗生素?？股乜梢允悄承┪⑸锷L繁殖過程中產(chǎn)生的一種物質(zhì)，用于治病的抗生素除由此直接提取外；還有完全用人工合成或部分人工合成的。通俗地講，抗生素就是用于治療各種細菌感染或抑制致病微生物感染的藥物。 但是過量使用會抑制體內(nèi)的有益菌，使腸道菌群失衡。導致疾

4、病的引起。,.,作用機理,抗生素等抗菌劑的抑菌或殺菌作用，主要是針對“細菌有而人（或其它高等動植物）沒有”的機制進行殺傷，有5大類作用機理： 阻礙細菌細胞壁的合成，導致細菌在低滲透壓環(huán)境下膨脹破裂死亡，以這種方式作用的抗生素主要是-內(nèi)酰胺類抗生素。哺乳動物的細胞沒有細胞壁，不受這類藥物的影響。 與細菌細胞膜相互作用，增強細菌細胞膜的通透性、打開膜上的離子通道，讓細菌內(nèi)部的有用物質(zhì)漏出菌體或電解質(zhì)平衡失調(diào)而死。以這種方式作用的抗生素有多粘菌素和短桿菌肽等。,.,與細菌核糖體或其反應底物（如tRNA、mRNA）相互所用，抑制蛋白質(zhì)的合成這意味著細胞存活所必需的結構蛋白和酶不能被合成。以這種方式作用

5、的抗生素包括四環(huán)素類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、氨基糖苷類抗生素、氯霉素等。 阻礙細菌DNA的復制和轉(zhuǎn)錄，阻礙DNA復制將導致細菌細胞分裂繁殖受阻，阻礙DNA轉(zhuǎn)錄成mRNA則導致后續(xù)的mRNA翻譯合成蛋白的過程受阻。以這種方式作用的主要是人工合成的抗菌劑喹諾酮類（如氧氟沙星）。 影響葉酸代謝 抑制細菌葉酸代謝過程中的二氫葉酸合成酶和二氫葉酸還原酶，妨礙葉酸代謝。因為葉酸是合成核酸的前體物質(zhì)，葉酸缺乏導致核酸合成受阻，從而抑制細菌生長繁殖，主要是磺胺類和甲氧芐啶。,.,使用歷史,1877年，Pasteur和Joubert首先認識到微生物產(chǎn)品有可能成為治療藥物，他們發(fā)表了實驗觀察，即普通的微生物能抑

6、制尿中炭疽桿菌的生長。 1928年，弗萊明爵士發(fā)現(xiàn)了能殺死致命的細菌的青霉菌。青霉素治愈了梅毒和淋病，而且在當時沒有任何明顯的副作用。 1936年，磺胺的臨床應用開創(chuàng)了現(xiàn)代抗微生物化療的新紀元。 1944年在新澤西大學分離出來第二種抗生素鏈霉素，它有效治愈了另一種可怕的傳染?。航Y核。 1947年出現(xiàn)氯霉素，它主要針對痢疾、炭疽病菌，治療輕度感染。,.,1948年四環(huán)素出現(xiàn)，這是最早的廣譜抗生素。在當時看來，它能夠在還未確診的情況下有效地使用。今天四環(huán)素基本上只被用于家畜飼養(yǎng)。 1956年禮來公司發(fā)明了萬古霉素被稱為抗生素的最后武器。因為它對G+細菌細胞壁、細胞膜和RNA有三重殺菌機制，不易誘導

7、細菌對其產(chǎn)生耐藥。 1980年代喹諾酮類藥物出現(xiàn)。和其他抗菌藥不同，它們破壞細菌染色體，不受基因交換耐藥性的影響。 1992年，這類藥物中的一個變體因為造成肝腎功能紊亂被美國取締，但在發(fā)展中國家仍有使用。,.,乳酸菌計數(shù),.,.,操作步驟,液體樣品： 液體樣品應先將其充分搖勻后以無菌吸管吸取樣品 25 mL 放入裝有225 mL 生理鹽 水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分振搖，制成1:10 的樣品勻液。 步驟 1 、 用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品 勻液1 mL，沿管壁緩慢注于裝有9 mL生理鹽水 的無菌試管中（注意吸管尖端不要觸及稀釋液），振搖試管或換用

8、1 支無菌吸管反復吹打使其混合 均勻， 制成1:100 的樣品勻液。,.,2、 另取1 mL無菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做 10 倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋 一次，即換用1 次1 mL滅菌吸管或吸頭。 乳酸菌計數(shù) 1 、 乳酸菌總數(shù) 根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計，選擇2 個3 個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1 mL樣品 勻液分別置于2 個MRS瓊脂平板，使用 L 形棒進行表面涂布。36 1 ，厭氧培養(yǎng) 48 h2 h 后計數(shù)平 板上的所有菌落數(shù)。從樣品稀釋到平板涂布要求在15min內(nèi)完成。,.,抗生素殘留量的檢測,.,.,操作步驟,1. 菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳 為培養(yǎng)基,在361培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15小時后,再以脫脂乳以至于1:1稀釋待用;2.取待檢樣液9mL,在80水浴加熱5分鐘后冷卻到37以下,加活菌液1mL,在361水浴2小時,加入