016 前 言本標準代替003蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定(熒光法和2,4、003食品中還原型抗壞血酸的測定和986水果、蔬菜維生素,6。本標準與003相比,主要變化如下:標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品中抗壞血酸的測定”;擴大了方法的適用范圍;增加了高效液相色譜法及相關(guān)方法的定量限;刪除了2,4增加了2,6按照015對原標準的結(jié)構(gòu)進行了修改。0161 食品安全國家標準食品中抗壞血酸的測定1 范圍本標準規(guī)定了高效液相色譜法、熒光法、2,6標準第一法適用于乳粉、谷物、蔬菜、水果及其制品、肉制品、維生素類補充劑、果凍、膠基糖果、八寶粥、葡萄酒中的L(+)(+)二法適用于乳粉、蔬菜、水果及其制品中L(+)三法適用于水果、蔬菜及其制品中L(+) 壞血酸:一種具有抗氧化性質(zhì)的有機化合物。又稱為“維生素C”,是人體必需的營養(yǎng)素之一。(+)式右旋光抗壞血酸。具有強還原性,對人體具有生物活性。(+)稱異抗壞血酸。具有強還原性,但對人體基本無生物活性。(+)(+)(+)常稱為脫氫抗壞血酸。(+)試樣中L(+)一法 高效液相色譜法3 原理試樣中的抗壞血酸用偏磷酸溶解超聲提取后,以離子對試劑為流動相,經(jīng)反相色譜柱分離,其中L(+)長245定;試樣中的L(+)紫外檢測器(波長245定L(+)減去原樣品中測得的L(+)色譜峰的保留時間定性,外標法定量。4 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。磷酸(n:含量(以38%。酸三鈉(2酸二氫鉀(0162 酸(85%。3優(yōu)級純。六烷基三甲基溴化銨(色譜純。醇(色譜純。磷酸溶液(200g/L):稱取200g(磷酸(溶于水并稀釋至1L,此溶液保存于4的環(huán)境下可保存一個月。磷酸溶液(20g/L):量取50偏磷酸溶液,用水稀釋至500 磷酸三鈉溶液(100g/L):稱取100g(酸三鈉,溶于水并稀釋至1L。0g/L):稱取4于水并稀釋至100用時配制。(+)6純度99%。(+)抗壞血酸)標準品(純度99%。(+)準確稱取L(+)用20g/貯備液在28避光條件下可保存一周。(+)準確稱取D(+)用20g/貯備液在28避光條件下可保存一周。壞血酸混合標準系列工作液:分別吸取L(+)20g/準系列工作液中L(+)用時配制。5 相色譜儀:配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。5.2 平:聲波清洗器。心機:轉(zhuǎn)速4000r/質(zhì)機。膜:蕩器。6 分析步驟整個檢測過程盡可能在避光條件下進行。體或固體粉末樣品:混合均勻后,應立即用于檢測。0163 果、蔬菜及其制品或其他固體樣品:取100的偏磷酸溶液,經(jīng)均質(zhì)機均質(zhì)并混合均勻后,應立即測定。g(合均勻的固體試樣或勻漿試樣,或吸取20所取試樣含L(+)5020g/)將試樣轉(zhuǎn)移至50搖溶解并定容。搖勻,全部轉(zhuǎn)移至50聲提取54000r/液待測由此試液可同時分別測定試樣中L(+)樣溶液的還原準確吸取20入10的),用100g/200次/水將試液全部轉(zhuǎn)移至50定容至刻度。此試液可測定試樣中包括脫氫型的L(+)若試樣含有增稠劑,可準確吸取4準確加入1譜柱:長250徑5m,或同等性能的色譜柱。測器:二極管陣列檢測器或紫外檢測器。動相:A:水溶解并定容至1L(B:100%甲醇。按AB=982混合,聲脫氣。速: 檢測波長:245 柱 溫:25。樣量:20L。準曲線制作分別對抗壞血酸混合標準系列工作溶液進行測定,以L(+)D(+)準溶液的質(zhì)量濃度(g/橫坐標,L(+)D(+)峰高或峰面積為縱坐標,繪制標準曲線或計算回歸方程。L(+)(+)樣溶液的測定對試樣溶液進行測定,根據(jù)標準曲線得到測定液中L(+)D(+)濃度(g/白試驗空白試驗系指除不加試樣外,采用完全相同的分析步驟、試劑和用量,進行平行操作。7 分析結(jié)果的表述試樣中L(+)D(+)含量和L(+)0164 按式(1)計算:X=(000FK100(1)式中:X 試樣中L(+)D(+)(+)含量,單位為毫克每百克(00g);樣液中L(+)D(+)質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(g/樣品空白液中L(+)D(+)質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(g/V試樣的最后定容體積,單位為毫升(m實際檢測試樣質(zhì)量,單位克(g);1000換算系數(shù)(由g/F稀釋倍數(shù)(K00換算系數(shù)(由mg/00計算結(jié)果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。9 其他固體樣品取樣量為2(+)00g,00g。液體樣品取樣量為10g(或10,L(+)00g(0000g(00第二法 熒光法10 原理試樣中L(+)鄰苯二胺(應生成有熒光的喹唔啉(其熒光強度與L(+)此測定試樣中L(+):L(+)此排除試樣中熒光雜質(zhì)產(chǎn)生的干擾。11 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的三級水。磷酸(n:含量(以38%。乙酸(濃度約為30%。0165 酸(濃度約為98%。酸鈉(酸(苯二胺(里酚藍(性炭粉。磷酸取15入40溫,攪拌,使之逐漸溶解,冷卻后加水至5004冰箱可保存7d10d。酸溶液():心加入水中,再加水稀釋至1000磷酸取15入40硫酸溶液至溶解,并稀釋至500酸鈉溶液(500g/L):稱取500水至1000酸取3500g/用時配制。苯二胺溶液(200):稱取20水溶解并稀釋至100用時配制。性活性炭:稱取約2005m177m),加入1+9),加熱回流1h2h,過濾,用水洗至濾液中無鐵離子為止,置于110120烘箱中干燥10h,備用。檢驗鐵離子方法:利用普魯士藍反應。將20g/酸等量混合,將上述洗出濾液滴入,如有鐵離子則產(chǎn)生藍色沉淀。里酚藍指示劑溶液(玻璃研缽中研磨至溶解,用水稀釋至250變色范圍:準品L(+)6純度99%。(+)稱取L(+)用偏磷酸貯備液在28避光條件下可保存一周。(+)準確吸取L(+)偏磷酸用時配制。12 儀器和設備熒光分光光度計:具有激發(fā)波長338有13 分析步驟整個檢測過程應在避光條件下進行。液的制備稱取約100g(樣,加100入搗碎機內(nèi)打成勻漿,0166 指示劑測試勻漿的酸堿度。如呈紅色,即稱取適量勻漿用偏磷酸呈黃色或藍色,則稱取適量勻漿用偏磷酸漿的取用量根據(jù)試樣中抗壞血酸的含量而定。當試樣液中抗壞血酸含量在40g/00g/般稱取20g(漿,用相應溶液稀釋至100濾,濾液備用?；幚?分別準確吸取50入2力振搖1濾,棄去最初數(shù)毫升濾液,分別收集其余全部濾液,即為試樣氧化液和標準氧化液,待測定。別準確吸取10為“試樣液”和“試樣空白液”。別準確吸取10為“標準液”和“標準空白液”?！霸嚇涌瞻滓骸焙汀皹藴士瞻滓骸敝懈骷?合搖動15水稀釋至1004冰箱中放置2h3h,取出待測?！霸嚇右骸焙汀皹藴室骸敝懈骷?乙酸鈉溶液,用水稀釋至100測。準曲線的制備準確吸取上述“標準液”L(+)別置于10準確吸取“標準空白液”2暗室迅速向各管中加入5搖混合,在室溫下反應35激發(fā)波長338射波長420“標準液”系列熒光強度分別減去“標準空白液”熒光強度的差值為縱坐標,對應的L(+)制標準曲線或計算直線回歸方程。樣測定分別準確吸取2樣液”和“試樣空白液”于10暗室迅速向各管中加入5搖混合,在室溫下反應35激發(fā)波長338射波長420“試樣液”熒光強度減去“試樣空白液”的熒光強度的差值于標準曲線上查得或回歸方程計算測定試樣溶液中L(+)4 結(jié)果計算試樣中L(+)果以毫克每百克表示,按式(2)計算:X=c1001000(2)式中:X 試樣中L(+)位為毫克每百克(00g);c由標準曲線查得或回歸方程計算的進樣液中L(+)位為微克每毫升(g/V熒光反應所用試樣體積,單位為毫升(m實際檢測試樣質(zhì)量,單位克(g);F試樣溶液的稀釋倍數(shù);100換算系數(shù);1000換算系數(shù)。計算結(jié)果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。0167 15 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。16 樣品取樣量為10(+)00g。 第三法 2,6理用藍色的堿性染料2,6),6到達滴定終點時,多余的2,62,6)8 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的三級水。磷酸(n:含量(以38%。酸(酸氫鈉(,6,612陶土(或高嶺土):對抗壞血酸無吸附性。磷酸溶液(20g/L):稱取20水溶解并定容至1L。酸溶液(20g/L):稱取20水溶解并定容至1L。,6,6液:稱取碳酸氫鈉52后稱取2,6卻并用水定容至250濾至棕色瓶內(nèi),于48環(huán)境中保存。每次使用前,用標準抗壞血酸溶液標定其滴定度。標定方法:準確吸取1入10勻,用2,6持15時另取10,6)計算:T=c(3)式中:T2,6每毫升2,6位為毫克每毫升(mg/0168 c抗壞血酸標準溶液的質(zhì)量濃度,單位為毫克每毫升(mg/V吸取抗壞血酸標準溶液的體積,單位為毫升(滴定抗壞血酸標準溶液所消耗2,6位為毫升(滴定空白所消耗2,6位為毫升(準品L(+)6純度99%。準溶液的配制L(+)稱取100(+)于偏磷酸溶液或草酸溶液并定容至100貯備液在28避光條件下可保存一周。19 測定整個檢測過程應在避光條件下進行。液制備:稱取具有代表性樣品的可食部分100g,放入粉碎機中,加入100速搗成勻漿。準確稱取10g40燒杯中,用偏磷酸溶液或草酸溶液將樣品轉(zhuǎn)移至100稀釋至刻度,搖勻后過濾。若濾液有顏色,定:準確吸取10標定過的2,6至溶液呈粉紅色15時做空白試驗。20 結(jié)果計算試樣中L(+)