兒童紫癜性腎炎腎組織VCAM-1的表達及其意義 作者：盧立肖，陳曉英，林瑞霞，楊青，陳敏廣【摘要】 目的 ：探討紫癜性腎炎(HSPN)患兒腎活檢組織血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)的表達情況及其意義。方法 ：應用免疫組化技術檢測8例HSPN和7例薄基底膜病(對照組)通過腎穿刺活檢術獲得的腎組織VCAM-1表達情況(用IOD值表示)，分析其與腎臟病理、主要臨床指標(包括24 h尿蛋白、尿紅細胞)的關系。結(jié)果：對照組的腎組織僅少量表達VCAM-1;HSPN患兒的腎小管、腎間質(zhì)及腎小球中VCAM-1表達均增加，以小管間質(zhì)部位為著，并隨ISKDC腎病理級別的增加而增強;平均腎組織VCAM-1表達的IOD值在-級組為(6.542.02)105，在-級組為(2.450.07)105，對照組為(0.760.12)105，-級組與-級組均明顯高于對照組(均P <0.01)，且-級組高于-級組(P <0.05)。HSPN患兒的腎組織VCAM-1表達的IOD值與其ISKDC腎病理分級呈顯著正相關(r =0.866，P <0.01)，與IgA和C3沉積量均無顯著性相關(r分別為0.339、-0.436，均P >0.05)，與24 h尿蛋白量呈顯著正相關(r =0.755，P <0.05)，而與尿沉渣紅細胞量無顯著性相關(r =-0.626，P >0.05)。結(jié)論 ：VCAM-1參與了HSPN的發(fā)生、發(fā)展過程，其腎組織的VCAM-1表達可反映其病情的嚴重程度。 【關鍵詞】 紫癜性腎炎;血管細胞黏附分子-1;腎組織;兒童紫癜性腎炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis，HSPN)作為兒科最常見的繼發(fā)性腎小球疾病之一，雖然其大多預后良好，但約15%的患者會有活動性腎臟病，約3%20%的患者會發(fā)展到腎衰竭1-2，然而它的確切病因和發(fā)病機制至今尚未完全清楚。近幾年來血管細胞黏附分子-1(vascular cellular adhesion molecule-1，VCAM-1)在HSPN發(fā)病中的作用也引起研究者的重視3-4，但對其腎組織VCAM-1表達的研究甚少，為了探討VCAM-1在兒童HSPN腎組織的表達情況及其可能起的作用，我們對8例HSPN患兒及7例病理學改變?yōu)楸』啄げ〉幕純耗I組織VCAM-1表達進行檢測，現(xiàn)報告如下。1 對象和方法1.1 研究對象 病例來源于2006年1月至2007年4月間住院于我科并行過腎穿刺活檢術的8例HSPN患兒(HSPN組)，年齡712歲，其中男5例，女3例;均符合中華醫(yī)學會兒科學分會腎臟病學組于2001年制定的HSPN診斷標準5。對照組標本來自我科住院的7例病理學改變?yōu)楸』啄げ〉幕純海挲g713歲，其中男4例，女3例。兩組在性別構(gòu)成及年齡上差異無顯著性(P均>0.05)。1.2 檢測指標和方法1.2.1 生物學指標：所有HSPN病例均于腎活檢當日送檢24 h尿蛋白定量和新鮮尿沉渣紅細胞半定量。1.2.2 腎組織VCAM-1的檢測：一抗采用武漢博士德公司的兔抗人VCAM-1多克隆抗體，二抗采用北京中杉公司試劑盒，檢測方法按試劑盒說明書進行。封片后，自然晾干，盡快觀察，并使用自動顯微照相裝置在顯微鏡下攝取圖像。腎組織的VCAM-1表達采用 Image-Pro Plus5.0 醫(yī)學圖像分析軟件，400光鏡下計數(shù)每張切片單位視野內(nèi)的累積光密度(IOD)，IOD為經(jīng)標準灰密度校正后，在同等條件下測得的陽性物質(zhì)的平均總分減去平均背景積分。IOD能反映選定區(qū)域的蛋白表達總量，是陽性面積與陽性平均光密度的乘積。圖片放大倍數(shù)表示物鏡倍數(shù)乘目鏡放大倍數(shù)。在統(tǒng)一放大倍數(shù)(4010)下，每張切片隨機選取4個視野，取其平均值。1.2.3 腎組織病理檢測：分別行光鏡、免疫熒光及電鏡檢查。光鏡行HE染色，PAS染色，Masson染色，PASM染色;免疫熒光行IgA、IgG、IgM、C3、C4、Clq等檢查。病理診斷分級按中華醫(yī)學會兒科學分會腎臟病學組修訂的國際兒童腎臟病研究中心(ISKDC)分類標準5，分為6級。1.3 統(tǒng)計學處理方法 多組樣本均數(shù)比較進行方差齊性檢驗，組間比較比較采用單因素方差分析，方差齊者兩兩比較采用LSD法，方差不齊者進行Dunnetts T3檢驗。相關分析采用Bivariate過程的Spearman等級相關分析。2 結(jié)果2.1 HSPN患兒腎組織病理檢查結(jié)果 8例HSPN患兒的腎組織病理診斷及ISKDC分級的結(jié)果為：級2例，級5例，級1例。免疫病理分型：單純IgA沉積型5例;IgA+IgG沉積型1例;IgA+IgM沉積型1例;1例免疫病理呈陰性反應。2.2 HSPN患兒腎組織VCAM-1表達特點 對照組的腎小球、腎小管和腎間質(zhì)VCAM-1的表達多為陰性，僅在個別腎小球球囊壁層上皮細胞、近曲腎小管上皮細胞及腎間質(zhì)血管內(nèi)皮見到散在點狀VCAM-1陽性信號。HSPN患兒的腎小球、腎小管及腎間質(zhì)中可見較多斑點狀分布的VCAM-1陽性信號，以小管間質(zhì)部位為著，且隨著系膜細胞的增殖，VCAM-1在上述部位表達增加，并隨病理分級增加陽性信號表達明顯增強(見圖1)。2.3 HSPN患兒腎組織VCAM-1表達與腎組織病理之間的關系2.3.1 與ISKDC腎病理分級的關系：隨著ISKDC腎病理分級的增加，腎小球和腎小管間質(zhì)區(qū)域的VCAM-1表達增多，-級和-級病理改變的腎組織VCAM-1表達的IOD值均明顯高于對照組，差異有顯著性(P <0.01、P <0.05)，而-級病理改變的腎組織VCAM-1表達的IOD值高于-級，差異亦有顯著性(P <0.05)，見表1。2.3.2 與腎組織病理學改變特點的相關性分析 HSPN患兒腎組織的VCAM-1表達的IOD值與其ISKDC腎病理分級呈顯著性等級正相關(r =0.866，P<0.01)，與IgA沉積量無顯著性相關(r=0.339，P >0.05)，與C3沉積量亦無顯著性相關(r=-0.436，P >0.05)。2.4 HSPN患兒腎組織VCAM-1表達與尿蛋白、尿紅細胞的相關性分析 HSPN患兒腎組織VCAM-1表達的IOD值與其24 h尿蛋白量呈顯著正相關(r =0.755，P <0.05)，而與尿沉渣紅細胞量無顯著性相關(r =-0.626，P >0.05)。3 討論VCAM-1作為一種黏附分子，主要由激活的內(nèi)皮細胞產(chǎn)生。在正常腎臟，VCAM-1僅少量表達于部分包曼氏囊壁層上皮細胞、腎小管上皮細胞和間質(zhì)樹突狀細胞，而不表達于腎小球。由于薄基底膜病是一種與遺傳相關的腎小球基底膜發(fā)育障礙性疾病，并不涉及炎癥、免疫等因素，故我們推測其腎臟的VCAM-1表達情況應與正常腎臟相似，而且本研究結(jié)果證實了這點。在腎小球腎炎時，不管是人還是動物模型，其腎小球內(nèi)皮細胞的VCAM-1表達均增多，而且它還可表達在炎癥腎小球的其他部位，包括新月體細胞和系膜細胞6-7。Seron等8觀察了50例腎小球疾病和小管間質(zhì)性疾病腎組織中VCAM-1表達，發(fā)現(xiàn)新月體腎炎、血管炎、狼瘡性腎炎和IgA腎病患者的腎小管上皮細胞VCAM-1表達均有不同程度的增加，其中以血管炎者增加最為明顯。HSPN作為兒科常見的小血管炎所致的繼發(fā)性腎小球腎炎，本研究發(fā)現(xiàn)其近曲腎小管、腎小球及腎間質(zhì)中可見斑點狀分布的VCAM-1呈陽性信號，以腎小管及腎間質(zhì)為著，隨著系膜細胞的增殖，VCAM-1在上述部位表達增加，并隨ISKDC病理分級增加陽性信號表達增強，且腎組織VCAM-1表達與ISKDC腎病理分級間呈顯著正相關，而與腎臟IgA和C3沉積情況無顯著相關，提示腎組織VCAM-1的表達情況可以直接反映腎臟病變的嚴重程度，同時也說明VCAM-1可能參與了HSPN的發(fā)病過程。眾所周知，尿蛋白水平是臨床上評估HSPN患兒病情嚴重程度和判斷其預后的一個常用的良好指標，它的增加往往提示病情的惡化。本研究顯示HSPN患兒的腎組織VCAM-1表達與24 h尿蛋白量呈顯著性正相關，這可進一步說明HSPN患兒的腎組織VCAM-1表達與病情嚴重程度存在密切關系，其機制可能如下：炎癥細胞黏附于血管內(nèi)皮，導致腎小球與基底膜之間的黏附改變出現(xiàn)蛋白尿;黏附分子與其受體結(jié)合促進炎癥細胞浸潤，同時高表達的VCAM-1作為抗原提呈細胞造成細胞免疫腎損傷;腎小球的炎癥細胞釋放一些因子如轉(zhuǎn)化生長因子-、血小板源生長因子，導致細胞外基質(zhì)擴張、蛋白尿和腎小球硬化9?！緟⒖嘉墨I】 1 Rigante D,Candelli M,Federico G,et al.Predictive factors ofrenal involvement or relapsing disease in children withHenoch-Schonlein purpuraJ.Rheumatol Int,2005,25(1):45-48.2 Kawasaki Y,Suzuki J,Sakai N,et al.Clinical and pathologicalfeatures of children with Henoch-Schoenlein purpuranephritis: risk factors associated with poor prognosisJ.Clin Nephrol,2003,60(3):153-160.3 Mrowka C,Heintz B,Sieberth HG.VCAM-1,ICAM-1,and E-selectin in IgA nephropathy and Schonlein-Henochsyndrome:differences between tissue expression and serumconcentrationJ.Nephron,1999,81(3):256-263.4 Pall AA,Howie AJ,Adu D,et al.Glomerular vascular cell ad-hesion molecule-1 expression in renal vasculitisJ.J ClinPathol,1996,49(3):238-342.5 中華醫(yī)學會兒科學分會腎臟病學組.小兒腎小球疾病的臨床分類、診斷及治療J.中華兒科雜志,2001,39(12):746-749.6 Ogawa T,Yorioka N,Ito T,et al.Ultrastructural localizationof vascular cell adhesion molecule-1 in proliferative andcrescentic glomerulonephritisJ. Virchows Arch,1996,429(4-5):283-291.7 Mulligan MS,Johnson KJ,Todd RF 3rd,et al.Requirementsfor leukocyte adhesion molecules in nephrotoxic nephritisJ.J Clin Invest,1993,91(2):577-587.8 Seron D,Cameron JS,Haskard DO.Expression of VCAM-1in the normal and diseased kidneyJ.Nephrol Dial