整和素5、1在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義 作者:賈京綿，趙瑞力，安英杰，趙偉，趙晶【摘要】 目的 探討整和素5、1在鼻息肉組織中的表達(dá)及其與嗜酸粒細(xì)胞凋亡的相關(guān)性。方法 采用流式細(xì)胞法檢測糖皮質(zhì)激素治療前后的鼻息肉組織（13例）中整和素5、1含量及凋亡的嗜酸粒細(xì)胞，并與7例健康人下鼻甲黏膜檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果 鼻息肉組織中有大量嗜酸粒細(xì)胞浸潤，明顯高于下鼻甲黏膜組；整和素5、1主要表達(dá)在嗜酸粒細(xì)胞，其次在血管內(nèi)皮細(xì)胞也有表達(dá)；鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞表面均有整和素5、1表達(dá)，而下鼻甲黏膜組只有2例有整和素5、1表達(dá)，兩組標(biāo)本嗜酸粒細(xì)胞中整和素5、1的表達(dá)差異有顯著性（P<0.05）；激素治療后鼻息肉中整和素5、1的表達(dá)有下降趨勢，但差異無顯著性（P>0.05）。結(jié)論 整和素5、1在鼻息肉中高表達(dá)，但對嗜酸粒細(xì)胞凋亡的影響尚不能得出有意義的結(jié)論。 【關(guān)鍵詞】 整和素5、1；鼻息肉；嗜酸粒細(xì)胞；凋亡 鼻息肉是鼻部的常見病，發(fā)病率1%4%1，具體的發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。嗜酸粒細(xì)胞增多是其主要的病理特征，也是發(fā)病的關(guān)鍵。組織對嗜酸粒細(xì)胞的清除是依靠自身的凋亡作用來完成的。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測糖皮質(zhì)激素治療前后鼻息肉組織中整和素5、1表達(dá)情況，并分析其在鼻息肉嗜酸粒細(xì)胞聚集及凋亡過程中的作用。 1 資料與方法 1.1 一般資料 選取2003年9月2005年12月依據(jù)海口標(biāo)準(zhǔn)2診斷為慢性鼻竇炎伴鼻息肉患者13例，均為型13期。男8例，女5例，年齡1763歲，平均46.7歲。同時期住院行鼻中隔黏膜下切除術(shù)患者下鼻甲黏膜標(biāo)本7例。男5例，女2例，年齡2139歲，平均29.7歲。 1.2 標(biāo)本收集 所有患者經(jīng)變應(yīng)原試驗確定無變應(yīng)性鼻炎病史，就診前至少1個月未用過激素及抗組胺藥物治療。鼻息肉患者一經(jīng)確診，咬取小塊息肉組織備用，然后進(jìn)行激素治療：丙酸氟替卡松噴鼻200g/噴，2噴/次，1次/d，連續(xù)4周。4周后給予鼻息肉摘除手術(shù)，留取息肉組織標(biāo)本備用。下鼻甲黏膜在患者手術(shù)時取得。所有標(biāo)本均分2份。 1.3 主要試劑和儀器 整和素5、1鼠抗人單克隆抗體購自博士德公司，蘇木精-伊紅（HE）染色劑、離心機(jī)（國產(chǎn)LDZ5-2型）、流式細(xì)胞儀（美國庫爾特公司FAScan-420型產(chǎn)品）及其配套軟件均由河北醫(yī)大四院腫瘤研究所提供。 1.4 檢測方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，按常規(guī)制成石蠟塊保存?zhèn)溆谩z測時一組蠟塊制成5m厚的石蠟切片，常規(guī)HE染色，200倍光鏡下記數(shù)炎癥細(xì)胞高分區(qū)嗜酸粒細(xì)胞的數(shù)量。另一組標(biāo)本常規(guī)脫蠟至水后，取5g組織用眼科剪刀在260目尼龍網(wǎng)上制成單細(xì)胞懸液，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗1次，離心1500r/min， 5min，棄上清液，重復(fù)上述沖洗、離心步驟，復(fù)制體積為0.2ml含1105單細(xì)胞懸液，分2管，一管為PE標(biāo)記鼠抗人5、1單克隆抗體，另一管為IgG PE陰性對照抗體。每管放0.1ml單細(xì)胞懸液充分混勻后室溫暗處靜置15min，每管加20ml PBS，上機(jī)檢測。流式細(xì)胞儀檢測時使用激發(fā)波488nm，橫軸為綠熒光，縱軸為90側(cè)向散射光，記數(shù)5000個，在直方圖上，以PE標(biāo)記IgG對照單抗調(diào)整并確定電壓及放大倍數(shù)。 凋亡檢測采用APO 2.7標(biāo)記法取1106個細(xì)胞，加入digitonin（sigma），冰浴20min，用冷PBSF沖洗1遍，加20ml APO2.7-PE，震蕩、混勻，室溫避光15min，用PBSF沖洗1遍，棄上清液，重懸，避光至上機(jī)檢測。 1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 實驗結(jié)果采用統(tǒng)計軟件SAS 6.0進(jìn)行分析，用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 2 結(jié)果 13例激素治療前鼻息肉標(biāo)本中均有大量嗜酸粒細(xì)胞浸潤，下鼻甲黏膜中雖有嗜酸粒細(xì)胞浸潤，但數(shù)量明顯少于鼻息肉組織；激素治療后的鼻息肉標(biāo)本中嗜酸粒細(xì)胞明顯減少，但仍高于下鼻甲黏膜。整和素5、1主要在嗜酸粒細(xì)胞中表達(dá)，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中亦可見整和素5、1表達(dá)；在鼻息肉組織中的表達(dá)明顯高于下鼻甲黏膜，兩者差異有顯著性（P<0.05）；在糖皮質(zhì)激素治療后的鼻息肉組織中整和素5、1的表達(dá)略較治療前的鼻息肉組織中減少，但兩者差異無顯著性（P>0.05）。見表1。表1 整和素5、1在鼻息肉中的表達(dá)情況 （xs，%） 本研究發(fā)現(xiàn)，不論激素治療與否，均未見凋亡的嗜酸粒細(xì)胞。 3 討論 鼻息肉是以黏膜炎性病程進(jìn)展及纖維滲出為主，以大量的炎細(xì)胞尤其是嗜酸粒細(xì)胞浸潤為病理特點。本研究結(jié)果證實鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞含量大大高于下鼻甲黏膜，顯示嗜酸粒細(xì)胞聚集在鼻息肉的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。這與以往的研究結(jié)果一致。嗜酸粒細(xì)胞從外周血跨過血管壁并定向聚集到鼻黏膜局部，這一過程需要借助包括整和素、選擇素等多種黏附分子來介導(dǎo)35。白細(xì)胞從血液進(jìn)入組織的前提是白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附，這一過程包括白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)選擇素、啟動黏附過程，使白細(xì)胞流動減慢并沿血管壁滾動；血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子，活化以整和素為代表的黏附分子6；整和素介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞緊密黏附，白細(xì)胞穿越內(nèi)皮細(xì)胞移行進(jìn)入組織。但某種特征性黏附分子表達(dá)失控則引起異常的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致疾病發(fā)生。 大量研究證實糖皮質(zhì)激素可以通過抑制多種細(xì)胞因子的表達(dá)來減少嗜酸粒細(xì)胞的浸潤。張羅等7報道布地奈德治療可減輕鼻息肉組織中炎性細(xì)胞的浸潤，提示糖皮質(zhì)激素類藥物可能使鼻息肉組織中細(xì)胞因子IL-5的表達(dá)水平下降。機(jī)體正常狀態(tài)下，整和素5、1呈低表達(dá)，當(dāng)病變局部的細(xì)胞因子如IL-5等釋放時，整和素5、1等表達(dá)量上調(diào)，使內(nèi)皮細(xì)胞對嗜酸粒細(xì)胞的黏附作用增強(qiáng)，進(jìn)而選擇性地聚集于鼻黏膜。本研究中丙酸氟替卡松治療4周鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞的浸潤程度明顯減輕，同時鼻息肉組織中整和素5、1陽性細(xì)胞的數(shù)量較未經(jīng)治療的鼻息肉組織有下降趨勢，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義?？赡苁怯捎冢海?）標(biāo)本不是新鮮組織；（2）藥物本身的作用強(qiáng)度、劑量、作用方式和療程等因素的作用，使糖皮質(zhì)激素對整和素5、1在鼻息肉組織中表達(dá)的影響顯得不明顯。 本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測鼻息肉與正常下鼻甲黏膜中整和素5、1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)鼻息肉組織中的整和素5、1的表達(dá)明顯高于下鼻甲黏膜（P<0.05），提示整和素5、1在鼻息肉形成過程中起著一定作用。整和素5、1主要在嗜酸粒細(xì)胞中表達(dá)，整和素5、1的高表達(dá)與嗜酸粒細(xì)胞的聚集密切相關(guān)，提示可能在嗜酸粒細(xì)胞黏附于基底膜過程中起促進(jìn)作用。實驗證明整和素5、1可選擇性地介導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附穿內(nèi)皮遷移，繼而促進(jìn)嗜酸粒細(xì)胞在鼻息肉組織中的浸潤8。 本研究采用流式細(xì)胞法檢測鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞的凋亡，不論激素治療與否，均未發(fā)現(xiàn)凋亡的嗜酸粒細(xì)胞，這與張羅等10關(guān)于糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)體內(nèi)鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞凋亡的研究結(jié)果相一致。但張羅等關(guān)于糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)體外鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞凋亡的研究結(jié)果得出與此相反的結(jié)果，而且Davidsson11最近的研究顯示，糖皮質(zhì)激素藥物噴鼻治療后鼻息肉中可檢測到凋亡嗜酸粒細(xì)胞，肯定了激素類藥物在體內(nèi)通過誘導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞的凋亡，促使炎性反應(yīng)消散的作用。 鼻腔應(yīng)用糖皮質(zhì)激素類藥物是目前臨床治療鼻息肉的重要輔助手段之一，相關(guān)研究從不同側(cè)面闡述了激素作用的途徑和機(jī)制。本研究關(guān)于嗜酸粒細(xì)胞浸潤的結(jié)果與以往的研究相符，但激素誘導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞凋亡的結(jié)果與以往的結(jié)果有不盡相同之處，有待進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Bachert C，Gevaert P，Holtappels G，et al.Nasal polyposis：from cytokines to growth.Am J Rhinol，2000，14：279-290. 2 中華醫(yī)學(xué)會耳鼻咽喉科分會，中華耳鼻咽喉科雜志編委會.慢性鼻竇炎鼻息肉臨床分型分期及內(nèi)窺鏡手術(shù)療效評定標(biāo)準(zhǔn).中華耳鼻咽喉科雜志，1998，33：134-135. 3 李華斌，許庚，李源，等.P-選擇素在鼻息肉中的表達(dá)和機(jī)制.中華耳鼻咽喉科志，2002，37：356-359. 4 Sneller MC，F(xiàn)auci AS.Pathogenesis of vasculitis syndromes.Adv Rheumatol，1997，81：221-242. 5 Katz AM，Rosenthal D，Sauder DN，et al.Cell adhesion molecules structure.function，and 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