熱休克蛋白gp96在喉癌中的表達(dá)及臨床意義【摘要】 目的 檢測熱休克蛋白gp96在喉癌中的表達(dá)，并探討其在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測46例喉癌組織熱休克蛋白gp96的表達(dá)。結(jié)果 T12期喉癌患者癌組織與T34期患者比較，T12gp96表達(dá)的陽性百分率較高，其差異有顯著性意義（ P0.05）。病理學(xué)級患者與病理學(xué)級患者比較，級患者癌組織gp96表達(dá)的陽性百分率較高，其差異有顯著性意義（ P0.05）。有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者gp96表達(dá)的陽性百分率明顯低于無頸淋巴結(jié)病理轉(zhuǎn)移的患者(P0.01)。熱休克蛋白gp96陽性表達(dá)與患者年齡（P0.680）、性別（P0.888）、吸煙史（P0.819）、腫瘤生長部位（P0.580）無相關(guān)性。結(jié)論 熱休克gp96的表達(dá)與喉癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其表達(dá)可以作為判斷預(yù)后的參考指標(biāo)之一。 【關(guān)鍵詞】 熱休克蛋白 gp96 喉癌0 引言 熱休克蛋白（Heat shock protein,HSP）又稱應(yīng)激蛋白，是生物細(xì)胞在受熱或其他理化因素（如低氧、病毒感染、紫外線照射等）作用下產(chǎn)生的一組高度保守的蛋白質(zhì)。根據(jù)分子量的不同可以分為HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP（2223KD）及泛素（78KD）等幾個(gè)家族。熱休克蛋白作為分子伴侶，參與其他蛋白質(zhì)的折疊、運(yùn)轉(zhuǎn)、合成等過程。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)許多腫瘤細(xì)胞表面可以高度表達(dá)或特異表達(dá)不同亞族HSPs，在機(jī)體發(fā)揮抗腫瘤的特異性細(xì)胞毒免疫應(yīng)答中有重要作用。gp96是HSP90家族的成員之一，因分子量為96KD而得名。本文將探討熱休克蛋白gp96在喉癌中的表達(dá)及其與喉癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。1 資料與方法1.1 標(biāo)本來源 收集1999年12月2004年12月在白求恩國際和平醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科接受手術(shù)的46例喉鱗狀細(xì)胞癌患者，術(shù)前均未進(jìn)行化療和放療。所有病例臨床資料完整，其中男42例，女4例，年齡3680歲，平均57.8歲。根據(jù)國際抗癌協(xié)會(huì)（UICC）標(biāo)準(zhǔn)（1997）確定TNM分期。喉癌分型：聲門上型14例，聲門型32例；臨床T分期：期8例、期9例、期14例、期15例；病理學(xué)分級：鱗癌級15例，鱗癌級20例、鱗癌級11例；病理證實(shí)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組12例，無轉(zhuǎn)移組34例。所有標(biāo)本均離體后2h內(nèi)放入10%中性福爾馬林中固定24h，石蠟包埋，常規(guī)病理HE染色，并確定病理性質(zhì)和病理學(xué)分級。1.2 gp96蛋白的免疫組織化學(xué)檢測 常規(guī)石蠟切片，每張切片厚5m。采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測gp96蛋白表達(dá)，SABC試劑盒購自博士德公司，按試劑盒操作說明書操作。gp96抗體購自Santa公司，為多克隆抗體，工作濃度為1100。每次染色均設(shè)用PBS代替一抗的陰性對照。1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) gp96蛋白陽性以在組織切片中顯示細(xì)胞漿為淡黃色至深黃棕色者為陽性細(xì)胞標(biāo)志，凡細(xì)胞漿顯色強(qiáng)度與背景無明顯差別者為陰性細(xì)胞。細(xì)胞漿顯示為淡黃色為+，細(xì)胞漿顯示為黃棕色者為+，細(xì)胞漿顯示為深黃棕色者為+。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)經(jīng)Excel軟件整理，應(yīng)用美國SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。資料用單因素2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以雙側(cè)P0.05為差異有顯著性意義，0.01為差異有非常顯著性意義。2 結(jié)果2.1 gp96蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá) 在喉鱗狀細(xì)胞癌中g(shù)p96蛋白陽性染色定位于腫瘤細(xì)胞胞漿，為粗細(xì)不一的棕黃至棕褐色顆粒。在46例喉鱗狀細(xì)胞癌中陽性表達(dá)率為100%。其中24例蛋白呈陽性+，陽性表達(dá)率為52.2%（24/46）;20例蛋白呈陽性+，陽性表達(dá)率為43.4%(20/46)，2例蛋白呈陽性+，陽性表達(dá)率為4.4%(2/46)。2.2 gp96蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與臨床因素之間的關(guān)系 用單因素2檢驗(yàn)分析46例喉鱗狀細(xì)胞癌患者的臨床因素與gp96蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。結(jié)果顯示，gp96蛋白陽性表達(dá)與患者年齡（P0.680）、性別（0.888）、吸煙史（0.819）、腫瘤生長部位（0.580）無相關(guān)性，見表1。 臨床T12期的喉鱗狀細(xì)胞癌患者共17例，其中g(shù)p96表達(dá)+為5例，占29.4%（5/17），+為10例，占58.8%(10/17)，+為2例，占11.7%(2/17); 而T34期患者29例中，gp96表達(dá)+為19例,占65.5(19/29)，+為10例，占34.5%(10/29)，+為0例。與T12期患者表達(dá)的gp96陽性百分率與T34期患者比較其差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義（P0.05），這說明隨著喉鱗狀細(xì)胞癌T分期增加,gp96蛋白的表達(dá)逐漸降低。表1 46例喉鱗狀細(xì)胞癌患者gp96表達(dá)和臨床病理因素之間的關(guān)系（略）2.3 gp96蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與腫瘤病理學(xué)因素之間的關(guān)系 用單因素2檢驗(yàn)分析46例喉鱗狀細(xì)胞癌患者的腫瘤病理學(xué)因素與gp96蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。結(jié)果顯示，病理學(xué)級患者共15例，其中g(shù)p96蛋白陽性表達(dá)+為5例，占33.3%(5/15)，+為8例，占53.3%(8/15)，+為2例占13.3%(2/15)，而病理學(xué)級患者共31例，其中g(shù)p96蛋白陽性表達(dá)+為19例，占61.2%(19/31)，+為8例，占25.8%(8/31)，+為12例，占38.7%(12/31)，+為0例。病理學(xué)級患者gp96的陽性表達(dá)率與病理學(xué)級患者比較其差異有顯著性意義（0.05）；這說明隨著病理學(xué)分級的增加，gp96蛋白的表達(dá)逐漸降低。 46例喉鱗狀細(xì)胞癌患者中有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的12例,其中g(shù)p96蛋白陽性表達(dá)+為11例，占91.7%(11/12)，+為1例，占8.3%(1/12)，+為0。 而無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者共34例，其中g(shù)p96蛋白陽性表達(dá)+為13例， 占38.2%(13/34)， +為19例， 占55.8%(19/34)， +為2例， 占5.9%(2/34)。用單因素2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者gp96的陽性表達(dá)率與無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者比較其差異有顯著性意義（0.01）。3 討論 gp96又稱葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(Glucoseregulated protein 94,GRP94), 正常情況下主要存在于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，有研究表明在一些病毒感染、腫瘤等應(yīng)激情況下，可以同病毒或腫瘤的抗原肽形成復(fù)合物，并與MHC1類分子結(jié)合，提呈給CTL細(xì)胞，激發(fā)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答。有學(xué)者從腫瘤細(xì)胞中提取gp96抗原肽形成復(fù)合物，證實(shí)這種復(fù)合物具有疫苗樣作用1。 有研究發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤、結(jié)腸癌、宮頸癌、肝癌、乳腺癌中g(shù)p96表達(dá)增高2，3，Song4認(rèn)為gp96表達(dá)與腫瘤的侵襲性有關(guān)，我們研究發(fā)現(xiàn)gp96在喉癌中表達(dá)，腫瘤臨床T分期和病理分級低的患者表達(dá)高，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者表達(dá)高，提示低表達(dá)可能與喉癌的發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究為應(yīng)用抗原肽形成復(fù)合物進(jìn)行免疫治療提供一個(gè)實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Yedavelli SP,Guo L,Daou ME, et al. Preventive and therapeutic effect of tumor derived heat shock protein gp96 in an experimental prostate cancer modelJ. Int J Mol Med, 1999,4(3):243248.2 Missotten GS, Journeede KJ, WolffKouendaul D, et al. Heat shock protein expression in the eye and in uveal melanomaJ. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2003,44(7):30593065.3 李承霖，孟忻，郎振為. gp96熱休克蛋白在原發(fā)性肝癌中的檢測及其意義J.