雌激素受體亞型及HPV16-L1E7 在宮頸病變組織中的表達(dá) 作者：商宇紅 白麗霞 鮑冬梅 李小平 魏麗惠 【關(guān)鍵詞】 雌激素受體【摘要】 目的 探討雌激素受體的不同亞型（ER、）及人乳頭狀瘤病毒（HPV）在宮頸病變中的相互作用及其對宮頸病變的影響。方法 應(yīng)用免疫組化兩步法檢測ER/亞型及HPV16-L1/E7蛋白在66例不同程度宮頸病變組織中的表達(dá)。結(jié)果 在宮頸癌組中，HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）者及ER陽性率高于非宮頸癌組，差異有顯著性（P=0.019和P=0.029），并且HPV的表達(dá)狀態(tài)與ER的表達(dá)相關(guān)。結(jié)論 ER可能通過影響HPV在宿主細(xì)胞中的感染狀態(tài)對宮頸病變的發(fā)展起一定影響。關(guān)鍵詞 雌激素受體 人乳頭狀瘤病毒 宮頸病變 免疫組化 【Abstract】 Objective To investigate the expression and interaction between the two isoforms of the ER and HPV16in cervical lesions.Methods The immunohistochemistry method was used to study the expression ofandisoforms of ER and HPV16-L1/E7in66cases including chronic inflammation，atypical hyperplasia and invasive cancer of cervix.Results There were more ERpositive cases and HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）cases in the carcinoma group（P=0.019and P=0.029），and the states of HPV expression was closely related to whether ERpositive or not.Conclusion ERmaybe affect the progression of cervical lesions by determining the infection state of HPV.Key words human papillomavirus estrogen receptor cervical lesion immunohistochemistry 宮頸癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，HPV特別是HPV16、18等高危型別感染是引起宮頸癌變的首要因素。但HPV感染并非誘發(fā)宮頸癌的唯一因素，尚需與其他因素協(xié)同作用才能導(dǎo)致宮頸惡性病變的發(fā)生。臨床資料提示，HPV感染與雌激素及其受體在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中可能存在某些協(xié)同作用。本課題通過免疫組化方法研究ER的不同亞型及HPV的不同片斷在宮頸正常上皮、非典型增生及宮頸癌上皮中的表達(dá)，探討ER及HPV與不同程度宮頸病變的聯(lián)系。1 材料與方法 1.1 標(biāo)本收集 選取1998年1月2002年9月間，我院婦科陰道鏡下活檢或手術(shù)切除獲得的宮頸浸潤癌、CIN及慢性宮頸炎組織共66例，其中宮頸浸潤癌組織21例，CIN28例，慢性宮頸炎17例，年齡2082歲，平均（42.9616.38）歲。經(jīng)10%甲醛固定后石蠟包埋，5m連續(xù)切片。全部標(biāo)本均經(jīng)我院病理科診斷確診。 1.2 主要試劑 鼠抗人ER單克隆抗體C-542:加拿大Stressgen公司生產(chǎn)。兔抗人ER多克隆抗體:美國Upstate公司生產(chǎn)。鼠抗人HPV16-E7單克隆抗體8C9:美國Zymed公司生產(chǎn)。鼠抗人HPV16-L1單克隆抗體CAMVIR-1: 美國Neomarkers公司生產(chǎn)。PV-9000免疫組化試劑盒:北京中山生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。宮頸癌SiHa細(xì)胞由香港科技大學(xué)梁純博士饋贈。 1.3 實驗方法 參照PV-9000免疫組化試劑盒說明進(jìn)行兩步法免疫組化染色。實驗中以PBS代替一抗作為陰性對照，并分別以MCF-7及SiHa細(xì)胞爬片染色作為ER、ER和HPV16-E7、HPV16-L1的陽性對照。結(jié)果判定:光學(xué)顯微鏡下觀察宮頸上皮細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒沉淀者為陽性，陰性結(jié)果細(xì)胞染色同背景（藍(lán)紫色）。根據(jù)HPV表達(dá)情況分為三組:A組為HPV16-L1（-）/HPV16-E7（-）;B組為HPV16-L1（+）/HPV16-E7（+）;C組為HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）。 1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗、單因素方差分析、 2 檢驗及多因素相關(guān)分析等統(tǒng)計學(xué)分析。 2 結(jié)果 2.1 HPV在不同病變宮頸組織中的表達(dá) 在全部66例標(biāo)本中，HPV16-L1表達(dá)陽性者30例，HPV16-E7陽性者45例（圖1，圖2）。并發(fā)現(xiàn)在HPV16-L1表達(dá)陽性的標(biāo)本中，HPV16-E7亦均為陽性表達(dá)（B組），約占45.5%;HPV16-E7陰性者，HPV16-L1亦陰性（A組），約占31.8%;但在HPV16-E7陽性標(biāo)本中則有一部分未見HPV16-L1的表達(dá)（C組），約占22.7%。以 2 檢驗統(tǒng)計宮頸不同程度病變組其免疫組化結(jié)果的差異。結(jié)果顯示，在宮頸癌組中，HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）者（C組）占42.9%，而非宮頸癌組中僅占13.3%，差異有顯著性（P=0.019），見表1。 表1 宮頸不同程度病變中ER 亞型及HPV16的表達(dá)情況 略 2.2 雌激素受體在不同病變宮頸組織中的表達(dá) 在全部標(biāo)本中，ER表達(dá)陰性者35例，陽性者31例，宮頸癌組中陽性率（38.1%）低于非宮頸癌組（51.1%），但其差異無顯著性（P>0.05）。ER陰性者38例，陽性者28例，比較其在不同病變組所占比例，可見宮頸癌中陽性率為21.9%，明顯高于非宮頸癌組（P=0.029，表1，圖3，圖4）。 2.3 雌激素受體與HPV16表達(dá)狀態(tài)的關(guān)系 比較在A、B、C組中，不同雌激素受體亞型所占比例，可見ER與HPV16的表達(dá)狀態(tài)無關(guān)（P>0.05）;而與HPV16-E7及HPV16-L1均陽性組（B組）相比，僅HPV16-E7陽性組（C組）中ER的表達(dá)率更高，差異有顯著性（P=0.034，表2）。表2 ER亞型與HPV16表達(dá)的關(guān)系 略 以t檢驗比較ER陰性組平均年齡（40.8514.47）歲略低于ER陽性組（46.0018.70）歲，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.27）。以單因素方差分析比較A、B、C組的平均年齡，分別為（37.3810.79）歲、（43.1118.13）歲、（49.5416.86）歲，雖有上升趨勢，但差異無顯著性（P>0.05）。 以多因素相關(guān)分析比較ER及年齡因素對C組與其他病例的影響，結(jié)果顯示，年齡因素的相關(guān)系數(shù)為0.494， 圖1 略 圖2 略 圖3 略圖4 略 ER陽性表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為0.025，說明HPV的表達(dá)狀態(tài)與年齡因素?zé)o明顯相關(guān)性而與ER的表達(dá)相關(guān)。 3 討論在宮頸癌的發(fā)病原因中，HPV作為非常重要的致病因素而被廣為研究。其中高危型HPV感染與宮頸癌之間的關(guān)系已得到公認(rèn)。但多項研究證實:單純的HPV感染本身并不足以引起宮頸癌變，即使是HPV的整合型感染，其感染本身亦多是引起上皮的永生化改變。有研究指出，在HPV16感染中，只有20%發(fā)展為非典型增生，而這些癌前病變中，亦只有大約1/5發(fā)展為宮頸癌。近年來多項研究表明，HPV尚需與其他因素協(xié)同作用，才會導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。隨著宮頸癌發(fā)病年齡的年輕化趨勢，及大規(guī)模人群調(diào)查顯示:口服避孕藥者HPV感染及宮頸癌發(fā)生的風(fēng)險率上升，HPV感染與性激素及其受體的關(guān)系日益引起重視 1，2 。既往文獻(xiàn)通過免疫組化及原位雜交等方法檢測正常宮頸上皮、非典型增生及宮頸癌組織中雌激素受體及HPV的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)ER在宮頸正常組織中的表達(dá)率較非典型增生及宮頸癌組織中高。并發(fā)現(xiàn)，雖然ER陽性患者更易發(fā)生HPV感染，但其表達(dá)情況不同，HPV感染的型別亦不同。在ER陰性的宮頸組織中，HPV16、18型感染更為多見;而在ER陽性的宮頸組織中，多為HPV31、33、35型等感染 37 。本研究中應(yīng)用免疫組化方法檢測了ER兩種不同亞型及最常見的高危型HPV感染型別HPV16病毒的兩個不同抗原部位在宮頸良性病變、非典型增生及宮頸癌上皮中的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)在HPV16-L1表達(dá)陽性的標(biāo)本中，HPV16-E7亦均為陽性表達(dá)。但在HPV16-E7陽性標(biāo)本中則有一部分未見HPV16-L1的表達(dá)。由于HPV與宿主染色體整合的位點常發(fā)生在E2和E1的開放讀碼框區(qū)域，HPV環(huán)鏈最常見在E1或E2的開放讀碼框內(nèi)斷裂，并導(dǎo)致部分或全部喪失E4、E5、L1和L2，而僅有E6和E7整合入宿主DNA。因此在整合型感染時，L1編碼的HPV病毒衣殼蛋白常出現(xiàn)表達(dá)缺失。根據(jù)HPV病毒整合的這一特點，可通過HPV16-E7和HPV16-L1的表達(dá)情況推測HPV感染后在宿主細(xì)胞中存在的物理狀態(tài):當(dāng)僅有HPV16-E7表達(dá)陽性而HPV16-L1陰性時（C組），可能為整合型感染;而二者均陽性者（B組）可能為游離型感染。在本實驗宮頸癌組 中，HPV16-E7陽性而HPV16-L1陰性組（C組）的比例相對較高，而慢性宮頸炎組中二者均表達(dá)組（B組）的比例相對更高。這也與既往研究已經(jīng)證實的HPV整合型感染更易導(dǎo)致宮頸上皮癌變的理論相一致。 在本實驗中，宮頸癌組中ER表達(dá)的陽性率（38.1%）低于非宮頸癌組（51.1%），與以往文獻(xiàn)報道一致 8 ，但其差異無統(tǒng)計學(xué)意義，考慮可能與病例數(shù)相對較少有關(guān)。隨病變程度的增高，ER的表達(dá)有上升趨勢，且宮頸癌組的陽性率明顯高于非宮頸癌組。同時在本實驗中發(fā)現(xiàn)，與HPV16-E7及HPV16-L1均陽性組（B組）相比，僅HPV16-E7陽性組（C組）中ER的表達(dá)率更高而ER的表達(dá)率無明顯差異。由于從HPV感染進(jìn)入宿主細(xì)胞到病毒整合到宿主適當(dāng)?shù)奈恢眯枰荛L時間，其潛伏期甚至可長達(dá)二、三十年，并且雌激素及其受體亦存在年齡相關(guān)性，因此本實驗中以多因素相關(guān)分析比較ER及年齡因素對C組與A、B組的影響，結(jié)果顯示，年齡因素的相關(guān)系數(shù)為0.494，ER陽性表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為0.025，說明HPV的感染類型與年齡因素?zé)o明顯相關(guān)性而與ER的表達(dá)可能相關(guān)，即有ER表達(dá)時，HPV的整合型感染更多見。 有本實驗推測，在宮頸上皮中，ER可能通過影響HPV在宿主細(xì)胞中的感染狀態(tài)對宮頸病變的發(fā)展起一定影響。而通過HPV16病毒的兩個不同抗原部位在宮頸良性病變、非典型增生及宮頸癌上皮中的表達(dá)情況，可以推測HPV感染后在宿主細(xì)胞中存在的物理狀態(tài)，為預(yù)測宮頸病變的轉(zhuǎn)歸提供依據(jù)。 參考文獻(xiàn) 1 Webster K，Taylor A，Gaston K.Oestrogen receptor transcripts associated with cervical human papillomavirus infection.Sex Transm Infect，2002，78（3）:210-214. 2 Auborn KJ，Woodworth C，Dipaolo JA，et al.The interaction between HPV infection and estrogen metabolism in cervical carcinogenesis.Int J Cancer，1991，49（6）:867-869. 3 Shew ML，McGlennen 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