HPLC法測(cè)定異煙肼注射液含量【摘要】目的建立用HPLC法測(cè)定異煙肼注射液含量的方法。方法HPLC法，采用HypersilBDSC18柱，以乙腈0.075molL-1磷酸二氫鈉溶液（體積比595）為流動(dòng)相，流速為1.0mLmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)262nm。結(jié)果異煙肼在9.9099.00gmL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率100.3%（RSD=1.0%）。結(jié)論本法操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為本品質(zhì)量控制方法?！娟P(guān)鍵詞】HPLC法；異煙肼注射液；異煙肼Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminingthecontentofisoniazidinisoniazidinjection.MethodSampleswereanalyzedonanHypersilBDSC18columnusingacetonitrile0.075molL-1sodiumdihydrogenphosphate(595)asmobilephase.Theflowratewas1.0mLmin-1andthedetectionwavelength262nm.ResultsTherewasagoodlinearityforisoniazidintherangeof9.90-99.00gmL-1(r=0.9999).Theaveragerecoverywas100.3%withRSD1.0%.ConclusionThemethodissimple,rapidandaccurate,whichissuitableforthequalitycontrolofisoniazidinjection.Keywords:HPLC；isoniazidinjection；isoniazid異煙肼注射液為抗結(jié)核藥，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)采用溴酸鉀滴定法測(cè)定異煙肼含量1。本文參照文獻(xiàn)2建立了HPLC法測(cè)定異煙肼注射液的含量，試驗(yàn)結(jié)果表明，本法操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于異煙肼注射液含量測(cè)定。1儀器與試藥1.1儀器Agilent1100液相色譜儀（安捷倫公司），HypersilBDSC18柱（菲羅門(mén)公司），TU1901型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），AG285電子天平（梅特勒-托利多公司）。1.2試藥異煙肼對(duì)照品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.4%，批號(hào)T2006236，廣州白云山明興制藥有限公司提供）。異煙肼注射液（批號(hào)061101，061102，061103；規(guī)格2mL100mg，廣州白云山明興制藥有限公司生產(chǎn)）。乙腈（色譜純，德國(guó)默克公司），磷酸二氫鈉（分析純），水（注射用水，廣州白云山明興制藥有限公司自制）。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的制備取異煙肼對(duì)照品約100mg，精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液（0.9900mgmL-1）；精密量取2mL，置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.03960mgmL-1的對(duì)照品溶液。2.2供試品溶液的制備精密量取異煙肼注射液2mL（約相當(dāng)于異煙肼100mg），置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。2.3空白對(duì)照溶液的制備除異煙肼外，按處方采用“2.2”項(xiàng)下的方法制備空白對(duì)照溶液。2.4色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱為HypersilBDSC18柱（200mm4.6mm，5m），流動(dòng)相為乙腈0.075molL-1磷酸二氫鈉溶液（體積比595），流速為1.0mLmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm，柱溫為30，進(jìn)樣量為20L。分別將對(duì)照品溶液、供試品溶液與空白對(duì)照溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數(shù)以異煙肼峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。空白對(duì)照溶液在異煙肼峰處無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。圖1對(duì)照品（A）、樣品（B）及空白對(duì)照（C）高效液相色譜圖（1.異煙肼）略2.5線性關(guān)系考察分別精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL對(duì)照品貯備液，置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定，記錄色譜圖，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度()為橫坐標(biāo)計(jì)算得回歸方程：A=32.697-14.975，r=0.9999。結(jié)果表明，異煙肼在9.9099.00gmL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.6精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果峰面積的RSD為0.04%，表明方法精密度良好。2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)異煙肼注射液（061101）5份，依法測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果異煙肼含量的RSD為0.4%，表明方法重復(fù)性較好。2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液于0、3、6、12、24、48h分別依法測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果峰面積的RSD為0.6，表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。2.9回收率試驗(yàn)精密量取已知含量為1.023mgmL-1的異煙肼注射液（批號(hào)061101）1.0mL，置50mL量瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備液（0.9900mgmL-1）0.8、1.0、1.2mL，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。表1異煙肼回收率試驗(yàn)結(jié)果略2.10樣品測(cè)定取本品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算異煙肼含量。同時(shí)采用溴酸鉀法測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表2樣品測(cè)定結(jié)果略3討論3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇照紫外可見(jiàn)分光光度法，取對(duì)照品溶液在200400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，繪制吸收光譜圖，測(cè)得異煙肼的最大吸收波長(zhǎng)為262nm；另取空白對(duì)照溶液在此范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在異煙肼最大吸收峰處無(wú)干擾，故選擇262nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。3.2流動(dòng)相的選擇曾選用不同比例的甲醇0.075molL-1磷酸二氫鈉溶液、乙腈0.025molL-1磷酸二氫鈉溶液、乙腈0.075molL-1磷酸二氫鈉溶液為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)以乙腈0.075molL-1磷酸二氫鈉溶液（體積比595）為流動(dòng)相的測(cè)定結(jié)果比較理想，故確定以此為流動(dòng)相。3.3本法與現(xiàn)有藥品標(biāo)準(zhǔn)方法的比較經(jīng)試驗(yàn)，本文方法與溴酸鉀法1測(cè)定異煙肼注射液的含量結(jié)果無(wú)顯著差異，且本法靈