男性個(gè)體 Amelogenin 基因座 Y 片段缺失 1 例 男性個(gè)體 Amelogenin 基因座 Y 片段缺失 1 例 【關(guān)鍵詞】 amelogenin基因；性別鑒定；法醫(yī)學(xué)【中文圖書號(hào)】 19919 2；df795 2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 b【文章編號(hào)】 1007 9297(2007)03-0235-03在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中擴(kuò)增 amelogenin 基因是進(jìn)行生物樣本的性別鑒定的主要方法，并為大多數(shù)的商品化法醫(yī)鑒定試劑盒如 ampf1str identifiertm(abi)、 powerplex(promega)等所采用。但個(gè)體的amelogenin基因如果發(fā)生突變，致 x或 y 特異片段擴(kuò)增失敗，則可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的性別判定。現(xiàn)將作者工作中所見(jiàn) 1 例男性個(gè)體amelogenin基因座 y 片段缺失及其分析報(bào)道如下。材料與方法一、簡(jiǎn)要案情唐某，男性， 24 歲，被人用刀砍傷頭部及雙上肢等部位。chelex 一 100 法提取唐某血樣、兇器菜刀上血痕采用 ampflstr identifiertm熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒，進(jìn)行 l6個(gè)基因座復(fù)合擴(kuò)增，用 abi3100 自動(dòng)遺傳分析儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。唐某血樣的基因分型與菜刀刀柄及刀刃上上檢出人血的基因分型一致，但 amelogenin基因座均只檢出 x片斷，各基因座結(jié)果見(jiàn)表 1和圖 1。用 ampf1str y filer tm(abi)熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒，進(jìn)行 dys456 等 16個(gè) y 染色體基因座復(fù)合擴(kuò)增除 dys458 未檢出，其余基因座唐某的基因分型與菜刀上檢出人血的基因分型一致，結(jié)果見(jiàn)表 2 和圖 2。唐某體檢結(jié)果：身高 168 citi，身體結(jié)實(shí)粗壯，嗓音粗，喉結(jié)突出胡須明顯，乳房正常，睪丸及外生殖器外形正常。 =、樣本當(dāng)事人血樣；已知正常男性、女性血樣各 30 例。表 1 ampflstr identifiertm 熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒分型結(jié)果墅 墨 騖 覯舅 簸 蟹堡 l 一喜 毒 ； }； 一一 r _l器 囂 0 崔 l 00。 。 ⋯； 一一 ⋯； 一 。 }；鼉 l r 詩(shī)咕 r 喑 矗 畚嚙 j 圖 1 ampflstr identifiertm 熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒分型三、引物設(shè)計(jì)根據(jù) ncbi 數(shù)據(jù)庫(kù)提供的 y 染色體上amelo genin序列 (accession： ac_000067 1gi： 89161219)，自 作者簡(jiǎn)介 曾于寶 (1972 )，男，漢族，云南玉溪人，醫(yī)學(xué)學(xué)士，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證檢驗(yàn)及研究工作 通訊作者 聶勝潔 (1975一 )，女，漢族，云南昆明人，在讀博士，講師，主要從事人類遺傳學(xué)、法醫(yī)物證教學(xué)、檢驗(yàn)鑒定及研究工作； rel： +86 087l一533883l； e mail： nsjgtcahoo 13ore q： n基金項(xiàng)目 云南省科技廳自然科學(xué)青年基金 (編號(hào)： 2004c0020q) 236 表 2 ampfistr y filer tm 熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒分型結(jié)果。 0|冀 一籬 0 妻奠 0 0 00_ 槲 ； ll 一一 一 ⋯；一 ⋯；⋯； ⋯； ⋯；⋯； ⋯；⋯； 一 ⋯；⋯； ⋯； 一一 r一 ⋯； 一一一 ⋯； 。 ⋯； ⋯；⋯； 一⋯；一 ⋯； ⋯；⋯； ⋯； 一強(qiáng)豫韜 _螄 鏹鯽 強(qiáng) 魏臻囅醞褥豫鼯鎊臻 壤糍?gòu)?qiáng)秘 獅 撬 強(qiáng) 挑豫 瓣強(qiáng)赫 穩(wěn) 辣 瓣瓣攤 秘鏹 * i 目 i8 * * 瓣 ! 勰 噍 糍 镕 i l 強(qiáng) n一 。 一 l 一。 |一 |一 j ⋯；。 l一 一 ， u 一 一 u一 {； jij}；|0 0 0 0_ 0 l 之 0 |e二 二 二 二二 l l 一 譬_- 鬻 ! 鼉 琶 薯 1 1 。鬻 ； ，嘎 ⋯；一 ⋯； ⋯； 唪一 ⋯；⋯； ⋯；⋯； 一，一一⋯；⋯；t 一一 ⋯； ⋯；⋯； ⋯；⋯；⋯；⋯； ⋯；⋯；⋯； ⋯；⋯；圖 2 ampf1str y filer tm 熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒分型圖譜行設(shè)計(jì)引物，特異擴(kuò)增 y 染色體上 amelogenin 片段。擴(kuò)增 3453 3695 片段 (產(chǎn)物長(zhǎng)度263bp)的引物序列為： p1(forward)： 5 tgagaaatccc1tragatacttacag3 ， p2 reverse)： 5 taaagttggagacctggaagc3 。擴(kuò)增 6068 6300 片段 (產(chǎn)物長(zhǎng)度 25lbp)的引物序列為： p1(forward)： 5 ggtccaacaactcagggtct3 ，p2(reverse)： 51 -icc1trattgc 唧 gcc3 。四、檢測(cè)法律與醫(yī)學(xué)雜志 2007 年第 14卷 (第 3 期 )對(duì)當(dāng)事人，已知正常男性，女性樣本進(jìn)行 pcr 擴(kuò)增。反應(yīng)體系 20ixl： 121x1 ddh20、 31x1 dna 模板、 1ixl正反向引物混合物 (20pmol ix1)、 21xl dntpf200m)、 21x1 lox 反應(yīng)緩沖液。 pcr擴(kuò)增： 97oc5min預(yù)變性， 94 1min， 58 1min， 72lmin， 28 個(gè)循環(huán)， 727min ， 4 保存。擴(kuò)增產(chǎn)物用聚丙烯酰胺凝膠電泳。銀染顯色。結(jié) 果 y染色體上的兩個(gè) amelogenin 片段在正常男性及涉案人均檢測(cè)到特異性條帶，正常女性均未檢測(cè)到特異性條帶(圖 3，圖 4)。圖 3 正常男性、女性，涉案人 amelogenin3453 3695片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜注： 1、 3⋯；5 9 11、 13 為正常男性； 2、4、 6、 10、 12、 14為正常女性； 7、 15為當(dāng)事人； 8、 16為 marker圖 4 正常男性、女性，涉案人 ameiogenin6068 6300片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜注： 1、 3⋯；5 9 11、 13為正常男性： 2、 4、 6、 10、12、 14 為正常女性； 7、 15為當(dāng)事人： 8、 16為 marker 討論牙釉質(zhì)蛋白基因 (amelogenin)為 x、 y染色體同源基因，擴(kuò)增 amelogenin基因，可同時(shí)檢驗(yàn) x和 y 染色體，根據(jù) sullivan方法設(shè)計(jì)的引物， x特異片段 106bp， y特異片段 112bp，檢測(cè)靈敏，結(jié)果解釋簡(jiǎn)單，且可以和 str 基因座復(fù)合擴(kuò)增，因此是法醫(yī) dna 分析進(jìn)行生物樣本的性別鑒定的最常選用的基因座【 23。在實(shí)際工作中，如果送檢樣本amelogenin基因性別檢測(cè)只檢出 x片段，為女性分型，與案情所反映的男性表現(xiàn)不符的原因有兩點(diǎn)： 1該個(gè)體是 46， xx 性反轉(zhuǎn)男性 (46，xxreversalmale，又稱 46， xx男性綜合征 )，這種個(gè)體由于缺乏 y法律與醫(yī)學(xué)雜志 2007年第 l4 卷 (第 3期 )染色體，故 amelogenin 基因只能檢出 x 片段。 46， xx性反轉(zhuǎn)男性特征為患者的遺傳性別 (染色體性別 )與性腺性別不相符。表型為男性，而染色體核型為正常女性，故稱性反轉(zhuǎn)。其體征通常為乳腺發(fā)達(dá)，須毛稀疏，陰莖小，睪丸小，不能或只 能產(chǎn)生少量精子，因而無(wú)生育能力，一般無(wú)智力障礙及顯著軀干畸形。是一種少見(jiàn)的染色體畸形。發(fā)病率約為 1 20 000。該病的發(fā)生機(jī)制較復(fù)雜。通常不是由單一的原因所引起。定位 y 染色體短臂上的性別決定區(qū)基因 (sry)的存在是 xx男性綜合征的主要遺傳基礎(chǔ)。 46， xx男性大多帶有一段易位的 y 染色體 dna 位點(diǎn)，其內(nèi)含一個(gè)開發(fā)閱讀框架。即 sry 基因，它是決定睪丸發(fā)育的重要基因 4， 一。2該個(gè)體是 46， xy 男性，但 y 染色體上的 amelogenin 基因同源區(qū)發(fā)生了基因突變，特別是引物結(jié)合區(qū)的突變。致使 amelogenin 基 因的 y 片斷擴(kuò)增失敗。在本案唐某外生殖器外觀正常，乳腺、陰毛等男性第二性征表現(xiàn)明顯。且檢測(cè)的 y 染色體特異基因座僅有 1 個(gè)基因座不能夠檢出產(chǎn)物，據(jù)此分析唐某具有 y 染色體，為 46， xy男性，amelogenin基因擴(kuò)增未檢出 y 特異片段是因 y染色體上的amelo genin 基因發(fā)生突變所致，根據(jù) y 染色體上 amelo genin基因序列設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物均擴(kuò)增出特異性片段進(jìn)一步證實(shí)該分析。amelogenin基因性別檢測(cè)靈敏、簡(jiǎn)便，在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中具有較高的應(yīng)用價(jià)值， amelogenin 基因性別判定失敗在一些人群中已見(jiàn)報(bào) 道i7,8,91，在工作中若發(fā)現(xiàn) amelogenin對(duì)性別的判定結(jié)果與其它線索或證 237 據(jù)不符時(shí)，應(yīng)考慮是否 y 等位基因丟失的可能，需結(jié)合其它方法進(jìn)行分析，加以核實(shí)。參考文獻(xiàn)【 1】 sullivan km， mannucci a， kimpn cp， et a1 a rapid andquan titative dna sex test： fluorescence-based pcr analy sis of x-y homologous gene amelogeninj bioteehniques， 1993， 15： 636-6412haas-roehholz h， weiler g additional primer sets for anamelogenin gene pcr based dna sex testj int j legalmed， 1997， 1 10： 312-315【 3】 kimpmn cp， oldroyd nj， watson sk ， et a1 validation of high ly discriminating multiplex short tandem repeat amplifica tion systems for individual identificationj eleetrophorsis， 1996， 17，1283-12934andersson m， page dc， chapelle a chromosomey specificdna is transferred to the short a 珊of x chromosome inhuman xx mesj sci， 1986， 233： 786-788【 5】周家榮，張思仲人類性別決定基因研究進(jìn)展 j】中 華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志， 1993， 10(4)： 222【 6黃英，陳美鈺，孫瓊，等 8例46， xx 男性和 16例 xy女性的 sry 序列研究 j】中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志， 1996， 13： 228230【 7santos fr， pandya a， tyler-smith c reliability of dna based sex testsj nat genet， 1998，18： 103【 8】 rofey pe， eekhof ci， kuhl jl a rare mutation in theamelogenin gene and its potential investigative ramificationsj j forensic sei， 2000a5： 1016-1019【 9thangaraj k， reddy ag， singh l is the amelogenin genereliable for gender identification in forensic casework an dprenatal diagnosisj int j legal med， 2002， 116： 121-123(收稿：2006-11-29；修回： 2007 04 20)(上接 228頁(yè) )識(shí)、技能特長(zhǎng)，是嚴(yán)格意義上的獨(dú)立法人，具有中立性，強(qiáng)調(diào)公益性、服務(wù)性，是符合面向社會(huì)服務(wù)的法醫(yī)司法鑒定機(jī)構(gòu)的比較理想的形式。附屬于醫(yī)學(xué)院校的兼職鑒定機(jī)構(gòu)在儀器、設(shè)備、專家實(shí)力等方面具有明顯技術(shù)、學(xué)術(shù)優(yōu)勢(shì)，鑒定人具有固定的職業(yè)收入，鑒定設(shè)備、場(chǎng)所等費(fèi)用鑒定機(jī)構(gòu)無(wú)需承擔(dān)，其鑒定成本相對(duì)較低，并在解決疑難案件方面發(fā)揮著重要作用。但司法鑒定是專家教授們的第二職業(yè)，他們對(duì)于一些纏訴、社會(huì)關(guān)系復(fù)雜案件，往往出