54 浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)   616 2006 配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定  液相色譜法  of in 006布  2006施  浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局  發(fā)布   616 2006      言  本標(biāo)準(zhǔn)附錄  本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。  本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）。  本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳雪昌、鄭斌、劉士忠、鐘志。   616 2006 1 配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定   液相色譜法  1 范圍  本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的液相色譜測(cè)定方法。  本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定。  2 規(guī)范性引用文件  下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修 訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。   6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法   料采樣方法  3 原理  樣品中呋喃西林和呋喃唑酮 經(jīng) 乙腈提取，正己烷脫脂，固相萃取柱凈化，反相色譜柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。  4 試劑  本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑在呋喃西林和呋喃唑酮出峰處應(yīng)無干擾峰，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合  6682 中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。  喃西林標(biāo)準(zhǔn)品：純度 99%。呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度 99%。  己烷：分析純。  腈：分析純。  醇：色譜純。  酸二氫鈉 : 分析純。   磷酸二氫鈉溶液。   磷酸鹽緩沖溶液 (分析純。  二胺四乙酸 (液（ 50g/L），分析純。  相萃取柱 (150  準(zhǔn)儲(chǔ)備液： 100，準(zhǔn)確稱取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品 , 用少量乙腈溶解后 , 再用甲醇定容為 100 L 的儲(chǔ)備液 , 避光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。  準(zhǔn)中間 液： 2，用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。臨用時(shí)配制。  5 儀器與設(shè)備  相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。  品粉碎機(jī)。  質(zhì)機(jī)。  心機(jī)， 4000  616 2006 2 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。  相萃取裝置。  聲儀。  渦混勻器。  吹儀。  平，感量為   6 色譜條件  譜柱： 5m， 250同類型號(hào)色譜柱。  溫：室溫 。  動(dòng)相：乙腈  磷酸二氫鈉溶液（ 積比 20： 80）。  速：  樣量： 20L。  外檢測(cè)波長(zhǎng)： 365 7 分析步驟  樣制備  按  集實(shí)驗(yàn)室樣品。將實(shí)驗(yàn)室樣品（通常 500g）粉碎，使之全部通過 1，充分混勻。貯于磨口瓶中備用。  取   稱取樣品 5g（準(zhǔn)確至 置于 50丙烯離心管，加入乙腈 20勻，超聲波輔助提取10質(zhì)（ 10000r/24000r/心 5濾，用 20腈重復(fù)提取，合并 濾液于125液漏斗。  化  分液漏斗中加入 25乙腈飽和的正己烷，振搖 5置分層后，將乙腈層放入旋發(fā)瓶中，于40減壓蒸餾濃縮近干，加入 5 磷酸鹽緩沖液 (解，待凈化。  固相萃取柱依次以 10醇， 10水，  2%液， 10水預(yù)淋洗，上樣，以 10氣吹至近干，流動(dòng)相準(zhǔn)確定容至 2 膜過濾，待 析。  注意：所有操作都應(yīng)在避光條件下進(jìn)行 。  作曲線  取呋喃西林和呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)中間液，用 流動(dòng)相稀釋成濃度為 2. 0  的標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別取 20峰高為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品中呋喃西林和呋喃唑酮含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。  譜測(cè)定  取試樣濾液 20錄峰高，從工作曲線查得樣品提取液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量。若 616 2006 3 樣液濃度超過線性范圍，用流動(dòng)相稀釋。  8 計(jì)算  樣品中呋喃西林和呋喃唑酮的含量按下式計(jì)算。  m f  式中： X 試樣中 呋喃西林和呋喃唑酮 的含量，單位為毫克每千 克（ mg/  C 試樣溶液中 呋喃西林和呋喃唑酮 的含量，單位為毫克每升（ ）；  m 試樣質(zhì)量，單位為克（ g）；  V 試樣溶液體積，單位為毫升（   f 提取液的稀釋倍數(shù)。  9 方法準(zhǔn)確度和精密度  本方法回收率為   本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 10%。  10 方法檢出限  本方法檢出限為 1.0 mg/ 11 線性范圍  本方法的 呋喃西林和呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍為   。  12 結(jié)果表述  檢驗(yàn)結(jié)果保留 2 位有效數(shù)字。  在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕 對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的 15%。   616 2006 4 附錄 A （資料性附錄）  呋喃西林和呋喃唑酮高效液相色譜圖  2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0 . 0 1 2 . 5M i n u t e  . 2 30 . 0 00 . 2 50 . 5 00 . 7 51 . 0 01 . 2 51 . 5 0m A d : s