密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 茶毛蟲病毒的病理特征 和 病毒 劑的 作用特性研究 on on I 摘 要 茶毛蟲 是 我國茶區(qū)的一種重要害蟲，發(fā)生時(shí)常造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，而在茶園中噴施化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行防治易造成農(nóng)藥殘留 、害蟲抗性等 問題。 茶毛蟲病毒 （ 是 茶毛蟲高效專一性病原物， 能在田間誘發(fā)茶毛蟲病毒病的流行，是控制茶毛蟲的有效手段。 蘇云金桿菌（ 是一種廣泛使用的廣譜性殺蟲劑，對多種 害蟲具有 防治效果 。 茶毛蟲病毒 是 茶毛蟲核型多角體病毒與蘇云金桿菌混配而成的生物農(nóng)藥，具有無毒、無殘留、不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn) 。 本 研究 運(yùn)用 包埋、超薄切片和 電子顯微鏡 技術(shù) 研究 了 用生物測定方法研究了 協(xié)同毒力、 田間 藥效 和 作用特性 。結(jié)果表明： 1. 多角體為 不規(guī)則的三角四面體 ，大小為 均 病毒 與多粒包埋 型 病毒 并存 ， 多粒包埋病毒束每束 含 兩個(gè)病毒粒子 。 病毒粒子 和 核衣殼 的外形 呈桿狀 ，兩邊平行，兩端鈍圓 。多粒包埋型病毒粒子大小平均為 粒包埋型病毒粒子 大小 平均 為 2. 毛蟲中腸細(xì)胞 ，多角體陸續(xù)形成到形成大量成熟的多角體大約需要 13天。整個(gè)侵染過程 先是 細(xì) 胞核膨大 ， 核內(nèi)染色質(zhì)凝集 ， 細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn) 病毒形成基質(zhì) ， 繼而核衣殼在 病毒形成基質(zhì) 中大量 形成，多角體蛋白在核衣殼周圍聚集并逐漸發(fā)育成熟，隨感染時(shí)間的增長，出現(xiàn)大量的成熟多角體并充滿整個(gè)細(xì)胞。 病毒的病理特征與病癥特征相吻合 。 3. 數(shù) 在不同時(shí)間和不同溫度下 是動(dòng)態(tài)的， 要表現(xiàn)為相加作用， 在 16 、 19 、 28 溫度條件下 感染前期 有一定增效作用。 4. 有速效 作用 和 拒食 作用 。 蟲的 致死 30時(shí)間（ 蟲 藥后 19天的 拒食率（以病毒水劑作為對照）達(dá)到 5. 齡幼蟲的 0為 9769 1065倍（ 103 l）， 000倍 液 對茶毛蟲幼蟲的 田間防效 第 18天為 。 6. 用 。 后 7天的死亡率分別為 關(guān)鍵詞 茶毛蟲病毒 蘇云金桿菌 形態(tài)學(xué) 病理特征 作用特性 協(xié)同毒力 a in on as a is an by in , a of in a is a of is of as to on to as 1. is a of an in of in of of of 2. of At in in in of 3. is of 6 ,19 8 4. as 8 , 0 of on 9th 5. 769 1065 （ 103 l） . 000 ) on 8th 6. a of 5.8 5.6 of to 錄 第一章 緒論 . 1 究的目的和意義 . 1 內(nèi)外研究現(xiàn)狀 . 2 毛蟲的發(fā)生及防治現(xiàn)狀 . 2 毛蟲病毒的研究現(xiàn)狀 . 2 t 的研究現(xiàn)狀和應(yīng)用情況 . 7 合生物農(nóng)藥的研究現(xiàn)狀 . 7 究內(nèi)容 . 9 術(shù)路線圖 . 10 第二章 形態(tài)特征及侵染中腸細(xì)胞的病理特征 . 11 料與方法 . 11 驗(yàn)材料 . 11 器設(shè)備 . 13 驗(yàn)方法 . 13 果與分析 . 15 形態(tài)特點(diǎn) . 15 染茶毛蟲幼蟲中腸細(xì)胞的超 微結(jié)構(gòu)和病理特征 . 16 第三章 劑的作用特性研究 . 18 料與方法 . 18 驗(yàn)材料 . 18 驗(yàn)方法 . 19 果與分析 . 22 毒力測定 . 22 協(xié)同毒力 . 22 拒食作用 . 23 速效作用 . 24 田間藥效試驗(yàn) . 25 兼治作用 . 26 第四章 結(jié)論與討論 . 27 小結(jié) . 27 毒的形態(tài)特征和病理特征 . 27 劑的作用特性 . 27 討論 . 28 毛蟲病毒的株系之分 . 28 毛蟲病毒病的病理特征與病程的關(guān)系 . 29 間的相互關(guān)系 . 29 毛蟲病毒制劑在茶園內(nèi)的科學(xué)應(yīng)用技術(shù) . 30 蟲病毒的附加效應(yīng) . 30 問題與展望 . 31 毛蟲病毒的基因工程重組 . 31 毛蟲病毒的工廠化生產(chǎn)技術(shù) . 32 毒在環(huán)境中的監(jiān)測及檢驗(yàn)方法研究 . 32 考文獻(xiàn) . 33 圖版 . 36 致 謝 . 46 作 者 簡 歷 . 47 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 英文縮略表 0 英文縮略表 1 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 毛蟲核型多角體病毒 蘇云金桿菌 茶毛蟲核型多角體病毒 尺蠖核型多角體病毒 0% 0% 致死時(shí)間 30%致死時(shí)間 角體 s 肯氏新復(fù)極差檢 驗(yàn)法 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 究的目的和意義 茶葉是世界三大無酒精飲料之一，深受世界人民的喜愛，我國既是茶葉的故鄉(xiāng)，也是世界上主要 的 產(chǎn)茶國之一。 2005 年我國茶園面積約 130 萬公頃， 年產(chǎn)茶葉約 90 萬噸， 約占世界茶葉總產(chǎn)量的 25 （ 2006） 。 從 19 世紀(jì)以來茶葉一直是我國出口創(chuàng)匯的重要物資， 據(jù)我國海關(guān)統(tǒng)計(jì) ， 2005 年 我國茶葉 出口數(shù)量 噸， 出口金額達(dá) 美元 ，同比分別增長 2005 年我國茶葉出口量再創(chuàng)歷史新高，穩(wěn)居世界第三 （ 蔡軍 ， 2006） 。 茶樹是一種多年生的 常綠 作物，主要生長在亞熱帶、熱帶和暖溫帶，氣候條件溫暖宜于病蟲雜草蔓延、繁衍和孳生。我國已記載的茶樹害蟲種類有 500 多種，病害 100 多 種，其中造成危害的，每年約給茶葉生產(chǎn)帶來 10 30的產(chǎn)量損失，在局部地區(qū)和局部年份損失則更大 （ 陳宗懋， 2002） 。建國以來，茶樹植保工作陸續(xù)展開， 六七十年代 利用化學(xué)防治在茶葉生產(chǎn)中取得了良好的保產(chǎn)效果 。 隨著生活水平的 逐步 提高，人們對環(huán)境、健康提 出了更高的要求， 在茶樹病蟲害防治中要求盡量減少化學(xué)農(nóng)藥的使用 ，這對茶葉植保工作提出了更高的要求 。 2006 年歐盟和日本 均 出臺(tái) 了更為嚴(yán)格的茶葉衛(wèi)生質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 增 加 了 檢測農(nóng)藥種類，提高 了茶葉準(zhǔn)入門檻 ，對我國茶葉進(jìn)入國際市場設(shè)置了非關(guān)稅的“綠色壁壘”，成為我國茶葉出口面臨的一個(gè)突出問題。 同時(shí)， 無公害茶、綠色茶和有機(jī)茶 的認(rèn)證、生產(chǎn)和消費(fèi)在 全國 范圍內(nèi)正在蓬勃的發(fā)展 ，進(jìn)一步 引發(fā)了對 生物農(nóng)藥的需求。 茶毛蟲是 常在我國各個(gè)茶區(qū)爆發(fā)成災(zāi) 的主要害蟲，常 造成嚴(yán)重的 經(jīng)濟(jì)損失 ，進(jìn)行茶毛蟲生物防治方法的研究具有實(shí)用性意義。 本 研 究 著 眼 于 使 用 生物農(nóng)藥 茶毛蟲病毒 劑來 解決茶園內(nèi)茶毛蟲及其它害蟲的為害問題， 通過研究茶毛蟲病毒的形態(tài)學(xué)特征、病理學(xué)特征，以及茶毛蟲病毒 劑 的作用特性達(dá)到以下的目的和意義。 （ 1） 研究明確茶毛蟲病毒的形態(tài)學(xué)特征 ，為進(jìn)一步研究茶毛蟲病毒的株系篩選和分子生物學(xué)打下基礎(chǔ)。 （ 2） 研究明確茶毛蟲病毒的病理特征 和 侵染機(jī)理 ，為病毒 的 大量繁殖提供理論依據(jù) ，為進(jìn)一步研究 病毒和宿主的作用關(guān)系 打下理論基礎(chǔ)。 （ 3） 研究明確茶毛蟲病毒 劑 的作用特性，為進(jìn)一步開展 茶毛蟲病毒 劑中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 2 的應(yīng)用技術(shù)研究提供理論基礎(chǔ)。 內(nèi)外 研究 現(xiàn) 狀 茶毛蟲 的發(fā)生及 防治現(xiàn)狀 茶毛蟲（ 名茶毒 蛾 、擺頭蟲等，屬鱗翅目毒蛾科，是我國茶區(qū)的一種重要害蟲。幼蟲咬食茶樹葉片，使葉片殘缺不全，嚴(yán)重時(shí)連芽葉、樹皮、花和幼果咬食殆盡，僅留禿枝，嚴(yán)重影響了茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)，造成重大經(jīng)濟(jì)損失，還可加害油茶、山茶 、柑桔等經(jīng)濟(jì)作物 。同時(shí) 茶毛蟲體表 布 滿 毒毛 ， 人體皮膚觸及會(huì)紅腫痛癢，嚴(yán)重妨礙采茶和茶園管理 。在浙江、江蘇、安徽等省茶毛蟲一年發(fā)生 2 代（浙江溫州一年 3 代），以卵塊在老葉背面越冬，越冬卵在 翌年 4 月上、中旬開始孵化。幼蟲 6 7 齡，具群集性 。幼齡幼蟲 聚集在葉片背面取食 下 表皮和葉肉 ， 留上表皮成黃綠色 半透明薄膜狀 ，成長后許多幼蟲整齊排列 在 葉背，自葉尖或葉緣咬食葉片。 近年來茶毛蟲常在我國各個(gè)茶區(qū)爆發(fā)成災(zāi)， 1995 年在福建福鼎 （ 馬靜等， 1996） 、 1997 年在安徽 （ 鄧余良等， 1997）以及 2002 年在重慶 （ 沈云樹， 2003） 茶毛蟲大面積為害所造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)千萬元。 目前茶毛蟲 的 防治主要有農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治、 物理防治和 生物防治等 方法 ，農(nóng)業(yè)防治 主要是利用 茶園 栽培管理措施來控制茶毛蟲的為害 ；化學(xué)防治可使 用菊酯類農(nóng)藥； 物理防治可以使用燈光誘殺等手段； 生物防治 除了保護(hù)天敵等手段外主要是在茶園內(nèi)使用病毒制劑、 劑及植物 源 或礦物源農(nóng)藥 。 但是現(xiàn)有的防治手段也還存在著 一些 問題，并不能很好的滿足當(dāng)前茶葉生產(chǎn)的需要。化學(xué)農(nóng)藥存在污染環(huán)境、易造成農(nóng)藥殘留及潛在威脅消費(fèi)者健康等問題 ；而純 劑的田間使用 效果 差， 持效期短；純 劑又存在 殺蟲譜狹窄、見效慢等缺點(diǎn)， 且由于 在生物農(nóng)藥劑型方面的研究還比較薄弱，國內(nèi)適合有機(jī)茶園和出口茶園使用的商品化制劑比較少， 因此 需加強(qiáng)生物農(nóng)藥的研究，盡快滿足生產(chǎn)需要。 茶 毛蟲病毒的研究現(xiàn)狀 利用昆蟲病毒防治害蟲是生物防治的 重要 手段之一 。 昆蟲病毒在 農(nóng)業(yè)實(shí)踐 中的應(yīng)用已有 100 多年的歷史（ 1986），經(jīng)過研究者不懈的努力， 今天 許多昆蟲病毒如核型多角體病毒 (昆蟲痘病毒 (顆粒體病毒 (已 廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐 （ 呂鴻聲， 1982） 。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，世界上已從 1100 多種昆蟲中中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 3 發(fā)現(xiàn)了 1690 多株昆蟲病毒，其宿主涉及昆蟲 11 目 43 科，目前全世界注冊的桿狀病毒殺蟲劑已有 20 種，在森林、蔬菜和倉儲(chǔ)害蟲的防治中發(fā)揮了重要作用 （ 劉永平等， 2006） ，我國已從 7 目 35 科 127 屬的 196 個(gè)蟲種中分離到 247 株昆蟲病毒（ 陳濤， 1995） 。利用茶樹病毒防治茶樹害蟲從 50 年代起開始發(fā)展， 70 年以后在我國發(fā)展迅速。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國已從 40 多種茶樹害蟲上分離得 81 種昆蟲病毒。其中核型多角體病毒 45 種，顆粒體病毒 24 種，質(zhì)型多角體病毒 9 種，非包涵體病毒 3 種 （ 洪北邊， 1998） 。 茶 毛 蟲 核 型 多 角 體 病 毒 (簡稱 按 國際 病毒分類委員會(huì) ( 2005年 7月發(fā)表的最新的病毒分類第八次 報(bào)告 （ M et 005） ， 應(yīng)屬于桿狀病毒科（ 狀病毒屬（ 1957 年湖南省茶葉研究所在觀察茶毛蟲生活史及田間消長調(diào)查中，首次發(fā)現(xiàn)幼蟲染病，蟲體內(nèi)部液化，倒掛于茶樹枝葉上死亡，當(dāng)時(shí)稱為軟化病，后經(jīng)分離和形態(tài)觀察，證實(shí)病原為核型多角體病毒。 1957 年日本 分離到兩株核型多角體病毒，隨后在其它國家和地區(qū)也有相關(guān)報(bào)道 （ 1960） 。 1974 年在上海昆蟲研究所的協(xié)助和指導(dǎo)下，貴州中八農(nóng)場對得病致死茶毛蟲尸體浸出液進(jìn)行分析和提純，得到核型多角體病毒 （ 貴州中八農(nóng)場， 1974） 。福建農(nóng)科院茶葉研究所植保室采取涂片法檢查毒尸的尸液，觀察到多角體，初步認(rèn)定使茶毛蟲發(fā)病死亡的病毒是一種多角體病毒 （ 福建農(nóng)科院茶葉研究所植保室， 1979） ,這是國內(nèi)最早的明確鑒定茶毛 蟲核多角體病毒的報(bào)道，其它各省茶園也 陸續(xù) 報(bào)道了 茶毛蟲核型多角體病毒病的發(fā)生。 以前的研究者對 全性、增殖、推廣應(yīng)用等方面進(jìn)行了一定程度的研究，簡述如下。 毒病 患病 癥狀：煩燥不安，食欲減退，行動(dòng)遲鈍，對外界刺激反應(yīng)緩慢，呈明顯的腫漲。感病后期以腹足或尾足緊附葉背或枝干，頭部下垂，倒吊死亡，呈明顯的袋狀。幼蟲死亡后，體內(nèi)組織液化，充滿白色膿液， 表 皮易碎，一觸即破，無臭味。 角體在掃描電鏡下大多為不規(guī)則的多面體，有似三角形，四角形，多角形等形狀，表面光滑，少數(shù)有些皺折，多角體大小不一，直徑為 多數(shù)為 貴州中八農(nóng)場 ， 1974； 周顯頭 ， 1980； 楊 濟(jì)華 等， 1984； 鄒彤 等， 1992） 。電鏡下茶毛蟲病毒粒子為桿狀，大小約為 120 340角體有兩種包埋型：單個(gè)粒子包埋型和成束 粒子包埋型，后者大都為兩個(gè)粒子成一束，也有一束含 3 個(gè)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 4 或 4 個(gè)粒子的 。 用堿溶液溶解多角體所釋放出來的粒子與核多角體切片中的病毒粒子相比，其長短大小，稍有差異，其兩個(gè)包埋型的粒子，也有差異。經(jīng)堿 溶 液溶解釋放出的病毒粒子：在單粒包埋型中，其病毒粒子平均為 多粒包埋型中，病毒粒子約為 297.6 角體切面中的病毒 粒子：單粒包埋型和多粒包埋型病毒內(nèi)核部分大小分別為 276 在單粒包埋型觀察到一種多角體蛋白質(zhì)晶格，兩晶格間間距為 23 ，而兩晶格的中心距則為 （ 楊濟(jì)華 等， 1984；李琮池 等， 1983） 。 鄒彤報(bào)道了茶毛蟲病毒侵染后宿主細(xì)胞學(xué)的病變。在電鏡下觀察病毒侵染72 120 小時(shí)后，宿主中腸細(xì)胞器，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、板層小體、溶酶體等均有明顯的病變。侵染病毒 48 72 小時(shí)后，細(xì)胞核明顯膨大，核膜有些部分皺折，無定形高電子密度的病毒發(fā)生 基質(zhì)，其后，病毒發(fā)生基質(zhì)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，中間有核衣殼出現(xiàn)，少數(shù)核衣殼正在獲得套膜裝配成病毒粒子。侵染病毒 72 120小時(shí)后，線粒體的數(shù)目增多并拉長。有的線粒體腫脹，脊伸長，后來有些線粒體的脊斷裂成模糊不清乃至空泡化。有的線粒體開始出現(xiàn)破裂，其中大量核糖體外溢。侵染 120 小時(shí)后，少量線粒體出現(xiàn)同心園型的脊，膜已破裂，無形態(tài)學(xué)上的完整性，也有些殘破的線粒體被溶酶體自溶而成為髓樣小體，在同一張切片上，不同構(gòu)型線粒體的病變程度也 有差異。 侵染病毒 72 120 小時(shí)后，胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生，可見到粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的腔和小池等。部分 腫脹的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上核糖體的排列稀疏，有的核糖體大量脫落出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡化 ,有時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特化成板層小體，成為一個(gè)中空的 同心多層膜結(jié)構(gòu)。 隨著病程的進(jìn)展與細(xì)胞器的病理變化，細(xì)胞內(nèi)的核糖體顆粒增多，并且有部分的核糖體似以多聚體的形式存在。大約侵染 72 小時(shí)后，核糖體多以游離的形式存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。還有大量核糖體向胞核轉(zhuǎn)移靠近，可能通過核孔進(jìn)入核內(nèi)參加病毒的復(fù)制。病毒侵染后，細(xì)胞內(nèi)的溶酶體數(shù)目增加。特別是感染晚期，細(xì)胞器開始出現(xiàn)破損時(shí)，溶酶體進(jìn)行自體吞噬作用，有時(shí)成為單層膜所包圍的吞噬膜狀結(jié)構(gòu)的吞噬小泡 （ 鄒彤 等 ， 1992） 。 昆蟲病毒毒力的高低決定其是否具有應(yīng)用于生防的潛力。 當(dāng)茶毛蟲病毒濃度為 1 106，感染2 齡初幼蟲的半數(shù)蟲口減退期（ 在 13 14 天，以后即進(jìn)入死亡高峰，到18 天，減退率已達(dá) 90以上。病毒濃度為 106PB/， 16 天，最終減退率稍低于 1 106得結(jié)果，而未感染的對照，蟲口減退率僅為 （ 齊義鵬 等， 1986） 。 胡擁軍等研究 度與致死率的關(guān)系及感染時(shí)間與致死率的關(guān)系。計(jì) 算中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 5 出 染 液 濃 度 對 數(shù) 值 與 幼 蟲 死 亡 機(jī) 率 值 的 回 歸 直 線 方 程 為 ： y 關(guān)系數(shù) r 性相關(guān)顯著。 病毒感染后幼蟲死亡天數(shù)與累計(jì)死亡率機(jī)率值的回歸直線方程為： y 關(guān)系數(shù) r 胡擁軍等 ， 1992） 。 基因組大小為 平均分子量約為 106 道爾頓 （ 金明潔 等， 1985） 。 酶切圖譜已先后報(bào)道 （ 金明潔 等， 1985； 陳棣華等 ， 1987； 陳繩亮 等， 1999； 常國輝 等， 2001） 。 常國輝等（ 2001）以苜宿丫紋夜蛾多粒包埋核型多角體病毒 (稱 多角體蛋白基因所在酶切片段 ( F 片段 )為模板，用 記制備探針，首次確定了 多角體蛋白基因在 E 片段， B 片段， J 片段， A 片段，F(xiàn) 片段和 段的位置，并對其中的 G 片段進(jìn)行了克隆和亞克隆。該工作對于揭示該病毒與其它桿狀病毒的進(jìn)化關(guān)系，利用該病毒表達(dá)外源基因，以及構(gòu)建重組病毒殺蟲劑意義巨大。 目前已進(jìn)入病毒的 全基因組序列研究及 功能基因組學(xué)研究 階段 ， 以后研究者會(huì)將注意力更多的轉(zhuǎn)向基因工程重組茶毛蟲 病毒殺蟲劑 的研究 。 溫度對 染的作用：高溫潛伏期短，死亡快，但死亡率稍低，有的病蟲仍能化蛹。低溫潛伏期長，死亡慢，但死亡率高，無化蛹現(xiàn)象 （ 華中師范學(xué)院 生物系昆蟲病毒研究室茶毛蟲病毒組 ， 1979） 。 溫度 對幼蟲的 染病 影響較大， 17時(shí)， 5105 、 106、 5 106、 1 107、 107種濃度的病毒劑量感染 2 齡幼蟲， 14 天后 死亡率分別為 35、 40、 24時(shí)， 4 齡幼蟲對上述濃度的病毒較為敏感， 8 天后，感染死亡率分別為 （ 周顯頭 ， 1981） 。 日光和降雨對 影響不大。 用 茶樹葉片上涂葉處理，在茶園自然條件下經(jīng)過 1、 7、 12、 17 和 22 天后，分別喂飼感染 3 齡茶毛蟲幼蟲，其死亡率分別為 其致病毒力隨著時(shí)間延長而逐漸降低。涂葉 22 天后，使茶毛蟲幼蟲 健康幼 蟲致死率仍達(dá)到 說明茶園中能較穩(wěn)定存活一段時(shí)期且日光照射對其活性影響較小。茶園葉片不同部位涂抹病毒懸浮液 2h 后降雨，持續(xù) 4h 自然降雨量達(dá) 時(shí)又在自然條件下經(jīng) 12 天后采回毒葉作室內(nèi)接蟲感染試驗(yàn)，無論是葉面、葉背及全葉涂布病毒處理葉片飼喂茶毛蟲，罹病死亡率仍達(dá)到 86 96。說明 105雨對其感染活性影 響不大 （ 姚渭 等， 1993） 。 全性試驗(yàn)結(jié)果：大鼠經(jīng)口一次，多次和長期喂飼，經(jīng)呼吸道吸入；豚中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 6 鼠和家兔經(jīng)皮、眼粘膜接種，均未引起異常表現(xiàn)，各項(xiàng)生理、生化 指標(biāo) 正常，未見病理致變及 染。大鼠生殖試驗(yàn) 鼠受孕率，活產(chǎn)率，哺育成活率等 指標(biāo) 均正常，未引起畸胎； 鼠生長良好。 小鼠未見顯性致死效應(yīng)（ 李漢帆等 ， 1985） 。 用微核試驗(yàn)測定 茶尺蠖 油桐尺蠖 小白鼠的安全性，通過測定其骨髓中嗜多染紅細(xì)胞微核的出現(xiàn)頻率，證明無論是單獨(dú)或是混合感染方式均不能測出這 些病毒對骨髓細(xì)胞染色體有特定的損傷，而陽性對照 環(huán)磷酰胺所誘發(fā)的微核率與其相比極為顯著。該結(jié)果說明這三種 哺乳動(dòng)物小白鼠是安全的，同時(shí)對復(fù)合病毒殺蟲劑也是安全的 （ 陳海雷 等， 1991； 孫椒德等， 1996） 。用間接 ，以 109 份人血清（其中 5 份血清是由與 接觸史的人提供）作為抗原及抗體，與 其抗血清進(jìn)行檢測，以確定 果均呈陰性反應(yīng)，說明茶園應(yīng)用 蟲劑對人體無害 （ 石正麗等 ， 1993） 。以上結(jié)果都表明 試驗(yàn)動(dòng)物和人是安全的。 殖研究中有研究者認(rèn)為 增殖 的 蟲齡以 5 齡為好；濃度以 1 107好；感染期以 為好； 而能 影響 量的提高 的因子中 ，蟲齡居主導(dǎo)地位，濃度其次，感染期影響較小，而三個(gè)因素之間的相互作用影響甚微 （ 程修江等， 1991） 。 在前人的報(bào)道中， 致死率及蟲口減退率一般都在 85 100之間，其作用穩(wěn)定且持效期長；生態(tài)及環(huán)境因子對 果 雖 有一定影響，但最終 幼蟲 的致死率一般都高于 85%；大量關(guān)于 安全性研究表明 ， 哺乳動(dòng)物和人是安全的，因此 為一種昆蟲病 原物非常適合用于害蟲的生物防治。 經(jīng)進(jìn)行了初步的生產(chǎn)和應(yīng)用研究， 周顯頭于 1980 年報(bào)道了茶毛蟲核型多角體病毒的生產(chǎn)流程 。 孫椒德等于 1987 年在寧德縣茶場近 300 畝茶園進(jìn)行“ 福建一號 ” 毒株殺蟲劑示范應(yīng)用，十天時(shí)校正死亡率為 茶毛蟲核型多角體病毒 “ 福建一號 ” 毒株殺蟲劑在福建省內(nèi)茶區(qū)共示范噴用 8053 畝，平均防效為 且有 2 5 年的持續(xù)效果 。 (孫椒德 等， 1990； 1991)。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所研究試制出茶毛蟲病毒水劑、茶毛蟲病毒 劑和茶毛蟲病毒 劑，可分別應(yīng)用于 有機(jī)茶園和無公害茶園，試驗(yàn)結(jié)果表明 3 種劑型對兩代茶毛蟲均具有良好的防治效果，幼蟲期最終死亡率均達(dá) 100 （ 殷坤山 等， 2004） ，盡管還談不上已經(jīng)取得了多大的成效 ，但是該系列殺蟲劑已經(jīng)在茶毛蟲綜合管理項(xiàng)目中表現(xiàn)出控制茶毛蟲的良好 前景。 在多個(gè)省茶區(qū)進(jìn)行了示范性推廣并已用于實(shí)際生產(chǎn)。利用 治茶毛蟲，不僅防治效果好，后效期長，不容易產(chǎn)生抗性，能在田 間 長期控制害蟲種群，而且不污染環(huán)境，不傷害天敵，經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益及生態(tài)效益均十分顯著。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 7 研究現(xiàn)狀和應(yīng)用情況 蘇云金桿菌 (稱 簡稱 ,是包括 29 個(gè)（已鑒定）變種的產(chǎn)晶體芽孢桿菌，是世界上使用最廣泛的生物農(nóng)藥之一 ， 其作為生物農(nóng)藥使用已有較長的歷史（ 劉品賢 ， 1996；吳繼星， 1995） 。 作用機(jī)制是伴孢晶體破壞昆蟲中腸部位， 孢或營養(yǎng)體細(xì)胞從 腸道 進(jìn)入血腔，在那里迅速繁殖至大量菌體充滿血腔， 使 昆 蟲患敗血病而死亡。 要用于防治鱗翅目的多種害蟲，取得了良好的防治效果，且對人畜無害，無殘毒，不污染環(huán)境，不傷害天敵，殺蟲譜廣，害蟲不易產(chǎn)生抗性，是微生物農(nóng)藥的研究和應(yīng)用中最有成效 的一個(gè)。 的殺蟲速度雖比不上作用于神經(jīng)系統(tǒng)的有機(jī)合成殺蟲劑，但與其他作用方式的有機(jī)合成殺蟲劑相比也并不遜色。一般微生物殺蟲劑從感染到害蟲死亡需數(shù)天到數(shù)十天，應(yīng)用 ，害蟲取食 劑數(shù)小時(shí)則會(huì)停止取食活動(dòng)， 2 3 天死亡 （ 劉品賢 ， 1993；楊華等， 2003） 。大量 研究 表明 茶毛蟲防治效果顯著 （ 徐惠清等 ， 1999） ，朱運(yùn)華 等 （ 1999） 報(bào)道 得利防治茶毛蟲噴藥后 7 天平均防效高于 90；吳光 遠(yuǎn) （ 2000） 報(bào)道 蘇特靈 400 倍液、 600 倍液對茶毛蟲幼蟲的毒力效果高，處理后 3 天分 別達(dá) 100和 曹明森 （ 1995）報(bào)道 室內(nèi) 2000 500 倍 2 3 齡茶毛蟲幼蟲 7 天死亡率可達(dá) 100 。但是 一般來說 樣的效果較好，產(chǎn)品的質(zhì)量卻存在不穩(wěn)定性，經(jīng)中國農(nóng)科院茶葉研究所近年來收集多種 品對茶毛蟲進(jìn)行生物測定的結(jié)果表明 ， 其 室內(nèi)毒效僅在 10 48之間，因此認(rèn)為在田間僅應(yīng)用純 劑不能取得令人滿意的防治效果。 前的應(yīng)用研究主要集中在篩選高毒菌株及 其 與化學(xué)農(nóng)藥或生物農(nóng)藥混用等方面。 合生物農(nóng)藥的研究現(xiàn)狀 大量報(bào)道證實(shí) 不同種類的生物殺蟲劑混用可提 高殺蟲效果：棉鈴蟲核型多角體病毒 (卵磷脂混用感染棉鈴蟲可提高感染率 38 （ 萬成松等， 2000） ；美洲粘蟲 顆粒體病毒 (用，使粘蟲的死亡率達(dá) 80，而單獨(dú)使用其死亡率只有 20 （ 劉強(qiáng)等， 1999） ；松毛蟲質(zhì)型多角體病毒 (白僵菌(用，使松毛蟲死亡率由 60 65提高到 75 85 （ 李喬等， 2000） 。國內(nèi)由 蘇云金桿菌 （ 組合生產(chǎn)的 “ 病毒 微生物復(fù)合殺蟲劑 ” 已經(jīng)取得了國家發(fā)明專利（ 1998）。陳素偉等 （ 1996） 報(bào)道質(zhì)型多角體病毒與 用，可迅速降低赤松毛蟲幼蟲的取食量。 因此， 針對病毒殺蟲劑殺蟲速度 慢 、殺蟲譜窄的問題，研究人員嘗試將病毒殺蟲劑與其它殺蟲劑如 維菌素（ 國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 第一章 緒論 8 混配，來彌補(bǔ)病毒殺蟲劑的缺點(diǎn)。 蘇云金桿菌侵染寄主后在 5 10造成中腸麻痹， 1 7 個(gè)小時(shí)停止取食， 1 3 天寄主死亡（ 1994）。相對的，桿狀病毒的最高毒性需要 2 5 天致死寄主，幼蟲可以一直取食作物直至死亡，但是桿狀病毒毒性高且效果穩(wěn)定 ，因此 在優(yōu)勢互補(bǔ)，藥效成分不相克等原則下，應(yīng)用 劑 防治害蟲有其獨(dú)特的優(yōu)勢， 是控制害蟲的 有效手段 。國外從 70 年代起就 大量報(bào)道了 用產(chǎn)生的增效作用 及良好的防治效果，但也存在一些爭論 。有學(xué)者認(rèn)為由于 麻痹幼蟲內(nèi)臟從而阻止幼蟲繼續(xù)取食，造成病毒攝入量低，因此會(huì)降低混劑的效果（ et 1973； e