乙肝五項檢測(乳膠法)(一)檢測目的乙型肝炎病毒標志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)檢測。(二)測定原理 HBsAg、HBsAh、HBeAg均采用雙抗體(原)夾心法原理。用抗HBsAg多克隆抗體包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的抗HBs鯫單克隆抗體HBsAh，應(yīng)用雙抗體夾心法原理，定性檢測血清血漿中HBsAg；用HBsAg重組抗原和鏈霉親和素一BSA包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的HBs如重組抗原和生物素一BSA及其他試劑，應(yīng)用雙抗體夾心法原理，定性檢測血清血漿標本中HBsAb；用抗HBeAg單克隆抗體(Ehl)包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的抗HBeAg單克隆抗體(Eh2)。應(yīng)用雙抗體夾心法原理，用于定性檢測血清或血漿中HBeAg。 HBsAg、HBsAb、HBeAg測試時，將血清血漿標本滴人試劑板加樣處標本在毛吸效應(yīng)下向E層析，如標本中含有相應(yīng)的待測物質(zhì)，在測試區(qū)(T)內(nèi)會出現(xiàn)一條紅色條帶，則是陽性結(jié)果。如標本中不含有相應(yīng)的待測物質(zhì)，則測試區(qū)(T)將沒有紅色條帶，是陰性結(jié)果。無論待測物質(zhì)是否存在于標本中，一條紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準。 HBeAh、HBcAh采用競爭法原理。用HBeAg重組抗原包被硝酸纖維素膜，配以乳膠標記的鼠抗HBeAg單克隆抗體。應(yīng)用競爭抑制法原理，定性檢測血清血漿巾HBeAI，；用HBcAg重組抗原包被硝酸纖維素膜，配以乳膠標記的HBcAb單克隆抗體，應(yīng)用競爭抑制法原理，定性檢測血清血漿中HB。Ah。 測試HB。Ah、HBcAb時，將血清血漿標本滴入試劑板加樣處，隨之標本在毛吸效應(yīng)下向上層析。如標本中含有相應(yīng)的抗體則同膜上測試區(qū)(T)的單克隆抗體競爭與預包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。如標本中沒有相應(yīng)的抗體，預包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原則同膜上測試區(qū)(T)的單克隆抗體全部結(jié)合。陽性標本，測試區(qū)(T)將沒有紅色條帶；陰性標本，測試區(qū)(T)會出現(xiàn)明顯的紅色條帶c無論相應(yīng)的抗體是否存在于標本中，一條紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(c)。質(zhì)控醫(yī)內(nèi)(c)所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準 (三)操作步驟 具體方法參照試劑盒說明書。舉例如下： 在進行任何測試前必須先完整閱讀使用說明書使用前將試劑板和血清血漿標本恢復至室溫(2030)。從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒(注意：在扣開鋁箔前應(yīng)先恢復至室溫)，在l小時內(nèi)應(yīng)盡快地使用。 1.將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用吸管吸取血清血漿標本，逐滴垂直加入于試劑板的五個加樣子L中(每孔2。3滴)。 2.加樣后立刻開始計時，等待紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘時讀取測試結(jié)果。在20分鐘后讀取的結(jié)果無效 (四)結(jié)果判定 由于前三個項目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗體(原)夾心法原理，后兩個項日HBeAb、HbcAb使用競爭法原理。因此前一：個項日與后兩個項目判讀方法是不同的請注意區(qū)別。 l .HBsAg、HBsAb、HbeAg (1)陽性(+)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(C)。陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。 (2)陰性(一)：質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)(T)內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標本中檢測不出待測物質(zhì)。 (3)無效：質(zhì)控區(qū)(c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在此情況下，應(yīng)再次仔細閱讀說明書，并用新的試劑盒重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。 (4)注意：在進行HBsAg、HBsAb、HbeAg測試時，測試區(qū)(T)內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。只要在規(guī)定的觀察時間內(nèi)，不論該條帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)該判為陽性結(jié)果。 2 HBeAb、HBcAb (1)強陽性(+)：僅質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶在測試區(qū)(T)內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。 (2)弱陽性(+)：質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)(T)內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：標本中含有待測物質(zhì)。 (3)陰性(一)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(c)。陰性結(jié)果表明：標本中檢測不出待測物質(zhì)。 (4)無效：質(zhì)控區(qū)(c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在此情況下，應(yīng)重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。 (五)注意事項 l.請控制判讀時間，測試結(jié)果應(yīng)在測定開始后20分鐘左右讀取，30分鐘后讀判定無效。 2.乳膠法乙肝五項檢測試劑板(血清血漿)只是定性的篩選乙肝病毒血清標志物的存在，不能確定血樣中病毒的含量。 3.由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時也由于標本中存在的干擾物質(zhì)，檢測結(jié)果可能有錯誤。對可疑結(jié)果應(yīng)作相應(yīng)的進一步檢測。 (六)生物安全防護 1.在檢測前，所有標本均應(yīng)視為“陽性”標本即生物危險品。 2.如操作中不慎灑落血液，要及時對污染臺面消毒處理。 3.操作前一定要做好自身防護(穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套)。 4.HBV對低溫、干燥、紫外線、70乙醇均有耐受性。煮沸10010分鐘、高壓蒸汽滅菌12115分鐘或f熱1602小時均可滅活HBV。510gL次氯酸鈉30分鐘，1：4000福爾馬林3772小時，O 5過氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。 (七)臨床意義 1. HBsAg陽性：血清HBsAg陽性，表示受檢者處于HBV的感染狀態(tài)。HBsAg也可從許多乙肝檢驗對象體液和分泌物中測出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。 2. HBsAh陽性：多見于乙型肝炎處于恢復期，或既往曾感染過HBV，現(xiàn)在已恢復，而且對HBV有一定的免疫力；同時，HBsAh陽性是對接種乙肝疫苗后產(chǎn)生效果，即接種免疫成功的指標。 3. HBeAg陽性：見于HBV感染的早期，表示血液中含有較多的病毒顆粒，提示肝細胞有進行性損害和高度傳染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于預測肝炎病情，HBeAg持續(xù)陽性，易轉(zhuǎn)為慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均為陽性的孕婦，可以將乙型肝炎傳播病毒給新生兒，其感染的陽性率為7090。 4. HBeAh陽性：多見于HBeAg轉(zhuǎn)陰的檢驗對象，意味著HBV部分被清除或抑制，病毒復制減少，傳染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌檢驗對象可檢出HBeAb；在HBsAg和HBsAh陰性時，如能檢出HBeAh和HhcAh，也能確診