54 浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) 616 2006 配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定 液相色譜法 of in 006布 2006施 浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布 616 2006 言 本標(biāo)準(zhǔn)附錄 本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳雪昌、鄭斌、劉士忠、鐘志。 616 2006 1 配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定 液相色譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修 訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 料采樣方法 3 原理 樣品中呋喃西林和呋喃唑酮 經(jīng) 乙腈提取，正己烷脫脂，固相萃取柱凈化，反相色譜柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。 4 試劑 本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑在呋喃西林和呋喃唑酮出峰處應(yīng)無(wú)干擾峰，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合 6682 中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。 喃西林標(biāo)準(zhǔn)品：純度 99%。呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度 99%。 己烷：分析純。 腈：分析純。 醇：色譜純。 酸二氫鈉 : 分析純。 磷酸二氫鈉溶液。 磷酸鹽緩沖溶液 (分析純。 二胺四乙酸 (液（ 50g/L），分析純。 相萃取柱 (150 準(zhǔn)儲(chǔ)備液： 100，準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品 , 用少量乙腈溶解后 , 再用甲醇定容為 100 L 的儲(chǔ)備液 , 避光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。 準(zhǔn)中間 液： 2，用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。臨用時(shí)配制。 5 儀器與設(shè)備 相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。 品粉碎機(jī)。 質(zhì)機(jī)。 心機(jī)， 4000 616 2006 2 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。 相萃取裝置。 聲儀。 渦混勻器。 吹儀。 平，感量為 6 色譜條件 譜柱： 5m， 250同類(lèi)型號(hào)色譜柱。 溫：室溫 。 動(dòng)相：乙腈 磷酸二氫鈉溶液（ 積比 20： 80）。 速： 樣量： 20L。 外檢測(cè)波長(zhǎng)： 365 7 分析步驟 樣制備 按 集實(shí)驗(yàn)室樣品。將實(shí)驗(yàn)室樣品（通常 500g）粉碎，使之全部通過(guò) 1，充分混勻。貯于磨口瓶中備用。 取 稱(chēng)取樣品 5g（準(zhǔn)確至 置于 50丙烯離心管，加入乙腈 20勻，超聲波輔助提取10質(zhì)（ 10000r/24000r/心 5濾，用 20腈重復(fù)提取，合并 濾液于125液漏斗。 化 分液漏斗中加入 25乙腈飽和的正己烷，振搖 5置分層后，將乙腈層放入旋發(fā)瓶中，于40減壓蒸餾濃縮近干，加入 5 磷酸鹽緩沖液 (解，待凈化。 固相萃取柱依次以 10醇， 10水， 2%液， 10水預(yù)淋洗，上樣，以 10氣吹至近干，流動(dòng)相準(zhǔn)確定容至 2 膜過(guò)濾，待 析。 注意：所有操作都應(yīng)在避光條件下進(jìn)行 。 作曲線(xiàn) 取呋喃西林和呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)中間液，用 流動(dòng)相稀釋成濃度為 2. 0 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別取 20峰高為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品中呋喃西林和呋喃唑酮含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線(xiàn)。 譜測(cè)定 取試樣濾液 20錄峰高，從工作曲線(xiàn)查得樣品提取液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量。若 616 2006 3 樣液濃度超過(guò)線(xiàn)性范圍，用流動(dòng)相稀釋。 8 計(jì)算 樣品中呋喃西林和呋喃唑酮的含量按下式計(jì)算。 m f 式中： X 試樣中 呋喃西林和呋喃唑酮 的含量，單位為毫克每千 克（ mg/ C 試樣溶液中 呋喃西林和呋喃唑酮 的含量，單位為毫克每升（ ）； m 試樣質(zhì)量，單位為克（ g）； V 試樣溶液體積，單位為毫升（ f 提取液的稀釋倍數(shù)。 9 方法準(zhǔn)確度和精密度 本方法回收率為 本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 10%。 10 方法檢出限 本方法檢出限為 1.0 mg/ 11 線(xiàn)性范圍 本方法的 呋喃西林和呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的線(xiàn)性范圍為 。 12 結(jié)果表述 檢驗(yàn)結(jié)果保留 2 位有效數(shù)字。 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕 對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的 15%。 616 2006 4 附錄 A （資料性附錄） 呋喃西林和呋喃唑酮高效液相色譜圖 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0 . 0 1 2 . 5M i n u t e . 2 30 . 0 00 . 2 50 . 5 00 . 7 51 . 0 01 . 2 51 . 5 0m A d : s