53 備案號： 浙 江 省 地 方 標 準 2007 無公害豆芽 第 3 部分： 6 芐基腺嘌呤殘留量和 4氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定 2007布 2007施 浙江省質(zhì)量技術監(jiān)督局 發(fā)布 2007 I 前 言 625 2007無公害豆芽分為三個部分： 第 1部分：生產(chǎn)技術規(guī)程； 第 2部分：質(zhì)量安全要求； 第 3部分： 6 本 部分為 625 2007無公害豆芽 第 3部分。 本 部分的附錄 為資料性附錄。 本部分起草單位：浙江省疾病預防控制中心、寧波市疾病預防控制中心、杭州市質(zhì)量技術監(jiān)督檢測院、浙江省農(nóng)業(yè)廳農(nóng)作物管理局、寧波市衛(wèi)生監(jiān)督所、寧波市五龍?zhí)妒卟耸称酚邢薰?、寧波市質(zhì)量技術監(jiān)督局。 本部分主要起草人：李小平、韓見龍、蔡增軒、金米聰、趙建陽、芮昶、蔣經(jīng)偉、陶禮明、戴建剛。 2007 1 無公害豆芽 第 3 部分： 6芐基腺嘌呤殘留量和 4氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定 第一法 豆芽中 6 S 法 1 范圍 本 方法 規(guī)定了豆芽中 6 本 方法 適用于豆芽中 6 本 方法 檢出限為 1 10-6 mg/ 2 原理 豆芽中殘留的 6相柱分離，電噴霧離子化（ 多離子反應監(jiān)測（ 式進行定量測定 。 以試樣峰的保留時間 、母離子（ m/z: +H+）與子離子 (性，以子離子 (面積外標法定量 。 3 試劑 除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑、蒸餾水或去離子水。 酸 。 腈（ 。 醇 （ 。 0%的甲醇水溶液。 化 甲醇：每 100 醇中加入乙酸 50L ，混勻。 準 溶液的配置： 準儲備溶液 精密稱取 6量 00 甲醇溶解并定容至刻度，作為標準儲備溶液。此標 準儲備溶液每毫升相當于 1.0 準使用液用甲醇稀釋至每毫升含 1g 的 6在 4冰箱中儲存，有效期 1個月。 準 工作 溶液 白豆芽萃取液制備 選擇在生產(chǎn)過程中未添加 6豆芽菜。按 樣處理 方法提取，經(jīng) 濾膜過濾。必要時使用 以確定在 6峰處不存在干擾。 準 工作 溶液 系列配制 準確吸取標注使用液 1 L、 2 L、 4 L、 6 L、 8 L、 10 空白豆芽萃取液 （ 1 制成濃度依次 為 1 ng/2ng/4 ng/6 ng/8 ng/10 ng/ 4 儀器 織搗碎機。 2007 2 平（精 度 。 效液相色譜 串聯(lián)四極桿質(zhì)譜（ S）。 質(zhì)機（速度范圍： 6,000 24,000 心機 (最高轉(zhuǎn)速 :15,000 5 分析步驟 樣處理 稱取豆芽樣品 500 5確 至 50 入10 均質(zhì)機勻 質(zhì) 3 0000 0清液轉(zhuǎn)入 50 品再用 10 復 提取 一次 。合并上清液，用水定容至刻度，搖勻 ，吸取 20容量瓶中， 用 50%甲醇 水 溶液 定容至刻度，搖勻 ， 經(jīng) 膜過濾，供 譜 參考 條件 色譜柱： 18 柱（ 50 5m 顆 徑 ） 。 流動相 A：水（ 酸） 。 流動相 B：甲醇（ 酸） 。 流速： mL/ 進樣量： 10 柱溫： 35 。 表 1 梯度洗脫條件 時間（ 流動相 A 流動相 B 變化曲線 0% 50% 4% 56% 6 % 0% 6 % 0% 1 0% 50% 6 0% 50% 1 注： 變化曲線： 1為立即變化， 6為線性變化 譜 參考 條件 離子化 方式 毛細管電壓 ( 錐孔電壓 (V) 57。 V) 源溫度 ( ) 120。 脫溶劑溫度 () 350。 錐孔反吹氣流 (L/50。 脫溶劑氣流 (L/454。 離子能量 1 離子能量 2 2007 3 光電倍增管 (V) 650。 碰撞池氣壓 ( 定 準確吸取 準系列溶液和試樣溶液注入液相色譜 照本標準 保留時間及子離子 子離子 參見附錄 A。 果計算 按外標法計算試樣中 6 見下式： 10001000 m X 試樣中 6mg/ A 試樣 中定量子離子 面積對應的 6g ； f 試樣的稀釋倍數(shù)； m 試樣的取樣量， g。 計算 結(jié)果 表示到三位有效數(shù)字。 6 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果絕對差值不得超過算術平均值的 20%。 2007 4 附 錄 A （資料性附錄） 離子流圖 圖 離子流圖 2007 5 第二法 41 范圍 本方法規(guī)定了豆芽中 4 本方法適用于豆芽中 4 本方法 檢出限為 mg/ 2 原理 豆芽中的 4乙酸鈉用稀堿提取，酸化后用乙醚萃取，高效液相色譜紫外檢測器測定，保留時間定性，外標法定量。 3 試劑 除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑、蒸餾水或去離子水。 氫氧化鈉。 鹽酸。 乙醚。 甲醇 （ 冰醋酸。 氫氧化鈉溶液（ ）： 稱取 氧化鈉，溶于水并稀釋至 1000 鹽酸溶液（ 1： 1）：取 100水稀釋至 200 氯化鈉 酸性溶液（ 40 g/L）：于 10040 g/L）中加 酸酸化。 磷酸鹽 緩沖液（ ）：稱取 加水溶解，并定容至 1000 50%的 4密稱取 4含量 中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司 )甲醇溶解并移入 100釋至刻度。此溶液每毫升相當于 4冰箱中儲存，有效期 1個月。臨用時用甲醇稀釋至每毫升相當于 4 儀器 組織搗碎機。 天平 （精度 。 超聲波 儀。 均 質(zhì)機（ 速度范圍： 6,500 24,000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 酸度計。 高效液相色譜儀（帶紫外檢測器）。 5 分析方法 樣品處理 稱取經(jīng)組織搗碎機搗碎的豆芽試樣 10g（精確至 50 入 30用 均質(zhì)機均質(zhì) （ 10,000 勻 38000r/0清 液轉(zhuǎn)入 50品再用少量 氫氧化鈉（ 復 提取 1次，離心后。合并上清液，并用 氫氧化鈉（ 定容至刻度，搖勻。 取此液 50 鹽酸溶液（ 50取 3次，每次振搖 1并乙醚層，用 滌，棄去水層，乙醚層用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸至近干，用甲醇溶解并定容至 高效液相色譜分析。 2007 6 標準曲線 準確吸取每毫升相當于 400 甲醇稀釋至刻度。制成濃度依次為 、 、 、 、 的標準溶液，供高效液相色譜分析。 色譜參考條件 色譜柱： B 250 5 m）。 檢測波長： 228 流動相：甲醇 + 磷酸鹽緩沖液（ 40+60）。 流速： 柱溫： 30 。 測定 吸取 試樣液注入高效液相色譜儀，按照 保留時間定性，標準曲線法定量。 結(jié)果計算 按外標法計算試樣中 4 見下式： 010 00 m 式中： X 試樣中 4mg