VEGF在胃癌患者血清及腫瘤組織中的表達及其意義,摘要 目的 研究血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）在胃癌患者血清及腫瘤組織中的表達情況，探討其臨床意義。方法 應用ELISA法對60例非腫瘤疾病手術(shù)患者和60例胃癌患者術(shù)前、術(shù)后血清VEGF水平進行定量測定，并應用免疫組化法測定腫瘤組織的VEGF。結(jié)果 胃癌患者術(shù)前血清VEGF高于對照組（P0.05）。兩組術(shù)后較術(shù)前升高，腫瘤組術(shù)后較術(shù)前升高（P0.05）。腫瘤組術(shù)前血清VEGF水平、腫瘤組織中的VEGF與漿膜受累、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理分期有關。腫瘤組術(shù)后隨訪3036個月中出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移和死亡的患者，術(shù)前VEGF表達較其他患者升高（P0.05）。結(jié)論 血清VEGF水平及腫瘤組織中的VEGF與胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移有關，檢測血清VEGF及腫瘤組織中的VEGF對胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移程度和預后的判斷有重要意義。,關鍵詞 胃腫瘤；微轉(zhuǎn)移；血管內(nèi)皮生長因子 Expression and significance of VEGF in serum and tumor tissue in gastric cancer ZHOU Hai-yin，LI Jian，QIAO Shi-ming，et al.Department of General Surgery，The Central Hospital of Yangpu District，Shanghai 200090，China,Abstract Objective To evaluate the clinical significance of vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in serum and tumor tissue in gastric cancer patients.Methods The pre-operational and post-operational levels of serum VEGF were measured by ELISA kit in 60 cases of gastric cancer and 60 cases of non-carcinoma as the control group，the expression of tumor tissue VEGF was measured by immunohistochemical assay.Results The pre-operational level of serum VEGF in gastric cancer was higher than that in the control group(P0.05).,The post-operational level of serum VEGF was increased in both groups，especially in the tumor group(P0.05).The expression of VEGF in serum and tumor tissue was positively correlated with tumor invasion depth，lymph-node metastasis and clinical pathological stage.A follow up of 3036 months reveals the pre-operational level of serum VEGF of tumor recurrence and death in patients was higher than the others in the tumor group(P0.05).,Conclusion The expression of serum VEGF and tumor tissue VEGF is closely correlated with invasion and metastasis of gastric cancer.Serum VEGF and tumor tissue VEGF assay may be used to pre-operatively predict invasion and metastasis and used to evaluate prognosis.,Key words stomach neoplasm;micrometastasis;vascular endothelial growth factor 腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移是血管新生依賴性的。在腫瘤血管生成過程中，血管內(nèi)皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前了解的功能最強大的特異性血管生長調(diào)節(jié)因子，各種轉(zhuǎn)化生長因子、表皮生長因子、IL-6、IL-12、野生型P53及一些原癌基因均可上調(diào)VEGF產(chǎn)生促血管活性1，故VEGF可能為促血管活性因子的最后共同道路2。本研究通過對胃癌患者手術(shù)前后血清VEGF的定量測定及腫瘤標本中VEGF表達情況，探討其與臨床病理及腫瘤預后的關系?，F(xiàn)分析報告如下。,1 資料與方法 1.1 一般資料 選擇我院普外科2002年11月2003年5月期間住院接受手術(shù)治療的胃癌患者60例，其中男33例，女27例，年齡3585歲，中位年齡68歲。其中期8例，期15例，期34例，期3例。對照組選擇同期住院手術(shù)的非腫瘤患者60例。,1.2 方法 1.2.1 血清標本采集 在術(shù)前、術(shù)后第7天和術(shù)后6個月每月1次分別抽取清晨空腹靜脈血3ml，離心分離血清，置于-20凍存待測。,1.2.2 血清VEGF定量檢測 采用雙抗體夾心ELISA法，樣本中的VEGF與酶標板上的抗人VEGF單抗結(jié)合，再與結(jié)合有生物素的抗人VEGF抗體結(jié)合，經(jīng)辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合，與酶底物反應染色，在492nm測定與VEGF濃度相對應的OD值。以標準品的OD值畫出標準曲線，根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應的VEGF含量。,1.2.3 腫瘤組織VEGF檢測 腫瘤組織經(jīng)常規(guī)固定、石蠟包埋、切片后，采用Envision二步法染色。一抗采用鼠抗人VEGF單克隆抗體。腫瘤組織VEGF以腫瘤細胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。VEGF判斷標準：（-）為無瘤細胞著色，（+）為著色瘤細胞數(shù)10%。,1.2.4 統(tǒng)計學方法 用SPSS11.0軟件做統(tǒng)計分析，P0.05為差異有顯著性。 2 結(jié)果2.1 圍手術(shù)期血清VEGF水平比較 圍手術(shù)期兩組血清VEGF水平見表1。從表1可見，術(shù)前腫瘤組血清VEGF水平雖高于對照組，但差異無顯著性（P0.05）。術(shù)后兩組血清VEGF均較術(shù)前明顯升高（P0.05）。腫瘤組術(shù)后血清VEGF較對照組明顯增加，兩組差異有顯著性（P0.05）。表1 圍手術(shù)期血清VEGF水平比較 （xs，g/L）,2.2 腫瘤組術(shù)前血清VEGF與腫瘤臨床病理參數(shù)的關系 腫瘤組術(shù)前血清VEGF與腫瘤臨床病理參數(shù)的關系見表2。從表2可見，腫瘤組織細胞中的VEGF表達陽性患者的血清VEGF水平雖高于表達陰性者，但差異無顯著性（P0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清VEGF水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P=0.003）；腫瘤侵犯漿膜的患者血清VEGF水平顯著高于漿膜未受累者（P=0.037）；臨床分期為和期患者血清VEGF水平顯著高于和期者（P=0.029）。,表2 腫瘤組術(shù)前血清VEGF與腫瘤臨床病理參數(shù)的關系 （xs，g/L）,注：*TNM分期根據(jù)新國際T.N.M胃癌分期轉(zhuǎn)換為、期 2.3 隨訪 術(shù)后60例均得到隨訪，5例期和2例期患者術(shù)后未化療而未得到術(shù)后隨訪時的外周血（隨訪至今均存活），其余53例患者有術(shù)后6個月共6次隨訪的血清檢測結(jié)果。隨訪3036個月，在53例患者中11例死亡，5例出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和復發(fā)，其余37例無瘤存活，死亡及轉(zhuǎn)移復發(fā)的患者術(shù)前的血清VEGF水平高于無瘤存活的患者（見表3），且差異有顯著性（P0.05）。死亡11例中7例術(shù)后VEGF持續(xù)高水平表達，5例表達量逐漸升高；5例出現(xiàn)復發(fā)和轉(zhuǎn)移的患者，其中3例術(shù)后血清VEGF水平持續(xù)高表達，并且表達量升高；37例無瘤存活者中21例術(shù)后VEGF水平持續(xù)低表達，6例升高后轉(zhuǎn)低，10例術(shù)后VEGF水平出現(xiàn)逐漸升高，目前正密切隨訪中。,3 討論,VEGF是一種特異的作用于內(nèi)皮細胞的多功能因子，作為一個重要的促血管生成因子，在原位誘導血管生成的作用十分強大3。VEGF作為內(nèi)皮細胞特異有絲分裂原刺激內(nèi)皮細胞增生、促使血管滲漏、刺激細胞遷移，導致纖維蛋白原外滲進入腫瘤間質(zhì)而促成腫瘤浸潤組織的血管生成，從而形成腫瘤內(nèi)部高密度的微血管網(wǎng)。VEGF還能刺激淋巴內(nèi)皮細胞增生，增加腫瘤高血源性和高淋巴源擴散的風險4。VEGF還可通過誘導Bcl-2的表達、激活有絲分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）和抑制c-JNK(c-jun-NH3-kinase）而抗腫瘤細胞凋亡。,本研究結(jié)果顯示，腫瘤侵犯漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期較晚的患者血清VEGF水平顯著升高，提示血清VEGF水平在一定程度上反映腫瘤進展的程度。Lissoni等研究指出，晚期惡性腫瘤伴有VEGF內(nèi)源性分泌增加，提示血清VEGF水平升高，則預后較差。Hyodo的研究發(fā)現(xiàn)，在胃腸腫瘤中，有遠處轉(zhuǎn)移患者的血清VEGF較無遠處轉(zhuǎn)移的患者明顯增高，且轉(zhuǎn)移患者化療前VEGF水平低者化療效果及生存期較升高者好。Kumar等的研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌淋巴結(jié)陽性患者的血清VEGF比陰性者明顯升高。Fujisaki發(fā)現(xiàn)血清VEGF水平與Dukes分期顯著相關。Celen等報道診斷結(jié)直腸腫瘤VEGF的敏感性高于CEA等腫瘤標志物5。,術(shù)前腫瘤組血清VEGF水平雖高于對照組，但無統(tǒng)計學意義，術(shù)后兩組血清VEGF均較術(shù)前升高，但腫瘤組較非腫瘤組更為明顯，這可能與手術(shù)創(chuàng)傷、術(shù)后傷口生長及創(chuàng)面修復有關。在隨訪血清VEGF水平變化中，我們發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)復發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡組術(shù)前的血清VEGF較無瘤存活組明顯升高，可以反映腫瘤病變的嚴重程度。復發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡組圍手術(shù)期的血清VEGF水平有升高，但差異無顯著性，這可能為術(shù)前除原發(fā)腫瘤以外，微轉(zhuǎn)移灶分泌入循環(huán)血中的VEGF占較大比例，手術(shù)清除了原發(fā)灶，但對于微轉(zhuǎn)移灶無效，手術(shù)創(chuàng)傷及術(shù)后修復使VEGF水平升高，又促進了微轉(zhuǎn)移灶的進一步發(fā)展，因此我們認為血清VEGF是特異性較高的微轉(zhuǎn)移檢測指標。,腫瘤組織中VEGF陽性表達率亦隨腫瘤侵犯漿膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期進展而增加。本研究顯示，血清VEGF水平和腫瘤組織中VEGF陽性表達率兩者之間無顯著相關，這可能與血清VEGF反映全身組織的VEGF水平，而腫瘤組織中VEGF陽性表達率僅反映局部腫瘤組織中VEGF有關。盡管如此，無論是術(shù)前血清VEGF水平或腫瘤組織中VEGF陽性表達都與腫瘤的轉(zhuǎn)移、分期及預后密切相關。故檢測血清VEGF是判斷腫瘤分期和預報胃癌術(shù)后腫瘤復發(fā)及生存的獨立指標之一6，定期檢測血清VEGF水平的變化還可以對腫瘤治療效果及腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移提供依據(jù)。,隨著對VEGF研究的深入，可以設想通過VEGF和VEGF受體抗體的功能阻斷，阻止腫瘤血管生成，可能成為抑制腫瘤生長和預防腫瘤轉(zhuǎn)移的生物靶點之一。參考文獻 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