中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 阪崎腸桿菌檢驗 華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布 2010布 2010施 010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 阪崎腸桿菌檢驗 。 本標(biāo)準(zhǔn)與 比，主要變化如下： 修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱； 刪除了附錄 A 中 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A、附錄 B 為規(guī)范性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替的歷次版本發(fā)布情況為： B 010 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 阪崎腸桿菌檢驗 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中阪崎腸桿菌（ 檢驗方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎腸桿菌的檢驗。 2 設(shè)備和材料 除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下： 恒溫培養(yǎng)箱： 25 1 ， 36 1 ， 44 。 冰箱： 2 5 。 恒溫水浴箱： 44 。 天平：感量 0.1 g。 均質(zhì)器。 振蕩器。 無菌吸管： 1 度） 、 10 0.1 度）或微量移液器及吸頭。 無菌錐形瓶：容量 100 200 2000 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 或 色管或精密 紙。 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。 3 培養(yǎng)基和試劑 緩沖蛋白胨水（ ：見附錄 A 中 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯 ：見附錄 A 中 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基。 胰蛋白胨大豆瓊脂（ ：見附錄 A 中 生化鑒定試劑盒。 氧化酶試劑：見附錄 A 中 附錄 A 中 010 2 附錄 A 中 附錄 A 中 糖類發(fā)酵培養(yǎng)基：見附錄 A 中 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基：見附錄 A 中 010 3 1 0 取疑似菌落 第一法 阪崎腸桿菌的檢驗 4 檢驗程序 阪崎腸桿菌檢驗程序見圖 1。 圖 1 阪崎腸桿菌檢驗程序 5 操作步驟 前增菌和增菌 取檢樣 100 g（ 入已預(yù)熱至 44 裝有 900 沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地?fù)u動至充分溶解， 36 1 培養(yǎng) 18 h2 h。移取 1 種于 10 mL 湯， 44 培養(yǎng) 24 h2 h。 分離 輕輕混勻 湯培養(yǎng)物，各取增菌培養(yǎng)物 1 環(huán)，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色36 1 ， 18 h2 告 挑取黃色菌落 檢樣 100 g（ +釋液 900 4 ， 24 h2 36 1 ， 24 h2 1 ， 48 h4 010 4 培養(yǎng)基平板， 36 1 培養(yǎng) 24 h2 h。 挑取 1 個 5 個可疑菌落，劃線接種于 板。 25 1 培養(yǎng) 48 h4 h。 鑒定 自 板上直接挑取黃色可疑菌落，進(jìn)行生化鑒定。阪崎腸桿菌的主要生化特征見表 1?？蛇x擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。 表 1 阪崎腸桿菌的主要生化特征 生化試驗 特 征 黃色素產(chǎn)生 氧化酶 （） 檸檬酸水解 （） （） 發(fā)酵 苦杏仁甙 注： 99%陽性； 99%陰性；（） 90% 99%陽性；（） 90% 99%陰性。 6 結(jié)果與報告 綜合菌落形態(tài)和生化特征，報告每 100 g（ 品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。 第二法 阪崎腸桿菌的計數(shù) 7 操作步驟 樣品的稀釋 固體和半固體樣品： 無菌稱取樣品 100 g、 10 g、 1 g 各三份， 加入已預(yù)熱至 44 分別盛有 900 0 9 ，輕輕振搖使充分溶解，制成 1:10 樣品勻液，置 36 1 培養(yǎng) 18 h2 h。分別移取 1 種于 10 mL 湯， 44 培養(yǎng) 24 h2 h。 液體樣品： 以無菌吸管分別取樣品 100 10 1 三份，加入已預(yù)熱至 44 分別盛有 900 90 9 ， 輕輕振搖使充分混勻， 制成 1:10 樣品勻液， 置 36 1 培養(yǎng) 18h2h。分別移取 1 種于 10 mL 湯， 44 培養(yǎng) 24 h2 h。 分離、鑒定 同 8 結(jié)果與報告 010 5 綜合菌落形態(tài)、 生化特征， 根據(jù)證實為阪崎腸桿菌的陽性管數(shù)， 查 索表， 報告每 100 g（ 品中阪崎腸桿菌的 （見附錄中表 。 010 6 附錄A （規(guī)范性附錄） 培養(yǎng)基和試劑 沖蛋白胨水（分 蛋白胨 5.0 2 9.0 1.5 1 000 法 加熱攪拌至溶解 ,調(diào)節(jié) 121 高壓滅菌 15 良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯 良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（ 湯 分 氯化鈉 34.0 20. 5.0 g 十二烷基硫酸鈉 0.1 1 000 法 加熱攪拌至溶解，調(diào)節(jié) 裝每管 10 121 高壓滅菌 15 古霉素溶液 分 萬古霉素 10.0 法 10.0 古霉素溶解于 10.0 餾水，過濾除菌。萬古霉素溶液可以在 0 5 保存 15 天。 良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯 每 10 mL 入萬古霉素溶液 0.1 合液中萬古霉素的終濃度為 10 g/ 注： 須在 24 h 之內(nèi)使用。 蛋白胨大豆瓊脂（分 010 7 胰蛋白胨 15.0 5.0 5.0 15.0 1 00 制法 加熱攪拌至溶解，煮沸 1 節(jié) 121 高壓 15 化酶試劑 成分 N,N,N,N1.0 100 制法 少量新鮮配制，于冰箱內(nèi)避光保存，在 7 d 之內(nèi)使用。 試驗方法 用玻璃棒或一次性接種針挑取單個特征性菌落，涂布在氧化酶試劑濕潤的濾紙平板上。如果濾紙在10 s 之內(nèi)未變?yōu)樽霞t色、紫色或深藍(lán)色，則為氧化酶試驗陰性，否則即為氧化酶實驗陽性。 注 ：實驗中切勿使用鎳 /鉻材料。 成分 5.0 3.0 1.0 1 000 制法 將各成分加熱溶解，必要時調(diào)節(jié) 管分裝 5 121 高壓 15 實驗方法 挑取培養(yǎng)物接種于 好在液體培養(yǎng)基的液面下。 30 1 培養(yǎng) 24 h2 h，觀察結(jié)果。 養(yǎng)基呈紫色，陰性者為黃色。 成分 5.0 3.0 1.0 1 000 制法 將各成分加熱溶解，必要時調(diào)節(jié) 管分裝 5 121 高壓 15 010 8 實驗方法 挑取培養(yǎng)物接種于 好在液體培養(yǎng)基的液面下。 30 1 培養(yǎng) 24 h2 h，觀察結(jié)果。 養(yǎng)基呈紫色，陰性者為黃色。 成分 5.0 3.0 1.0 1 000 制法 將各成分加熱溶解，必要時調(diào)節(jié) 管分裝 5 121 高壓 15 實驗方法 挑取培養(yǎng)物接種于 好在液體培養(yǎng)基的液面下。 30 1 培養(yǎng) 24 h2 h，觀察結(jié)果。 養(yǎng)基呈紫色，陰性者為黃色。 類發(fā)酵培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 分 酪蛋白（酶消化） 10.0 5.0 1 000 法 將各成分加熱溶解，必要時調(diào)節(jié) 管分裝 5 121 高壓 15 糖類溶液（ 杏仁甙） 分 糖 8.0 100 法 分別稱取 杏仁甙等糖類成分各 8 g，溶于 100 餾水中，過濾除菌，制成 80 mg/糖類溶液。 全培養(yǎng)基 分 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 875 12 法 無菌操作，將每種糖類溶液加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基，混勻；分裝到無菌試管中，每管 10 實驗方法 挑取培養(yǎng)物接種于各種糖類發(fā)酵培養(yǎng)基，剛好在液體培養(yǎng)基的液面下。 30 1 培養(yǎng) 24 h2 h，觀察結(jié)果。糖類發(fā)酵試驗陽性者，培養(yǎng)基呈黃色，陰性者為紅色。 010 9 蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基 成分 檸檬酸鈉 2.0 5.0 1.0 0.2 8.0 g 18.0 1 000 制法 將各成分加熱溶解，必要時調(diào)節(jié) 管分裝 10 121 高壓 15 成斜面。 實驗方法 挑取培養(yǎng)物接種于整個培養(yǎng)基斜面， 36 1 培養(yǎng) 24 h2 h，觀察結(jié)果。陽性者培養(yǎng)基變?yōu)樗{(lán)色。 010 10 附錄 B （規(guī)范性附錄） 阪崎腸桿菌最可能數(shù)（索表 阪崎腸桿菌最可能數(shù)（索表 每 100 g（ 樣中阪崎腸桿菌最可能數(shù)（ 檢索見表 表 崎腸桿菌最可能數(shù)（索表 陽性管數(shù) 95%可信限 陽性管數(shù) 95%可信限 100 10 1 限 上限 100 10 1 限 上限0 0 0 - 2 0 0 1 2 1 1 0 2 2 1 1 3 0 2 0 3 1 3 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 2 8 1 0 2 1 0 8 1 1 0 3 1 1 0 1 1 1 1 2 12 2 1 2 0 1 3 16 4 42 1 2 1 2 0 2 1 3 0 2 1 15 2 2 0 0 2 2 21 4 43 2 0 1 2 3 29 9 100 2 0 2 2 3 0 24 00 2 1 0 3 1 46 9 200 2 1 1