50 浙 江 省 地 方 標 準 599產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜 of in S 006布 2006施 浙江省質(zhì)量技術監(jiān)督局 發(fā)布 599 2006 I 前 言 本標準附錄 本標準 由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。 本標準起草單位：浙江省水產(chǎn)質(zhì)量檢測中心。 本標準主要起草人：張海琪、何中央、王揚、鄭重鶯、丁雪燕、應永飛。 599 2006 1 水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜 1 范圍 本標準規(guī)定了水產(chǎn)品中呋喃它酮的代謝物 532烷基酮（簡稱 同）、呋喃西林的代謝物氨基脲（簡稱 同）、呋喃妥因的代謝物 12稱 同）和呋喃唑酮的代謝物 32烷基酮（簡稱 同）殘留量的液相色譜 本標準適用于水產(chǎn)品中呋喃它酮代謝 物、呋喃西林代謝物、呋喃妥因代謝物和呋喃唑酮代謝物殘留量的檢驗。 本標準規(guī)定呋喃它酮代謝物、呋喃西林代謝物、g/ 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過 本標準 的引用而成為 本標準 的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于 本標準 ，然而，鼓勵根據(jù) 本標準 達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本適用于 本標準 。 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 原理 樣品中殘留的硝基呋喃類抗生素代謝物在酸性條件下水解，用 2固相萃取柱凈化后液相色譜 標法定量。 4 試劑 除非另有說明，僅使用分析純試劑。 ： 6682 規(guī)定的一級水 。 醇：色譜純。 腈：色譜純。 酸乙酯：色譜純 。 酸氫二鉀 。 酸：優(yōu)級純 。 甲亞砜：優(yōu)級純。 酸：優(yōu)級純。 氧化鈉：優(yōu)級純。 2純度 99%。 酸氫二鉀溶液： 0.5 。稱取 5.7 g 磷酸氫二鉀（ 用水溶解，定容至 50 酸溶液： 0.2 。量取 17 鹽酸（ 水定容至 1 000 氧化鈉溶液： 1 。稱取 40 g 氫氧化鈉 (用水溶解，定容至 1 000 8.0 g/L。稱取 80 于 10 甲亞砜 (臨用前配制。 599 2006 2 相萃取柱或相當者： 60 3 用前分別用 3 酸乙酯、 3 醇和 5 處理，保持柱體濕潤。 同位素內(nèi)標物 度 98%。 準儲備溶液： mg/確稱取四種硝基呋喃類代謝物標準物質(zhì)及四種相應的同位素內(nèi)標物，分別用甲醇配成 mg/標準貯備溶液。 光保存，保存期為三個月。 合標準儲備溶液： 1 g/取四種硝基呋喃類代謝物標準儲備溶液（ 用甲醇配成1 g/光保存，保存期為三個月，使用前回溫到室溫。 合內(nèi)標工作溶液： 100 ng/取四種硝基呋喃類代謝物同位素的標準儲備溶液（ 用甲醇配成 100 ng/光保存，保存期為三個月，使用前回溫到室溫。 合標準工作溶液：根據(jù)需要，臨用前吸取一定量的混合標準儲備溶液（ 用甲醇稀釋配制適當濃度的混合標準工作液。 5 儀器和設備 相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ 子源。 溫振蕩器。 相萃取裝置。 速臺式離心機： 5 000 r/ 氣吹干儀。 5.6 。 6 測定步驟 取 稱取 10 g 均質(zhì)試樣（精確到 g）于 50 丙烯離心管中，加入 100 L 內(nèi)標工作溶液（ 分別加入 25 .2 鹽酸溶液和 0.5 生劑（ 渦旋混合 1 于 37 恒溫振蕩器中保持 16h。 化 將上述提取溶液（ 出放置至室溫，加入 1 .5 磷酸氫二鉀溶液（ 用 1 氫氧化鈉溶液（ 節(jié)溶液 圍至 以 4 500 r/速度離心 15 清液過已 相當?shù)墓滔噍腿≈?調(diào)節(jié)流速小 于等于 2 mL/樣液全部通過固相萃取柱后用 3 去全部流出液。負壓下抽干固相萃取柱 10 用 6酸乙酯洗脫被測物，洗脫液全部收集于 10 心管中，并在氮氣吹干儀上 40水浴吹干， 1腈與 酸水溶液（ 10+90）溶解殘渣，過 m 濾膜，濾液供液相色譜 定 譜條件 a) 色譜柱： 18 柱（ 150 2.1 5 m）或相當者； b) 柱溫： 35； c) 進樣量： 40 L； d) 流動相及流速見表 1。 譜條件 a) 離子源：電噴霧離子源（ b) 掃描方式：正離子掃描； c) 檢測方式：多反應監(jiān)測（ d) 霧化氣 （ 、 氣簾氣（ 、輔助加熱氣 （ 、碰撞氣 （ 均為高純氮氣；使 599 2006 3 用前應調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求； e) 噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能等電壓值應優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度； f) 為單位分辨率（ g) 定性離子對、定量離子對、采集時間（ 表 2。 表 1 液相色譜梯度洗脫條件 時間（ 流速（ L/ 酸水溶液（ %） 乙腈（ %） 00 70 30 00 70 30 50 25 75 50 25 75 00 70 30 00 70 30 表 2 四種硝基呋喃代謝物的監(jiān)測離子對 硝基呋喃代謝物名稱 定量離子對（ m/z） 定性離子對（ m/z） 采集時間（ 35/291 335/262 100； 100 09/166 209/192 100； 100 49/134 249/178 50； 100 36/134 236/104 100； 50 40/134 50 40/296 100 52/134 50 12/195 100 相色譜 性測定 在相同試驗條件下，樣品中待測物與同時檢測的標準物質(zhì)具有相同的保留時間，并且非定量離子對與定量離子對色譜峰面積的比值相對偏差小于 30%，則可判定為樣品中存在該殘留。 量測定 按照 相色譜 以色譜峰面積按內(nèi)標法定量，以 m/z 340/296）計算 m/z 335/291）的濃度，以 m/z 212/195）計算 m/z 209/166）的濃度，以 m/z 252/134）計算 m/z 249/134）的濃度，以 m/z 240/134）計算 m/z 236/134）的濃度。 在上述色譜條件下標準溶液的提取離子流圖參見附錄 白試驗 除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。 7 結(jié)果計算 測定結(jié)果可由計算機按內(nèi)標法 自動計算，也可按式（ 1）計算，計算結(jié)果需扣除空白值。 （ 1） 式中： X 樣品中待測組分殘留量，單位為微克每千克（ g/； C 準工作溶液的濃度， 單位為微克每升（ g/L） ； 標準工作溶液中內(nèi)標物的濃度，單位為微克每升（ g/L）； C 樣液中內(nèi)標物的濃度，單位為微克每升（ g/L）； 599 2006 4 樣液中 峰面積； 準工作溶液 的峰面積； 標準工作溶液中內(nèi)標物的峰面積； 樣液中內(nèi)標物的峰面積； V 樣品定容體積，單位為毫升（ W 樣品