50 備案號(hào)： 浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) 563 2005 水產(chǎn)品中磺胺類殘留量的測(cè)定 液相色譜法 of in 005布 2005施 浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布 563 2005 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)附錄 本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：鄭斌、陳雪昌、劉士忠、金彩杏、鐘志、劉琴。 563 2005 1 水產(chǎn)品中磺胺類殘留量的測(cè)定 液相色譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的測(cè)定，其它磺胺類藥物的測(cè)定可以參照本標(biāo)準(zhǔn)。 2 規(guī)范性引用文 件 下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 原理 用乙酸乙酯提取，稀鹽酸反提取，正己烷脫脂，熒光胺衍生，反相色譜柱分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，磺胺 5標(biāo)法定量。 4 試劑 標(biāo)準(zhǔn)所用試劑在磺胺類藥物出峰處應(yīng)無(wú)干擾峰，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符 合 6682 中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。 準(zhǔn)品：磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異噁唑，磺胺 5度均大于 酮：色譜純。 己烷：色譜純。 酸乙酯：色譜純。 腈：色譜純。 醇：色譜純。 光胺：純度大于 酸鈉：分析純。 乙酸：優(yōu)級(jí)純。 酸溶液： 2，量取 180酸，加適量水并稀釋至 1000 酸鈉溶液： ，稱取 水乙酸鈉溶于蒸餾水中，定容至 100 光胺溶液： 2，稱取 光胺，加 15酮，振搖至完全溶解，存放在暗處?，F(xiàn)配現(xiàn)用。 準(zhǔn)儲(chǔ)備液： 100，稱取標(biāo)準(zhǔn)品 10準(zhǔn)至 用甲醇溶解并定容至 100光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。 合標(biāo)準(zhǔn)中間液： 1，移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各 甲醇稀釋并定容至 100室溫下混勻。 標(biāo)儲(chǔ)備液： 100，稱取磺胺 50準(zhǔn)至 用甲醇溶解并定容至 100光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。 563 2005 2 標(biāo)中間液： 1，移取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液 甲醇稀釋并定容至 100在室溫下混勻。 合標(biāo)準(zhǔn)使用液：取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 20 L、 40 L、 100 L、 200 L、 400 L，分別加入內(nèi)標(biāo)中間液 100 L，用 2 鹽酸（ 釋至 2成濃度分別為 、 、 、 的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，其中內(nèi)標(biāo)濃度為 。 5 儀器與設(shè)備 相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。 子天平：感量 子天平：感量 速組織搗碎機(jī)。 質(zhì)機(jī)。 心機(jī)。 渦混勻器。 吹儀。 復(fù)式振蕩器。 丙烯離心管： 1550 量瓶： 1020501002005001000 璃移液管： 12510 斯德吸管。 6 色譜條件 譜柱： 5 m， 250同類型號(hào)色譜柱。 溫： 45。 動(dòng)相：乙腈 +乙酸溶液（ 38+62）， 500中加入冰乙酸調(diào)節(jié) 制成乙酸溶液。 速： 1mL/樣量： 20 L。 發(fā)波長(zhǎng)： 405 射波長(zhǎng)： 495 7 步驟分析 品制備 從原始樣品中取出部 分有代表性的樣品，高速組織搗碎機(jī)搗碎。四分法縮分出不少于 500g 樣品，混勻，均分成兩份。裝入清潔容器，加封，標(biāo)明標(biāo)記。 下冷凍保存。 取 將樣品解凍，稱取 于 50入 磺胺 5100L，用玻璃棒攪勻，再 加乙酸乙酯 10質(zhì)機(jī) 14000復(fù)式振蕩器振動(dòng) 103000乙酸乙酯層小心轉(zhuǎn)移到 1540以下氮?dú)獯抵?2向原離心管中加入乙酸乙酯 10渦混勻 30s，振 動(dòng) 1030000乙酸乙酯層小心轉(zhuǎn)移到原 1540以下氮?dú)獯抵?5后在試管中加入 的鹽酸溶液，旋渦混勻 1蓋后振動(dòng) 103000巴斯德吸管移去乙酸乙酯層，在余液中加入正己烷 5渦混勻 30s，3000巴斯德吸管移去正己烷層， 液備用。 生 向樣品瓶中加入 200品提取液、 2000 旋渦 563 2005 3 混勻 30s， 20 譜分析 取衍生后的樣品提取液 20錄峰面積，響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法定量。 磺胺類藥物色譜分析圖參見(jiàn)附錄 A。 作曲線 稱取空白樣品 別添加混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（ 20L、 40L、 100L、 200L、 400L，樣品中每種磺胺殘留量分別為 mg/ 以 磺胺峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的 比值 為縱坐標(biāo)， 磺胺 含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。 8 計(jì)算 用色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按下式計(jì)算樣品中磺胺殘留量： 11式中： X 樣品中磺胺殘留量，單位為毫克每千克（ mg/ s 樣品溶液中磺胺峰面積，單位為 樣品溶液中內(nèi)標(biāo)峰面積，單位為 S 標(biāo)準(zhǔn)溶液中磺胺峰面積，單位為 標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)峰面積，單位為 x 加標(biāo)樣品中磺胺殘留量，單位為毫克每千克（ mg/ 9 方法回收率 濃度范圍為 收率見(jiàn)回收率表。 表 1 回收率表 名稱 回收率 磺胺嘧啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺甲基異噁唑 10 方法檢出限 本方法檢出限為 11 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超