第十二章維生素類藥物分析學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)了解維生素類藥物的結(jié)構(gòu)特征理解維生素類藥物的構(gòu)性關(guān)系與質(zhì)量分析方法的聯(lián)系掌握維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E的鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法能力目標(biāo)根據(jù)維生素類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，學(xué)會(huì)選擇相應(yīng)的鑒別、雜質(zhì)檢查及含量測(cè)定方法依據(jù)藥典，能夠正確分析維生素類藥物質(zhì)量維生素是機(jī)體維持正常生命活動(dòng)所必不可少的一類有機(jī)物質(zhì)，它們的結(jié)構(gòu)不屬于同一類物質(zhì)，一般按照溶解性將維生素藥物分為脂溶性維生素和水溶性維生素兩大類。本章主要介紹其中脂溶性的維生素A、維生素E，水溶性的維生素B1、維生素C。第一節(jié)脂溶性維生素類藥物的分析維生素A包括維生素A1、A2、A3等，屬于不飽和一元醇類。其中效價(jià)最高的為全反式共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烯（維生素A1）。中國藥典（2010年版）收載的維生素A指人工合成的維生素A1醋酸酯結(jié)晶加上精制植物油制成的油溶液。其結(jié)構(gòu)為CH3CH2OCH3CH33C3CH3維生素E為苯并二氫吡喃醇（色滿醇）的衍生物，又稱生育酚。主要有、四種異構(gòu)體，其中以異構(gòu)體的生理活性最強(qiáng)。一般藥用維生素E指消旋生育酚醋酸酯。其結(jié)構(gòu)為H3CCH3OH3COCH3CH3163一、脂溶性維生素藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、分析方法的關(guān)系（重點(diǎn)，掌握）1易氧化維生素A結(jié)構(gòu)中有多個(gè)不飽和鍵，易氧化，易被紫外光裂解。維生素E對(duì)氧敏感，遇光、空氣可被氧化。二者均須注意貯存。2與三氯化銻呈色維生素A在氯仿中能與三氯化銻試劑作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。3水解性維生素E的酯鍵易水解，是維生素E變質(zhì)的重要原因。4紫外吸收特性二、維生素A的鑒別試驗(yàn)（重點(diǎn)，掌握）三氯化銻反應(yīng)（CARRPRICE反應(yīng)）維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液中即顯藍(lán)色，漸變紫紅。反應(yīng)機(jī)理為維生素A與三氯化銻（）中存在的親電試劑氯化高銻（）反應(yīng)，生成不穩(wěn)定的藍(lán)色碳正離子。維生素A及其膠丸、維生素AD膠丸、維生素AD滴劑均可采用此法鑒別。三、維生素A的雜質(zhì)檢查（了解）1酸值檢查原因控制維生素A制備和儲(chǔ)存過程中由于酯化不完全或水解生成的醋酸。檢查方法取本品20G，振搖使溶解，用01MOL/L氫氧化鈉滴定液滴定，酸值應(yīng)不大于20。2過氧化值檢查原因控制由于維生素A被氧化生成的過氧化物。檢查方法用001MOL/L硫代硫酸鈉滴定液滴定，消耗滴定液不得過15ML。四、維生素A的含量測(cè)定（一）三點(diǎn)校正法（重點(diǎn)，掌握）1采用三點(diǎn)校正法的原因維生素A原料藥中?；煊卸喾N雜質(zhì)，這些雜質(zhì)在維生素A的最大吸收波長(zhǎng)附近也有吸收，干擾維生素A的測(cè)定。為消除這些雜質(zhì)的干擾，中國藥典采用三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A的含量。2測(cè)定原理在三個(gè)選定的波長(zhǎng)處測(cè)得供試品吸光度，在規(guī)定條件下以校正公式進(jìn)行校正計(jì)算，求得維生素A真實(shí)含量。采用該法基于兩點(diǎn)在310340NM范圍內(nèi)，雜質(zhì)吸收呈一直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸光度下降。物質(zhì)對(duì)光吸收呈加和性。3波長(zhǎng)的選擇波長(zhǎng)選擇原則一點(diǎn)選在維生素A的最大吸收波長(zhǎng)處（1），其它兩點(diǎn)選在1的兩側(cè)；第一法與第二法選擇的另兩點(diǎn)有所不同第一法（等波長(zhǎng)差法）使3MAXMAX2。中國藥典規(guī)定，三個(gè)波長(zhǎng)為MAX328NM、2316NM、3340NM；第二法（等吸收比法），使A2A3（6/7）A1。中國藥典規(guī)定，三個(gè)波長(zhǎng)為1325NM、2310NM、3334NM。4測(cè)定及計(jì)算方法掃描規(guī)定波長(zhǎng)處吸光度，計(jì)算吸光度比值，判斷吸光度是否需要校正，以及是否選用校正后吸光度計(jì)算效價(jià)；確定用于效價(jià)計(jì)算的吸光度A后，由A計(jì)算吸收系數(shù)（單位G/100ML）；由計(jì)算維生素A的效價(jià)（單位IU/G）；由求得效價(jià)1CME1CME計(jì)算標(biāo)示量百分含量（標(biāo)示量）。5注意事項(xiàng)測(cè)定前必須校正波長(zhǎng)。測(cè)定的樣品應(yīng)不得少于兩份。測(cè)定應(yīng)在半暗室中盡速進(jìn)行。（二）高效液相色譜法中國藥典（2010年版）新增了高效液相色譜法作為維生素A含量測(cè)定的第二法。該法適用于維生素A醋酸酯原料及其制劑中維生素A的含量測(cè)定。五、維生素E的鑒別試驗(yàn)（重點(diǎn)）（一）硝酸反應(yīng)（掌握）維生素E在HNO3酸性條件下，水解生成生育酚，生育酚被HNO3氧化為生育紅，顯橙紅色。（二）三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng)（掌握）維生素E在堿性條件下加熱水解生成游離生育酚，生育酚被三氯化鐵氧化為對(duì)生育醌，生成的二價(jià)鐵與聯(lián)砒啶生成紅色配位離子。（三）紅外吸收光譜法（了解）六、維生素E的雜質(zhì)檢查（重點(diǎn)）1酸度（熟悉）檢查原因控制制備過程中可能引入的醋酸。檢查方法取本品適量溶解，用01MOL/L氫氧化鈉滴定液滴定，不得過05ML。2生育酚（天然型）（掌握）檢查原因控制游離生育酚。檢查原理利用游離生育酚具有還原性，可被硫酸鈰定量氧化的特性。檢查方法取本品適量溶解，用001MOL/L硫酸鈰滴定液滴定，消耗滴定液不得過10ML。3有關(guān)物質(zhì)（合成型）檢查方法氣相色譜法。4殘留溶劑正己烷（天然型）（熟悉）檢查原因控制生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì)正己烷，正己烷對(duì)人體有害。檢查方法氣相色譜法。七、維生素E的含量測(cè)定（了解）維生素E的含量測(cè)定方法很多，例如鈰量法、比色法、熒光法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。各國藥典采用的主要方法為氣相色譜法。第二節(jié)水溶性維生素類藥物的分析維生素B1是由氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基連接而成的季銨化合物。結(jié)構(gòu)如下NNH3CNH2NSCH22OHCH3CLHCL維生素C又稱L抗壞血酸，有四種光學(xué)異構(gòu)體，其中以L構(gòu)型右旋體的生物活性最強(qiáng)。結(jié)構(gòu)如下OCOHHC2HOOH一、水溶性維生素藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、分析方法的關(guān)系（重點(diǎn)，掌握）1酸堿性維生素B1噻唑環(huán)上的季銨及嘧啶環(huán)上的氨基，為兩個(gè)堿性基團(tuán)，具有弱堿性。維生素C結(jié)構(gòu)中具有二烯醇基，具有酸性。2還原性維生素B1噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，最終被氧化生成具有熒光的硫色素；維生素C結(jié)構(gòu)中的二烯醇基具有極強(qiáng)的還原性，可發(fā)生氧化還原反應(yīng)。3與生物堿沉淀試劑反應(yīng)維生素B1分子中含有兩個(gè)含氮雜環(huán)，能與某些生物堿沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)。4水解性在強(qiáng)堿中，維生素C內(nèi)酯環(huán)可水解，生成酮酸鹽。5旋光性維生素C分子結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)手性碳原子，有四種光學(xué)異構(gòu)體。6糖類的性質(zhì)維生素C結(jié)構(gòu)與糖類似，因此具有糖類似的性質(zhì)和反應(yīng)。7紫外吸收特性二、維生素B1的鑒別試驗(yàn)（重點(diǎn)）（一）硫色素反應(yīng)（掌握）硫色素反應(yīng)為維生素B1的專屬反應(yīng)。其原理為噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，再與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合，經(jīng)鐵氰化鉀等氧化劑氧化形成具有熒光的硫色素，硫色素溶于正丁醇或異丁醇中呈藍(lán)色熒光。（二）氯化物鑒別試驗(yàn)（了解）本品水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)。三、維生素B1的含量測(cè)定（重點(diǎn)）（一）維生素B1原料的含量測(cè)定（掌握）維生素B1噻唑環(huán)上季銨及嘧啶環(huán)上氨基，為兩個(gè)堿性基團(tuán)，可采用非水溶液滴定法測(cè)定含量。維生素B1與高氯酸的反應(yīng)比為12。（二）維生素B1制劑的含量測(cè)定（掌握）維生素B1分子結(jié)構(gòu)中具有共軛體系，具紫外吸收，中國藥典（2010年版）采用紫外分光光度法測(cè)定其片劑及注射液含量。四、維生素C的鑒別試驗(yàn)（重點(diǎn)）（一）氧化還原反應(yīng)（掌握）維生素C分子結(jié)構(gòu)中的二烯醇基具有極強(qiáng)的還原性，可以被多種氧化劑氧化為二酮基，成為去氫抗壞血酸，常這些氧化劑被還原后會(huì)產(chǎn)生沉淀或發(fā)生顏色變化，可以對(duì)維生素C進(jìn)行鑒別。1與2,6二氯靛酚反應(yīng)2,6二氯靛酚是一種染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中呈玫瑰紅色，在堿性介質(zhì)中顯藍(lán)色，與維生素C反應(yīng)后生成的還原型的酚亞胺無色。2與硝酸銀反應(yīng)維生素C與硝酸銀發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生黑色沉淀（單質(zhì)銀）。3與堿性酒石酸銅反應(yīng)維生素C與堿性酒石酸銅發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色氧化亞銅沉淀。（二）紅外光譜（了解）五、維生素C的含量測(cè)定（重點(diǎn)，掌握）維生素C可采用碘量法、2,6二氯靛酚法、比色法、紫外分光光度法和高效液相色譜法測(cè)定含量。中國藥典采用碘量法測(cè)定維生素C原料及其制劑的含量。碘量法測(cè)定原理維生素C在醋酸酸性條件下，可被碘定量氧化。注意事項(xiàng)醋酸的作用醋酸酸性介質(zhì)中，維生素C受空氣中氧的氧化速度減慢。加新沸過的冷水減少水中溶解的氧對(duì)測(cè)定的影響。制劑應(yīng)用此法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行必要的預(yù)處理，以減小干擾。同步測(cè)試答案一、單項(xiàng)選擇題1D2C3B4C5A6C7D8D9A10B二、多項(xiàng)選擇題1AB2AC3ABC4BD5ACD6AC7BC8AB9ACD10AD三、計(jì)算題1解維生素C的百分含量10WFTV27869919合格答該維生素供試品含量是9919，合格。2解標(biāo)示量平均片重標(biāo)示量10MVTF2106103690267217答該煙酸片供試品含量是10621050，不合格。3解10WA10WV/CA/SRXSXRS含量912068218371565924含量9121在9001100之間，所以符合規(guī)定。4解A0593，E11CM207，標(biāo)示量01MG/1ML00001G/1ML5072稀釋倍數(shù)5910015722593標(biāo)示量檢品標(biāo)示量百分含量為955。四、分析題請(qǐng)分析維生素A的含量測(cè)定為何不采用直接紫外分光光度法，而要采用較為繁瑣的三點(diǎn)校正法其意以及原理為何答維生素A具有共軛多烯醇的側(cè)鏈，具有紫外吸收，可用于含量測(cè)定。但是，維生素A原料藥中常混有多種雜質(zhì)，包括其異構(gòu)體、氧化降解產(chǎn)物（維生素A2、維生素A3、環(huán)氧化物、維生素A醛、維生素A酸等）、合成中間體、反應(yīng)副產(chǎn)物等，這些雜質(zhì)在維生素A的最大吸收波長(zhǎng)附近也有吸收，干擾維生素A的測(cè)定。為消除這些雜質(zhì)的干擾，中國藥典采用三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A的含量。所謂三點(diǎn)校正法即在三個(gè)選定的波長(zhǎng)處測(cè)得供試品吸收度，在規(guī)定條件下以校正公式進(jìn)行校正計(jì)算，求得維生素A真實(shí)含量的方法。采用該法基于兩點(diǎn)在310340NM范圍內(nèi)，雜質(zhì)吸收呈一直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度下降。物質(zhì)對(duì)光吸收呈加和性。三點(diǎn)校正法必須選擇三個(gè)波長(zhǎng)