老年醫(yī)學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文精品論文SAL等中藥有效成分在氧化應(yīng)激中的保護作用關(guān)鍵詞抗氧化藥物紅景天甙氧化應(yīng)激過氧化氫藥物篩選PC12細胞摘要目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細胞內(nèi)部出現(xiàn)空洞等壞死性癥狀；1，10，100M的紅景天甙均可減輕低氧后引發(fā)的形態(tài)學(xué)改變，如細胞水腫減輕、結(jié)構(gòu)相對完整等。3臺盼藍染色計數(shù)結(jié)果顯示，與正常對照組比較，損傷組PC12細胞死亡率明顯升高，而1，10，100M的紅景天甙抑制了氧化損傷后細胞死亡率的升高，且有濃度依賴性。4用BRDU摻入流式細胞方法測定細胞增殖情況，結(jié)果顯示，經(jīng)紅景天甙處理后的PC12細胞，相對于未加藥組出現(xiàn)不同程度的增殖，且其增殖與紅景天甙藥物濃度成正比，進一步證明紅景天甙具有促細胞增殖作用。5采用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化。結(jié)果顯示，H2O2損傷使APE/REF1表達急劇降低。結(jié)論1建立了抗氧化應(yīng)激藥物篩選的細胞模型，并運用其進行了大量藥物篩選，從50種中藥有效成分中先后篩選出具34種具有抗氧化作用的藥物成分。紅景天甙是其中含較量高且抗低氧化應(yīng)激作用較為顯著的藥物成分之一。2紅景天甙對H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化損傷具有保護作用；3首次在細胞水平證實紅景天甙的抗氧化應(yīng)激的保護作用可能與其促進細胞增殖作用有關(guān)。4在PC12細胞氧化應(yīng)激模型中，APE/REF1表達與抗氧化應(yīng)激有關(guān)，紅景天甙抗氧化損傷作用是否通過對APE表達的影響來實現(xiàn)仍需進一步實驗證明。正文內(nèi)容目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細胞內(nèi)部出現(xiàn)空洞等壞死性癥狀；1，10，100M的紅景天甙均可減輕低氧后引發(fā)的形態(tài)學(xué)改變，如細胞水腫減輕、結(jié)構(gòu)相對完整等。3臺盼藍染色計數(shù)結(jié)果顯示，與正常對照組比較，損傷組PC12細胞死亡率明顯升高，而1，10，100M的紅景天甙抑制了氧化損傷后細胞死亡率的升高，且有濃度依賴性。4用BRDU摻入流式細胞方法測定細胞增殖情況，結(jié)果顯示，經(jīng)紅景天甙處理后的PC12細胞，相對于未加藥組出現(xiàn)不同程度的增殖，且其增殖與紅景天甙藥物濃度成正比，進一步證明紅景天甙具有促細胞增殖作用。5采用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化。結(jié)果顯示，H2O2損傷使APE/REF1表達急劇降低。結(jié)論1建立了抗氧化應(yīng)激藥物篩選的細胞模型，并運用其進行了大量藥物篩選，從50種中藥有效成分中先后篩選出具34種具有抗氧化作用的藥物成分。紅景天甙是其中含較量高且抗低氧化應(yīng)激作用較為顯著的藥物成分之一。2紅景天甙對H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化損傷具有保護作用；3首次在細胞水平證實紅景天甙的抗氧化應(yīng)激的保護作用可能與其促進細胞增殖作用有關(guān)。4在PC12細胞氧化應(yīng)激模型中，APE/REF1表達與抗氧化應(yīng)激有關(guān)，紅景天甙抗氧化損傷作用是否通過對APE表達的影響來實現(xiàn)仍需進一步實驗證明。目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細胞內(nèi)部出現(xiàn)空洞等壞死性癥狀；1，10，100M的紅景天甙均可減輕低氧后引發(fā)的形態(tài)學(xué)改變，如細胞水腫減輕、結(jié)構(gòu)相對完整等。3臺盼藍染色計數(shù)結(jié)果顯示，與正常對照組比較，損傷組PC12細胞死亡率明顯升高，而1，10，100M的紅景天甙抑制了氧化損傷后細胞死亡率的升高，且有濃度依賴性。4用BRDU摻入流式細胞方法測定細胞增殖情況，結(jié)果顯示，經(jīng)紅景天甙處理后的PC12細胞，相對于未加藥組出現(xiàn)不同程度的增殖，且其增殖與紅景天甙藥物濃度成正比，進一步證明紅景天甙具有促細胞增殖作用。5采用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化。結(jié)果顯示，H2O2損傷使APE/REF1表達急劇降低。結(jié)論1建立了抗氧化應(yīng)激藥物篩選的細胞模型，并運用其進行了大量藥物篩選，從50種中藥有效成分中先后篩選出具34種具有抗氧化作用的藥物成分。紅景天甙是其中含較量高且抗低氧化應(yīng)激作用較為顯著的藥物成分之一。2紅景天甙對H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化損傷具有保護作用；3首次在細胞水平證實紅景天甙的抗氧化應(yīng)激的保護作用可能與其促進細胞增殖作用有關(guān)。4在PC12細胞氧化應(yīng)激模型中，APE/REF1表達與抗氧化應(yīng)激有關(guān)，紅景天甙抗氧化損傷作用是否通過對APE表達的影響來實現(xiàn)仍需進一步實驗證明。目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細胞內(nèi)部出現(xiàn)空洞等壞死性癥狀；1，10，100M的紅景天甙均可減輕低氧后引發(fā)的形態(tài)學(xué)改變，如細胞水腫減輕、結(jié)構(gòu)相對完整等。3臺盼藍染色計數(shù)結(jié)果顯示，與正常對照組比較，損傷組PC12細胞死亡率明顯升高，而1，10，100M的紅景天甙抑制了氧化損傷后細胞死亡率的升高，且有濃度依賴性。4用BRDU摻入流式細胞方法測定細胞增殖情況，結(jié)果顯示，經(jīng)紅景天甙處理后的PC12細胞，相對于未加藥組出現(xiàn)不同程度的增殖，且其增殖與紅景天甙藥物濃度成正比，進一步證明紅景天甙具有促細胞增殖作用。5采用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化。結(jié)果顯示，H2O2損傷使APE/REF1表達急劇降低。結(jié)論1建立了抗氧化應(yīng)激藥物篩選的細胞模型，并運用其進行了大量藥物篩選，從50種中藥有效成分中先后篩選出具34種具有抗氧化作用的藥物成分。紅景天甙是其中含較量高且抗低氧化應(yīng)激作用較為顯著的藥物成分之一。2紅景天甙對H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化損傷具有保護作用；3首次在細胞水平證實紅景天甙的抗氧化應(yīng)激的保護作用可能與其促進細胞增殖作用有關(guān)。4在PC12細胞氧化應(yīng)激模型中，APE/REF1表達與抗氧化應(yīng)激有關(guān)，紅景天甙抗氧化損傷作用是否通過對APE表達的影響來實現(xiàn)仍需進一步實驗證明。目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細胞內(nèi)部出現(xiàn)空洞等壞死性癥狀；1，10，100M的紅景天甙均可減輕低氧后引發(fā)的形態(tài)學(xué)改變，如細胞水腫減輕、結(jié)構(gòu)相對完整等。3臺盼藍染色計數(shù)結(jié)果顯示，與正常對照組比較，損傷組PC12細胞死亡率明顯升高，而1，10，100M的紅景天甙抑制了氧化損傷后細胞死亡率的升高，且有濃度依賴性。4用BRDU摻入流式細胞方法測定細胞增殖情況，結(jié)果顯示，經(jīng)紅景天甙處理后的PC12細胞，相對于未加藥組出現(xiàn)不同程度的增殖，且其增殖與紅景天甙藥物濃度成正比，進一步證明紅景天甙具有促細胞增殖作用。5采用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化。結(jié)果顯示，H2O2損傷使APE/REF1表達急劇降低。結(jié)論1建立了抗氧化應(yīng)激藥物篩選的細胞模型，并運用其進行了大量藥物篩選，從50種中藥有效成分中先后篩選出具34種具有抗氧化作用的藥物成分。紅景天甙是其中含較量高且抗低氧化應(yīng)激作用較為顯著的藥物成分之一。2紅景天甙對H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化損傷具有保護作用；3首次在細胞水平證實紅景天甙的抗氧化應(yīng)激的保護作用可能與其促進細胞增殖作用有關(guān)。4在PC12細胞氧化應(yīng)激模型中，APE/REF1表達與抗氧化應(yīng)激有關(guān)，紅景天甙抗氧化損傷作用是否通過對APE表達的影響來實現(xiàn)仍需進一步實驗證明。目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細胞內(nèi)部出現(xiàn)空洞等壞死性癥狀；1，10，100M的紅景天甙均可減輕低氧后引發(fā)的形態(tài)學(xué)改變，如細胞水腫減輕、結(jié)構(gòu)相對完整等。3臺盼藍染色計數(shù)結(jié)果顯示，與正常對照組比較，損傷組PC12細胞死亡率明顯升高，而1，10，100M的紅景天甙抑制了氧化損傷后細胞死亡率的升高，且有濃度依賴性。4用BRDU摻入流式細胞方法測定細胞增殖情況，結(jié)果顯示，經(jīng)紅景天甙處理后的PC12細胞，相對于未加藥組出現(xiàn)不同程度的增殖，且其增殖與紅景天甙藥物濃度成正比，進一步證明紅景天甙具有促細胞增殖作用。5采用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化。結(jié)果顯示，H2O2損傷使APE/REF1表達急劇降低。結(jié)論1建立了抗氧化應(yīng)激藥物篩選的細胞模型，并運用其進行了大量藥物篩選，從50種中藥有效成分中先后篩選出具34種具有抗氧化作用的藥物成分。紅景天甙是其中含較量高且抗低氧化應(yīng)激作用較為顯著的藥物成分之一。2紅景天甙對H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化損傷具有保護作用；3首次在細胞水平證實紅景天甙的抗氧化應(yīng)激的保護作用可能與其促進細胞增殖作用有關(guān)。4在PC12細胞氧化應(yīng)激模型中，APE/REF1表達與抗氧化應(yīng)激有關(guān)，紅景天甙抗氧化損傷作用是否通過對APE表達的影響來實現(xiàn)仍需進一步實驗證明。目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細胞內(nèi)部出現(xiàn)空洞等壞死性癥狀；1，10，100M的紅景天甙均可減輕低氧后引發(fā)的形態(tài)學(xué)改變，如細胞水腫減輕、結(jié)構(gòu)相對完整等。3臺盼藍染色計數(shù)結(jié)果顯示，與正常對照組比較，損傷組PC12細胞死亡率明顯升高，而1，10，100M的紅景天甙抑制了氧化損傷后細胞死亡率的升高，且有濃度依賴性。4用BRDU摻入流式細胞方法測定細胞增殖情況，結(jié)果顯示，經(jīng)紅景天甙處理后的PC12細胞，相對于未加藥組出現(xiàn)不同程度的增殖，且其增殖與紅景天甙藥物濃度成正比，進一步證明紅景天甙具有促細胞增殖作用。5采用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化。結(jié)果顯示，H2O2損傷使APE/REF1表達急劇降低。結(jié)論1建立了抗氧化應(yīng)激藥物篩選的細胞模型，并運用其進行了大量藥物篩選，從50種中藥有效成分中先后篩選出具34種具有抗氧化作用的藥物成分。紅景天甙是其中含較量高且抗低氧化應(yīng)激作用較為顯著的藥物成分之一。2紅景天甙對H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞氧化損傷具有保護作用；3首次在細胞水平證實紅景天甙的抗氧化應(yīng)激的保護作用可能與其促進細胞增殖作用有關(guān)。4在PC12細胞氧化應(yīng)激模型中，APE/REF1表達與抗氧化應(yīng)激有關(guān)，紅景天甙抗氧化損傷作用是否通過對APE表達的影響來實現(xiàn)仍需進一步實驗證明。目的氧化應(yīng)激與過氧化物積聚是導(dǎo)致多種疾病如腦缺血、ALZHEIMER39S病AD、腦動脈粥樣硬化等的根本原因。H2O2是氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)的活性氧之一，其主要產(chǎn)物OH具有很強的氧化性并可自由進入細胞，破壞細胞內(nèi)活性氧和抗氧化代謝的平衡，使抗氧化酶等活性下降，同時會損傷體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，造成細胞內(nèi)酶活力變化、代謝紊亂、DNA損傷和細胞調(diào)亡。機體自身具有清除或修復(fù)氧化損傷的能力，例如超氧化物歧化酶SOD和過氧化物酶POD是機體內(nèi)重要的抗氧化酶系之一，其作用在于清除體內(nèi)的自由基。無嘌呤/無嘧啶核酸內(nèi)切酶/氧化還原因子1APURINIC/APYRIMIDINICENDONUCLEASE/REDOXFACTOR1，APE/REF1是一種多功能的蛋白，在DNA堿基切除修復(fù)BER，BASEEXCISEREPAIR、對轉(zhuǎn)錄因子的氧化還原調(diào)控和活性氧簇的調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，是參與DNA氧化損傷修復(fù)的重要抗氧化酶。因此，提高機體氧化損傷時抗氧化酶的表達/活性將有利于對上述疾病的預(yù)防及治療。近年來研究表明，我國很多中藥成分具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對人體有利的作用，但其抗氧化作用機制目前仍在研究之中。本文建立了用于篩選抗氧化藥物的細胞模型，對幾十種中藥有效成份進行篩選，并對中藥紅景天的主要成分紅景天甙SALIDROSIDE，SAL的抗氧化應(yīng)激作用及其機制進行了初步的實驗觀察與分析，對APE/REF1的表達與過氧化氫導(dǎo)致PC12細胞損傷的關(guān)系進行研究，為氧化應(yīng)激損傷引起的老年性心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。方法1抗氧化藥物篩選模型的建立用PC12細胞，以不同的濃度H2O2設(shè)0，50，100，200，300，400M孵育細胞1H及用200MH2O2分別作用30MIN、1H、2H、4H、6H、12H，然后采用MTT比色法進行細胞存活檢測。選用維生素E為抗氧化應(yīng)激陽性對照藥物，建立細胞模型，用于抗氧化藥物的篩選。2抗氧化中藥藥物成分的篩選運用所建立的細胞抗氧化模型，先用不同濃度的中藥藥物成分與PC12細胞共孵育30MIN，再加入終濃度為200M的H2O2作用1小時，對50種中藥成分進行抗氧化保護作用的篩選。3紅景天甙的抗氧化損傷保護作用及其機制探討選擇其中抗氧化作用較為明顯的中藥紅景天的提取物紅景天甙，對其抗氧化保護作用進行進一步探討。紅景天甙抗氧化作用的作用機制如何我們猜測，紅景天甙的抗氧化保護作用在細胞水平可能與提高細胞對氧化損傷的耐受性、減輕細胞受損、和促進細胞增殖有關(guān)。為探討其保護作用機制，實驗選用1，10，100M三個濃度的紅景天甙對PC12細胞進行預(yù)處理30MIN，設(shè)正常對照組和氧化損傷組加入終濃度為200M的H2O2作用1H，通過MTT、細胞形態(tài)學(xué)觀察及臺盼藍染色等方法，觀察其抗氧化損傷作用，通過BRDU摻入后流式細胞儀檢測細胞增殖情況，并用WESTERNBLOT方法觀察細胞內(nèi)APE/REF1的表達變化，分析紅景天甙抗氧化損傷作用的可能機制。結(jié)果1MTT法檢測試PC12細胞進行H2O2氧化損傷處理情況，實驗發(fā)現(xiàn)處理1H后，200，300，400MH2O2可以引發(fā)細胞損傷，細胞存活出現(xiàn)明顯降低，其損傷程度呈現(xiàn)濃度依賴性；用200MH2O2處理后，細胞損傷呈時間依賴性變化。陽性對照藥物維生素E可以減輕氧化引發(fā)的細胞損傷，并具有劑量依賴性，由此成功建立抗氧化損傷的篩藥模型。2采用上一步建立的PC12細胞模型，將不同濃度的藥物與PC12細胞共孵育30MIN，采用200M的H2O2作用1H后，進行50種藥物成分的篩選，先后共發(fā)現(xiàn)34種有效中藥藥物成分具有抗氧化作用。我們從中選取抗氧化作用較為明顯的紅景天甙作為下一步的研究。3紅景天甙的抗氧化保護作用及其機制探討1與正常對照組比較，200M的H2O2作用1H后，細胞存活率明顯降低；05M，1M的紅景天甙在細胞氧化損傷后細胞存活率略有升高，10M和100M的紅景天甙能明顯提高細胞在氧化損傷后的存活率，而200M和400M的紅景天甙對細胞的保護作用并不明顯。2采用倒置相差顯微鏡進行形態(tài)學(xué)觀察，可以看到，氧化損傷組引起細胞發(fā)生水腫，部分細