016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗 016 前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替G B 4 7 8 9 . 4 2 0 1 0 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗 、S N 0 1 7 0 1 9 9 2 出口食品沙門氏菌屬(包括亞利桑那菌)檢驗方法 、 S N / T 2 5 5 2 2 0 1 0 乳及乳制品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗方法 第5部分:沙門氏菌檢驗 。整合后的標(biāo)準(zhǔn)與G B 4 7 8 9 2 0 1 0相比,主要變化如下: 修改了檢測流程和血清學(xué)檢測操作程序; 修改了附錄0161 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中沙門氏菌(檢驗方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中沙門氏菌的檢驗。2 設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:箱: 2 5 。溫培養(yǎng)箱: 3 6 1 , 4 2 1 。質(zhì)器。蕩器。子天平:感量0 .1 g 。菌錐形瓶:容量5 0 0 m L , 2 5 0 m L 。菌吸管: 1 m L (具0 m 、 1 0 m L (具0 .1 m 微量移液器及吸頭。菌培養(yǎng)皿:直徑6 0 m m , 9 0 m m 。菌試管: 3 m m 5 0 m m 、 1 0 m m 7 5 m m 。p 比色管或精密p 自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。菌毛細(xì)管。3 沖蛋白胨水( B P W ) :見A 硫磺酸鈉煌綠( T T B )增菌液:見A 硒酸鹽胱氨酸( S C )增菌液:見A 硫酸鉍( B S )瓊脂:見A A 糖賴氨酸脫氧膽鹽( X L D )瓊脂:見A 門氏菌屬顯色培養(yǎng)基。糖鐵( T S I )瓊脂:見A 白胨水、靛基質(zhì)試劑:見A 素瓊脂( p H 7 :見A 化鉀( K C N )培養(yǎng)基:見A 。氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基:見A 。發(fā)酵管:見A 。硝基酚 - O N P G )培養(yǎng)基:見A 。固體瓊脂:見A 。0162 二酸鈉培養(yǎng)基:見A 。門氏菌O 、 化鑒定試劑盒。4 檢驗程序沙門氏菌檢驗程序見圖1 。圖1 0163 5 增菌無菌操作稱取2 5 g ( m L )樣品,置于盛有2 2 5 m L B P 8 0 0 0 r / m i n 1 0 0 0 0 r / m i m i n 2 m i n ,或置于盛有2 2 5 m L B P 拍擊式均質(zhì)器拍打1 m i n 2 m i n 。若樣品為液態(tài),不需要均質(zhì),振蕩混勻。如需調(diào)整p H ,用1 m o l / m a O 至6 0 無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至5 0 0 m 均質(zhì)杯本身具有無孔蓋,可不轉(zhuǎn)移樣品) ,如使用均質(zhì)袋,可直接進(jìn)行培養(yǎng),于3 6 1 培養(yǎng)8 h 1 8 h 。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在4 5 以下不超過1 5 m i n ,或2 5 不超過1 8 菌輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物,移取1 m L ,轉(zhuǎn)種于1 0 m L T T 4 2 1 培養(yǎng)1 8 h 2 4 h 。同時,另取1 m L ,轉(zhuǎn)種于1 0 m L S 3 6 1 培養(yǎng)1 8 h 2 4 h 。離分別用直徑3 m 線接種于一個B H ,于3 6 1 分別培養(yǎng)4 0 h 4 8 h ( B 1 8 h 2 4 h( X L H 門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板) ,觀察各個平板上生長的菌落,各個平板上的菌落特征見表1 。表1 沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌B 褐色或灰色,菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰綠色的菌落,周圍培養(yǎng)基不變H 數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色;有些菌株為黃色,中心黑色或幾乎全黑色X L 或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,或呈現(xiàn)全部黑色的菌落;有些菌株為黃色菌落,選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落,接種三糖鐵瓊脂,先在斜面劃線,再于底層穿刺;接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板,于3 6 1 培養(yǎng)1 8 h 2 4 h ,必要時可延長至4 8 h 。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基內(nèi),沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見表2 。0164 表2 沙門氏菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果三糖鐵瓊脂斜面底層產(chǎn)氣硫化氫賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基初步判斷K A + ( - ) + ( - ) +可疑沙門氏菌屬K A + ( - ) + ( - ) + ( - ) + ( - ) +可疑沙門氏菌屬A A + / - + / - + / - + / - + / K :產(chǎn)堿, A :產(chǎn)酸; + :陽性, - :陰性; + ( - ) :多數(shù)陽性,少數(shù)陰性; + / - :陽性或陰性。種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基的同時,可直接接種蛋白胨水(供做靛基質(zhì)試驗) 、尿素瓊脂( p H 7 、氰化鉀( K C N )培養(yǎng)基,也可在初步判斷結(jié)果后從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于3 6 1 培養(yǎng)1 8 h 2 4 h ,必要時可延長至4 8 h ,按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲存于2 5 或室溫至少保留2 4 h ,以備必要時復(fù)查。表3 沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表反應(yīng)序號硫化氫( H 2 S )靛基質(zhì)p H 7 K C N )賴氨酸脫羧酶A 1 + - - - +A 2 + + - - +A 3 - - - - + / +陽性; + / 應(yīng)序號A 1 :典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、 K C 表4可判定為沙門氏菌。如有2項異常為非沙門氏菌。表4 沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表p H 7 K C N )賴氨酸脫羧酶判定結(jié)果- - 求血清學(xué)鑒定結(jié)果)- + +沙門氏菌或 (要求符合本群生化特性)+ - +沙門氏菌個別變體(要求血清學(xué)鑒定結(jié)果)注: +表示陽性; 應(yīng)序號A 2 :補做甘露醇和山梨醇試驗,沙門氏菌靛基質(zhì)陽性變體兩項試驗結(jié)果均為陽性,但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。應(yīng)序號A 3 :補做O N P G 。 O N P 時賴氨酸脫羧酶陽性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。要時按表5進(jìn)行沙門氏菌生化群的鑒別。0165 表5 沙門氏菌屬各生化群的鑒別項目 衛(wèi)矛醇+ + + 山梨醇+ + + + + 水楊苷 + O N P G + + 丙二酸鹽 + + K C N + + 注: +表示陽性; 表示陰性。選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng),可根據(jù)5 1的初步判斷結(jié)果,從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落,用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙?使用生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。查培養(yǎng)物有無自凝性一般采用1 1 瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。首先排除自凝集反應(yīng),在潔凈的玻片上滴加一滴生理鹽水,將待試培養(yǎng)物混合于生理鹽水滴內(nèi),使成為均一性的混濁懸液,將玻片輕輕搖動3 0 s 6 0 s ,在黑色背景下觀察反應(yīng)(必要時用放大鏡觀察) ,若出現(xiàn)可見的菌體凝集,即認(rèn)為有自凝性,反之無自凝性。對無自凝的培養(yǎng)物參照下面方法進(jìn)行血清學(xué)鑒定。價菌體抗原(O)鑒定在玻片上劃出2個約1 c m 2 c 取1環(huán)待測菌,各放1 / 2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部,在其中一個區(qū)域下部加1滴多價菌體( O )抗血清,在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個區(qū)域內(nèi)的菌苔研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1 m i n ,并對著黑暗背景進(jìn)行觀察,任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應(yīng)。 菌株接種在瓊脂量較高的(如2 % 3 % )培養(yǎng)基上再檢查;如果是由于V 挑取菌苔于1 m 酒精燈火焰上煮沸后再檢查。價鞭毛抗原(H)鑒定操作同5 2 。 菌株接種在0 % 0 %半固體瓊脂平板的中央,待菌落蔓延生長時,在其邊緣部分取菌檢查;或?qū)⒕晖ㄟ^接種裝有0 0 半固體瓊脂的小玻管1次2次,自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查。清學(xué)分型(選做項目)抗原的鑒定用A 時用生理鹽水做對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙型菌株,不能分型。被A 次用O 4 ; O 3 、 O 1 0 ; O 7 ; O 8 ; O 9 ; O 2和O 1 1因子血清做凝集試驗。根據(jù)試驗結(jié)果,判定O 3 、 O 1 0血清凝集的菌株,再用O 1 0 、 O 1 5 、 O 3 4 、 O 1 0166 試驗,判定E 1 、 E 4各亞群,每一個有被A 用9種多價有其中一種血清凝集,則用這種血清所包括的確定種多價多價1 A , B , C , D , E , 包括6 , 1 4群)1 3 , 1 6 , 1 7 , 1 8 , 2 1群2 8 , 3 0 , 3 5 , 3 8 , 3 9群4 0 , 4 1 , 4 2 , 4 3群4 4 , 4 5 , 4 7 , 4 8群5 0 , 5 1 , 5 2 , 5 3群5 5 , 5 6 , 5 7 , 5 8群5 9 , 6 0 , 6 1 , 6 2群6 3 , 6 5 , 6 6 , 6 抗原的鑒定屬于A 次用表6所述6 A抗原表C 2D (不產(chǎn)氣的)D (產(chǎn)氣的)E 1E 4E 4 f , b , v , r , d , m , p , s , z 1 52 , 5無無6 , w , 用8種多價有其中一種或兩種血清凝集,則再用這一種或兩種血清所包括的各種第1相和第2項的8種多價多價1 a , b , c , d ,e h , e n x , e n z 1 5 , f g , g m s , g p u , g p , g q , m t , g z 5 1k , r , y , z , z 1 0 ,l v ,l w ,l z 1 3 ,l z 2 8 ,l z 4 01 , 2 ; 1 , 5 ; 1 , 6 ; 1 , 7 ; z 6z 4 z 2 3 , z 4 z 2 4 , z 4 z 3 2 , z 2 9 , z 3 5 , z 3 6 , z 3 8z 3 9 , z 4 1 , z 4 2 , z 4 4z 5 2 , z 5 3 , z 5 4 , z 5 5z 5 6 , z 5 7 , z 6 0 , z 6 1 , z 6 2每一個有出第1相0167 在瓊脂斜面上移種1代 2代后再檢查。如仍只檢出一個相的用位相變異的方法檢查其另一個相。單相菌不必做位相變異檢查。位相變異試驗方法如下:簡易平板法:將0 % 0 半固體瓊脂平板烘干表面水分,挑取因子血清1環(huán),滴在半固體平板表面,放置片刻,待血清吸收到瓊脂內(nèi),在血清部位的中央點種待檢菌株,培養(yǎng)后,在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。小玻管法:將半固體管(每管約1 m L 2 m L )在酒精燈上溶化并冷至5 0 ,取已知相的0 5 m L 0 .1 m L ,加入于溶化的半固體內(nèi),混勻后,用毛細(xì)吸管吸取分裝于供位相變異試驗的小玻管內(nèi),待凝固后,用接種針挑取待檢菌,接種于一端。將小玻管平放在平皿內(nèi),并在其旁放一團(tuán)濕棉花,以防瓊脂中水分蒸發(fā)而干縮,每天檢查結(jié)果,待另一相細(xì)菌解離后,可以從另一端挑取細(xì)菌進(jìn)行檢查。培養(yǎng)基內(nèi)血清的濃度應(yīng)有適當(dāng)?shù)谋壤?過高時細(xì)菌不能生長,過低時同一相細(xì)菌的動力不能抑制。一般按原血清1 2 0 0 1 8 0 0的量加入。小倒管法:將兩端開口的小玻管(下端開口要留一個缺口,不要平齊)放在半固體管內(nèi),小玻管的上端應(yīng)高出于培養(yǎng)基的表面,滅菌后備用。臨用時在酒精燈上加熱溶化,冷至5 0 ,挑取因子血清1環(huán),加入小套管中的半固體內(nèi),略加攪動,使其混勻,待凝固后,將待檢菌株接種于小套管中的半固體表層內(nèi),每天檢查結(jié)果,待另一相細(xì)菌解離后,可從套管外的半固體表面取菌檢查,或轉(zhuǎn)種1 %軟瓊脂斜面,于3 6 培養(yǎng)后再做凝集試驗。知具有V 寒沙門氏菌,丙型副傷寒沙門氏菌,都柏林沙門氏菌。型的判定根據(jù)血清學(xué)分型鑒定的結(jié)果,按照附錄 結(jié)果與報告綜合以上生化試驗和血清學(xué)鑒定的結(jié)果,報告2 5 g ( m L )樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。0168 附 錄 沖蛋白胨水( 成分蛋白胨 1 0 .0 0 1 2個結(jié)晶水) 9 .0 5 0 0 m 法將各成分加入蒸餾水中,攪混均勻,靜置約1 0 m i n ,煮沸溶解,調(diào)節(jié)p 2 0 高壓滅菌1 2 1 ,1 5 m i n 。硫磺酸鈉煌綠(礎(chǔ)液蛋白胨 1 0 .0 0 0 .0 0 0 m 各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,再加入碳酸鈣,調(diào)節(jié)p 0 0 高壓滅菌1 2 1 ,2 0 m i n 。代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉(含5個結(jié)晶水) 5 0 .0 0 m 1 , 2 0 m i n 。溶液碘 片2 0 .0 .0 0 m 投入碘片,振搖玻瓶至碘片全部溶解為止,然后加蒸餾水至規(guī)定的總量,貯存于棕色瓶內(nèi),塞緊瓶蓋備用。綠水溶液煌綠0 .5 0169 蒸餾水1 0 0 m 放暗處,不少于1 d ,使其自然滅菌。膽鹽溶液牛膽鹽 1 0 .0 0 m 壓滅菌1 2 1 , 2 0 m i n 。法基礎(chǔ)液 9 0 0 m 0 m .0 m 0 m .0 m 上列順序,以無菌操作依次加入基礎(chǔ)液中,每加入一種成分,均應(yīng)搖勻后再加入另一種成分。硒酸鹽胱氨酸(分蛋白胨 5 .0 0 .0 0 胱氨酸0 0 0 m 法除亞硒酸氫鈉和L 各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,冷至5 5 以下,以無菌操作加入亞硒酸氫鈉和1 g / L L m L (稱取0 .1 g L 1 m o l / m L ,使溶解,再加無菌蒸餾水至1 0 0 m 為D L 量應(yīng)加倍) 。搖勻,調(diào)節(jié)p 0 0 硫酸鉍(分蛋白胨 1 0 .0 0 0 3 0 0 2 5 0 g / 0 m 0 0161 0 亞硫酸鈉6 .0 .0 g 2 0 .0 0 0 m 法將前三種成分加入3 0 0 m 作基礎(chǔ)液) ,硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入2 0 m m 檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一2 0 m m 脂加入6 0 0 m 后分別攪拌均勻,煮沸溶解。冷至8 0 左右時,先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻,倒入基礎(chǔ)液中,混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻,倒入基礎(chǔ)液中,再混勻。調(diào)節(jié)p 5 0 隨即傾入瓊脂液中,混合均勻,冷至5 0 5 5 。加入煌綠溶液,充分混勻后立即傾注平皿。注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處,超過4 8 培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備,第二天使用。E 瓊脂( 成分蛋白胨 1 2 .0 0 .0 .0 0 .0 0 .0 g 2 0 .0 0 0 m 4 %溴麝香草酚藍(lán)溶液1 6 .0 m LA n d r a d .0 m .0 m .0 m 法將前面七種成分溶解于4 0 0 m 瓊脂加入于6 0 0 m 后分別攪拌均勻,煮沸溶解。加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi),調(diào)節(jié)p 5 0 再加入指示劑,并與瓊脂液合并,待冷至5 0 5 5 傾注平皿。注: 本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性。甲液的配制硫代硫酸鈉 3 4 .0 0 0 m L乙液的配制去氧膽酸鈉 1 0 .0 0 m L A n d r a d e 指示劑酸性復(fù)紅 0 .5 0161 1 1 m o l / .0 m 0 m 入氫氧化鈉溶液。數(shù)小時后如復(fù)紅褪色不全,再加氫氧化鈉溶液1 m L 2 m L 。糖賴氨酸脫氧膽鹽(分酵母膏 3 .0 賴氨酸5 .0 7 5 5 5 5 8 8 0 .0 0 8 0 0 m 法除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入4 0 0 m 沸溶解,調(diào)節(jié)p 4 0 另將瓊脂加入6 0 0 m 沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,待冷至5 0 5 5 傾注平皿。注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處。本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備,第二天使用。糖鐵(分蛋白胨 2 0 .0 0 .0 .0 0 6個結(jié)晶水) 0 .2 0 2 5 0 g / 0 m 0 2 .0 0 0 m 0161 2 法除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入4 0 0 m 沸溶解,調(diào)節(jié)p 4 0 另將瓊脂加入6 0 0 m 沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,混勻,分裝試管,每管約2 m L 4 m L ,高壓滅菌1 2 1 1 0 m i 5 1 5 m i n ,滅菌后制成高層斜面,呈桔紅色。白胨水、白胨水蛋白胨(或胰蛋白胨) 2 0 .0 0 0 0 m 沸溶解,調(diào)節(jié)p 4 0 分裝小試管, 1 2 1 高壓滅菌1 5 m i n 。凡克試劑:將5 m 后緩慢加入濃鹽酸2 5 m L 。1 m L 9 5 %乙醇內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸2 0 m L 。驗方法挑取小量培養(yǎng)物接種,在3 6 1 培養(yǎng)1 d 2 d ,必要時可培養(yǎng)4 d 5 d 。加入柯凡克試劑約0 .5 m L ,輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐5 m L ,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。注:蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氯酸。每批蛋白胨買來后,應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。素瓊脂( 成分蛋白胨 1 .0 0 0 0 4 %酚紅3 .0 m .0 0 0 m %尿素溶液1 0 0 m 法除尿素、瓊脂和酚紅外,將其他成分加入4 0 0 m 沸溶解,調(diào)節(jié)p 2 0 另將瓊脂加入6 0 0 m 沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑后分裝, 1 2 1 高壓滅菌1 5 m i n 。冷至5 0 5 5 ,0161 3 入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2 % 。分裝于無菌試管內(nèi),放成斜面?zhèn)溆谩ｒ灧椒ㄌ羧…傊囵B(yǎng)物接種,在3 6 1 培養(yǎng)2 4 h ,觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色?；?分蛋白胨 1 0 .0 0 2 2 5 6 4 0 0 m 5 %氰化鉀2 0 .0 m 法將除氰化鉀以外的成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,分裝后1 2 1 高壓滅菌1 5 m i n 。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每1 0 0 m 5 %氰化鉀溶液2 .0 m L (最后濃度為1 1 0 0 0 0 ) ,分裝于無菌試管內(nèi),每管約4 m L ,立刻用無菌橡皮塞塞緊,放在4 冰箱內(nèi),至少可保存兩個月。同時,將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基,分裝試管備用。驗方法將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液,挑取1環(huán)接種于氰化鉀( K C N )培養(yǎng)基。并另挑取1環(huán)接種于對照培養(yǎng)基。在3 6 1 培養(yǎng)1 d 2 d ,觀察結(jié)果。如有細(xì)菌生長即為陽性(不抑制) ,經(jīng)2 制) 。注:氰化鉀是劇毒藥,使用時應(yīng)小心,切勿沾染,以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗失敗的主要原因是封口不嚴(yán),氰化鉀逐漸分解,產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出,以致藥物濃度降低,細(xì)菌生長,因而造成假陽性反應(yīng)。試驗時對每一環(huán)節(jié)都要特別注意。分蛋白胨 5 .0 0 0 0 0 m 6 %溴甲酚紫0 m 賴氨酸或D L 5 g / 1 0 0 m 0 g / 1 0 0 m 法除賴氨酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶1 0 0 m L ,分別加入賴氨酸。 L 5 %加入,0161 4 D L 加入。調(diào)節(jié)p 8 0 對照培養(yǎng)基不加賴氨酸。分裝于無菌的小試管內(nèi),每管0 .5 m L ,上面滴加一層液體石蠟, 1 1 5 高壓滅菌1 0 m i n 。驗方法從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種,于3 6 1 培養(yǎng)1 8 h 2 4 h ,觀察結(jié)果。氨基酸脫羧酶陽性者由于產(chǎn)堿,培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者無堿性產(chǎn)物,但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。對照管應(yīng)為黃色。分牛肉膏 5 .0 .0 0 1 2個結(jié)晶水) 2 .0 2 %溴麝香草酚藍(lán)溶液1 2 .0 m 0 0 m 萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,調(diào)節(jié)p 4 0 按0 加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi), 1 2 1 高壓滅菌1 5 m i n 。他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶1 0 0 m L , 1 2 1 高壓滅菌1 5 m i n 。另將各種糖類分別配好1 0 %溶液,同時高壓滅菌。將5 m 0 m 無菌操作分裝小試管。注:蔗糖不純,加熱后會自行水解者,應(yīng)采用過濾法除菌。驗方法從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于3 6 1 培養(yǎng),一般2 d 3 d 。遲緩反應(yīng)需觀察1 4 d 3 0 d 。硝基酚分鄰硝基酚 - O N P G )( O - N i t r o p h e n y l - - D - g a l a c t o p y r a n o s i d e )6 0 .0 m 0 1 m o l / p H 7 1 0 .0 m 蛋白胨水( p H 7 3 0 .0 m 法將O N P 入蛋白胨水,以過濾法除菌,分裝于無菌的小試管內(nèi),每管0 .5 m L ,用橡皮塞塞緊。0161 5 驗方法自瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)接種于3 6 1 培養(yǎng)1 h 3 果 于1 h 3 無此酶則2 4 分牛肉膏 0 .3 0 5 3 5 g 0 .4 0 m 法按以上成分配好,煮沸溶解,調(diào)節(jié)p 4 0 分裝小試管。 1 2 1 高壓滅菌1 5 m i n 。直立凝固備用。注:供動力觀察、菌種保存、 分酵母浸膏 1 .0 0 6 4 0 0 2 %溴麝香草酚藍(lán)溶液1 2 .0 m 0 0 m 法除指示劑以外的成分溶解于水,調(diào)節(jié)p 8 0 再加入指示劑,分裝試管, 1 2 1 高壓滅菌1 5 m i n 。驗方法用新鮮的瓊脂培養(yǎng)物接種,于3 6 1 培養(yǎng)4 8 h ,觀察結(jié)果。陽性者由綠色變?yōu)樗{(lán)色。0161 6 附 錄 1 。見沙門氏菌抗原表菌名拉丁菌名群甲型副傷寒沙門氏菌S.P a r a t y p h i A 1 , 2 , 1 2 a 1 , 5 B 群基桑加尼沙門氏菌S. K i s a n g a n i 1 , 4 , 5 , 1 2 a 1 , 2阿雷查瓦萊塔沙門氏菌S. A r e c h a v a l e t a 4 , 5 , 1 2 a 1 , 7馬流產(chǎn)沙門氏菌S. A b o r t u s e q u i 4 , 1 2 e , n , a r a t y p h i B 1 , 4 , 5 , 1 2 b 1 , 2利密特沙門氏菌S.L i m e t e 1 , 4 , 1 2 , 2 7 b 1 , 5阿邦尼沙門氏菌S. A b o n y 1 , 4 , 5 , 1 2 , 2 7 b e , n , W i e n 1 , 4 , 1 2 , 2 7 b l , u r y 4 , 1 2 , 2 7 c z 6斯坦利沙門氏菌S.S t a n l e y 1 , 4 , 5 , 1 2 , 2 7 d 1 , 2圣保羅沙門氏菌S.S a i n t p a u l 1 , 4 , 5 , 1 2 e , h 1 , 2里定沙門氏菌S.R e a d i n g 1 , 4 , 5 , 1 2 e , h 1 , 5徹斯特沙門氏菌S.C h e s t e r 1 , 4 , 5 , 1 2 e , h e , n , e r b y 1 , 4 , 5 , 1 2 f , g 1 , 2 阿貢納沙門氏菌S. A g o n a 1 , 4 , 5 , 1 2 f , g , s 1 , 2 埃森沙門氏菌S.E s s e n 4 , 1 2 g , m 加利福尼亞沙門氏菌S.C a l i f o r n i a 4 , 1 2 g , m , t z 6 7 金斯敦沙門氏菌S. K i n g s t o n 1 , 4 , 5 , 1 2 , 2 7 g , s , t 1 , 2 布達(dá)佩斯沙門氏菌S.B u d a p e s t 1 , 4 , 1 2 , 2 7 g , t 鼠傷寒沙門氏菌S.T y p h i m u r i u m 1 , 4 , 5 , 1 2 i 1 , 2拉古什沙門氏菌S.L a g o s 1 , 4 , 5 , 1 2 i 1 , 5布雷登尼沙門氏菌S.B r e d e n e y 1 , 4 , 1 2 , 2 7 l , v 1 , 7基爾瓦沙門氏菌S. K i l w a 4 , 1 2 l , w e , n , H e i d e l b e r g 1 , 4 , 1 5 , 1 2 r 1 , 2印地安納沙門氏菌S.I n d i a n a 1 , 4 , 1 2 z 1 , 0161 7 )菌名拉丁菌名 t a n l e y v i l l e 1 , 4 , 5 , 1 2 , 2 7 z 4 , z 2 3 1 , 2 伊圖里沙門氏菌S.I t u r i 1 , 4 , 1 2 z 1 0 1 , 5C 1 群奧斯陸沙門氏菌S. O s l o 6 , 7 , 1 4 a e , n , d i n b u r g 6 , 7 , 1 4 b 1 , 5布隆方丹沙門氏菌S.B l o e m f o n t e i n 6 , 7 b e , n , x : z 4 2丙型副傷寒沙門氏菌S.P a r a t y p h i C 6 , 7 , V i c 1 , 5豬霍亂沙門氏菌S.C h o l e r a e s u i s 6 , 7 c 1 , 5豬傷寒沙門氏菌S.T y p h i s u i s 6 , 7 c 1 , 5羅米他沙門氏菌S.L o m i t a 6 , 7 e , h 1 , 5布倫登盧普沙門氏菌S.B r a e n d e r u p 6 , 7 , 1 4 e , h e , n , z 1 5里森沙門氏菌S.R i s s e n 6 , 7 , 1 4 f , g 蒙得維的亞沙門氏菌S. M o n t e v i d e o 6 , 7 , 1 4 g , m , p , s 1 , 2 , 7 里吉爾沙門氏菌S. R i g g i l 6 , 7 g , t 奧雷寧堡沙門氏菌S. O r a n i e b u r g 6 , 7 , 1 4 m , t 2 , 5 , 7 奧里塔蔓林沙門氏菌S. O r i t a m e r i n 6 , 7 i 1 , 5湯卜遜沙門氏菌S. T h o m p s o n 6 , 7 , 1 4 k 1 , 5康科德沙門氏菌S.C o n c o r d 6 , 7 l , v 1 , 2伊魯木沙門氏菌S.I r u m u 6 , 7 l , v 1 , 5姆卡巴沙門氏菌S. M k a m b a 6 , 7 l , v 1 , 6波恩沙門氏菌S.B o n n 6 , 7 l , v e , n , o t s d a m 6 , 7 , 1 4 l , v e , n , z 1 5格但斯克沙門氏菌S. G d a n s k 6 , 7 , 1 4 l , v z 6維爾肖沙門氏菌S. V i r c h o w 6 , 7 , 1 4 r 1 , 2嬰兒沙門氏菌S.I n f a n t i s 6 , 7 , 1 4 r 1 , 5巴布亞沙門氏菌S.P a p u a n a 6 , 7 r e , n , z 1 5巴累利沙門氏菌S.B a r e i l l y 6 , 7 , 1 4 y 1 , 5哈特福德沙門氏菌S. H a r t f o r d 6 , 7 y e , n , M i k a w a s i m a 6 , 7 , 1 4 y e , n , z 1 5姆班達(dá)卡沙門氏菌S. M b a n d a k a 6 , 7 , 1 4 z 1 0 e , n , z 1 5田納西沙門氏菌S. T e n n e s s e e 6 , 7 , 1 4 z 2 9 1 , 2 , 7 布倫登盧普沙門氏菌S.B r a e n d e r u p 6 , 7 , 1 4 e , h e , n , z 1 5耶路撒冷沙門氏菌S.J e r u s a l e m 6 , 7 , 1 4 z 1 0 l , 0161 8 )菌名拉丁菌名 群習(xí)志野沙門氏菌S. N a r a s h i n o 6 .8 a e , n , N a g o y a 6 , 8 b 1 , 5加瓦尼沙門氏菌S. G a t u n i 6 , 8 b e , n , M u e n c h e n 6 , 8 d 1 , 2曼哈頓沙門氏菌S. M a n h a t t a n 6 , 8 d 1 , 5紐波特沙門氏菌S. N e w p o r t 6 , 8 , 2 0 e , h 1 , 2科特布斯沙門氏菌S. K o t t b u s 6 , 8 e , h 1 , 5茨昂威沙門氏菌S.T s h i o n g w e 6 , 8 e , h e , n , z 1 5林登堡沙門氏菌S.L i n d e n b u r g 6 , 8 i 1 , 2塔科拉迪沙門氏菌S. T a k o r a d i 6 , 8 i 1 , 5波那雷恩沙門氏菌S.B o n a r i e n s i s 6 , 8 i e , n , i t c h f i e l d 6 , 8 l , v 1 , 2病牛沙門氏菌S.B o v i s m o r b i f i c a n s 6 , 8 , 2 0 r , i 1 , 5查理沙門氏菌S.C h a i l e y 6 , 8 z 4 , z 2 3 e , n , z 1 5C 3 群巴爾多沙門氏菌S.B a r d o 8 e , h 1 , 2依麥克沙門氏菌S.E m e k 8 , 2 0 g , m , s 肯塔基沙門氏菌S. K e n t u c k y 8 , 2 0 i z 6D 群仙臺沙門氏菌S.S e n d a i 1 , 9 , 1 2 a 1 , 5傷寒沙門氏菌S. T y p h i 9 , 1 2 , V i d 塔西沙門氏菌S. T a r s h y n e 9 , 1 2 d 1 , 6伊斯特本沙門氏菌S.E a s t b o u r n e 1 , 9 , 1 2 e , h 1 , 5以色列沙門氏菌S.I s r a e l 9 , 1 2 e , h e , n , z 1 5腸炎沙門氏菌S.E n t e r i t i d i s 1 , 9 , 1 2 g , m 1 , 7 布利丹沙門氏菌S.B l e g d a m 9 , 1 2 g , m , q 沙門氏菌Sa l m o n e l l a 1 , 9 , 1 2 g , m , s , t 1 , 5 , 7 都柏林沙門氏菌S.D u b l i n 1 , 9 , 1 2 , V i g , p 芙蓉沙門氏菌S.S e r e m b a n 9 , 1 2 i 1 , 5巴拿馬沙門氏菌S.P a n a m a 1 , 9 , 1 2 l , v 1 , 5戈丁根沙門氏菌S. G o e t t i n g e n 9 , 1 2 l , v e , n , z 1 5爪哇安納沙門氏菌S.J a v i a n a 1 , 9 , 1 2 L , z 2 8 1 , 0161 9 )菌名拉丁菌名G a l l i n a r u m - P u l l o r u m 1 , 9 , 1 2 E 1 群奧凱福科沙門氏菌S. O k e f o k o 3 , 1 0 c z 6瓦伊勒沙門氏菌S. V e j l e 3 , 1 0 , 1 5 e , h 1 , 2明斯特沙門氏菌S. M u e n s t e r 3 , 1 0 1 5 1 5 , 3 4 e , h 1 , 5鴨沙門氏菌S. A n a t u m 3 , 1 0 1 5 1 5 , 3 4 e , h 1 , 6紐蘭沙門氏菌S. N e w l a n d s 3 , 1 0 , 1 5 , 3 4 e , h e , n , M e l e a g r i d i s 3 , 1 0 1 5 1 5 , 3 4 e , h l , e g e n t 3 , 1 0 f , g , s 1 , 6 西翰普頓沙門氏菌S. W e s t h a m p t o n 3 , 1 0 1 5 1 5 , 3 4 g , s , t 阿姆德爾尼斯沙門氏菌S. A m o u n d e r n e s s 3 , 1 0 i 1 , 5新羅歇爾沙門氏菌S. N e w - R o c h e l l e 3 , 1 0 k l , N c h a n g a 3 , 1 0 1 5 l , v 1 , 2新斯托夫沙門氏菌S.S i n s t o r f 3 , 1 0 l , v 1 , 5倫敦沙門氏菌S.L o n d o n 3 , 1 0 1 5 l , v 1 , 6吉韋沙門氏菌S. G i v e 3 , 1 0 1 5 1 5 , 3 4 l , v