1、.蛋白質(zhì)濃度測定考馬斯亮藍染色法（實驗報告）實驗日期： 2015 年 4 月 28 日實驗溫度：室溫實驗地點：生物化學與遺傳學實驗室指導老師： *班級： 2013 級生物技術(shù)1 班姓名： *學號： *I. 實驗目的1.學習考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法；2.熟悉蛋白質(zhì)含量測定的影響因素。II. 實驗原理考馬斯亮藍是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設計的，這是一種迅速、可靠的通過染色法測定溶液中蛋白質(zhì)濃度的方法?？捡R斯亮藍G-250 在酸性游離狀態(tài)下呈棕紅色，最大吸收波長 465nm，與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{色，最大吸收波長595nm，在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比。蛋白質(zhì)與考

2、馬斯亮藍G-250 結(jié)合，反應2min 即可到達平衡，復合物在室溫下1h 內(nèi)保持穩(wěn)定。蛋白質(zhì)考馬斯亮藍 G-250 復合物吸光系數(shù)，使得在測定蛋白質(zhì)濃度時靈敏度很高，可測微克級蛋白質(zhì)含量。III. 實驗試劑與儀器1.實驗試劑-1-/4.(1) 100g/mL標準蛋白質(zhì)溶液5mg 酪蛋白溶于50mL的 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液 。(2)考馬斯亮藍G-250 試劑50mg 考馬斯亮藍G-250 溶于 25mL 的 95%乙醇中，加 85%的磷酸 50mL ，蒸餾水定容至 500mL 。(3)正常人血漿。2.實驗器材可見分光光度計，100L微量移液器16 支， 5mL 刻度吸管 8 支，中試管

3、。IV . 實驗操作步驟mL012345樣品1 樣品2標準蛋白質(zhì)溶液00.20.40.60.81.0-血漿00.80.60.40.200.40.40.1mol/LNaOH-0.60.6考馬斯亮藍試劑各 5.01.繪制標準曲線取中試管8 支，按下表加入各種試劑混勻，室溫放置 5min 后即可比色。 以“ 0”號管為空白，記錄于下表，繪制標準曲線。標準曲線繪制數(shù)據(jù)表012345樣 1樣 2標準蛋白 g 數(shù)020406080100-2-/4.A 59500.5170.8050.9411.1571.1921.4651.4402.樣品測定中試管 2 支分別加未知濃度蛋白質(zhì)（或人正常血漿） 0.4mL ，各加 5.0mL 考馬斯亮藍試劑搖勻，室溫放置 5min ，以“ 0”號管為空白比色，以所測A 595 于標準曲線查蛋白質(zhì)含量。V. 實驗結(jié)果分析結(jié)果分析： 實驗未能達到預期的一條直線，原因可能為：血漿樣本放置時間太久，蛋白質(zhì)變性；實驗比色杯由于使用后未及時擦洗，導致比色誤差（原因?。?；人為操作不當，導致誤差。VI.注意事項1. 考馬斯亮藍試劑加入后室溫放置5 20min