1、DNS法測(cè)還原糖含量法測(cè)還原糖含量 3,5-二硝基水楊酸法 目目的的 ?掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理，學(xué)習(xí)用比色法測(cè)定還原糖的方法 原理原理 ? ? 1.還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖。 ? 2.在NaOH和丙三醇存在下， DNS與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物，在過(guò)量的堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與桔紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在550nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。 ? 3.由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子

2、水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以 0.9。 ? 反應(yīng)化學(xué)方程式反應(yīng)化學(xué)方程式 桔紅色 黃色 實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑 ? 1、試劑 （1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖 100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至 100mL （2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑 將6.3g DNS和262mL 2Mol/L NaOH 溶液，加到500mL含有185g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至 1000mL，貯于棕色瓶中備用。 （3）碘-碘化鉀溶液 （4）6mol/l NaOH （5）0.1%酚酞指示劑 （6）6mol/l HC

3、l溶液 2、材料 淀粉 3、器材 分光光度計(jì)，天平，水浴鍋，電子萬(wàn)用爐，試管若干 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 ?一、制作葡萄糖標(biāo)曲線一、制作葡萄糖標(biāo)曲線 ? 取10支試管，按下表加入試劑 試劑 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/ml 0 0.2 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 1.0 1.2 1.4 蒸餾水/ml 2.0 1.8 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.0 0.8 0.6 DNS/ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 葡萄糖含量/mg 0 0.2 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 1.0 1.2 1.4

4、 混合均勻 沸水中加熱5min取出 冷水冷卻至室溫 各管加入21.5ml蒸餾水測(cè)定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 （550nm波長(zhǎng)處） ?二、樣品中還原糖提取二、樣品中還原糖提取 準(zhǔn)確稱取0.65g面粉， 放在100ml燒杯中，先 以少量蒸餾水調(diào)成 糊狀，然后加入15ml 蒸餾水，混勻，于50恒溫保溫20min，時(shí)攪拌，使還原糖浸出，過(guò)濾，將濾液全部收集在25ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。 錐形瓶（0.5g面粉+10ml鹽酸+蒸餾水15ml）加熱30min 檢驗(yàn)水解是否完成（I-KI溶液） 冷卻至室溫后 中和并定容到50ml 過(guò)濾取10ml于 100ml容量瓶 取濾液又定容至刻度 （即為稀釋50倍） 三.總糖提取 ?四、樣品中含糖量的測(cè)定四、樣品中含糖量的測(cè)定 試劑 空白 還原糖 總糖 樣品溶液/ml 0 1.0 1.0 蒸餾水/ml 2.0 1.0 1.0 水楊酸/ml 1.5 1.5 1.5 將各管溶液混合均勻后在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻至室溫，在向各管加入21.5ml蒸餾水，搖勻 在波長(zhǎng)為550nm處測(cè)定吸光度，并比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出糖的含量 結(jié)果處理結(jié)果處理 ?按下列公式計(jì)算樣品中還原糖與總糖的百分含量： ? 還原糖%=(m*100)/(M*1000) ? 總糖%=（m*稀釋倍