1、玉屏風(fēng)湯劑不同配伍對(duì)黃芪甲苷含量的影響                         作者：尹雪 黃月純 張素中 魏剛【摘要】  目的建立玉屏風(fēng)湯劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法，探討不同配伍對(duì)玉屏風(fēng)湯劑中黃芪甲苷含量的影響。方法采用高效液相色譜?艙舴饃浼觳餛鰨?HPLC-ELSD）法測(cè)定。采用Phenomen色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（3268）；流速

2、1 ml/min；柱溫35；ELSD漂移溫度103，載氣（氮?dú)猓┝髁?.5 L/min。 結(jié)果黃芪單煎相比，不同配伍的合煎對(duì)黃芪甲苷的含量均呈現(xiàn)不同程度的下降趨勢(shì)。結(jié)論玉屏風(fēng)不同配伍湯劑中黃芪甲苷的含量在煎煮過程中存在動(dòng)態(tài)變化，為玉屏風(fēng)湯劑的配伍規(guī)律及物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供了一定的參考。論文論文參考網(wǎng) 【關(guān)鍵詞】  玉屏風(fēng)湯劑 配伍 黃芪甲苷 高效液相色譜法玉屏風(fēng)源于元代丹溪心法，由黃芪、白術(shù)（炒）、防風(fēng)3味藥組成，功能益氣固表，止汗，用于表虛不固，自汗惡風(fēng)，面色白，或體虛易感風(fēng)邪者。黃芪主要含異黃酮、皂苷、氨基酸及多糖類等有效成分；防風(fēng)主要含色原酮、揮發(fā)油、氨基酸及多糖類等有效成分；白

3、術(shù)主要含內(nèi)酯類、揮發(fā)油及多糖類等有效成分。對(duì)玉屏風(fēng)方中藥味的主要成分含量與指紋圖譜研究已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道14，但玉屏風(fēng)湯劑的化學(xué)成分研究報(bào)道較少。為探討玉屏風(fēng)湯劑的配伍規(guī)律及物質(zhì)基礎(chǔ)，本項(xiàng)目采用HPLC指紋圖譜與主成分含量測(cè)定相結(jié)合的方法進(jìn)行研究。本文報(bào)道不同配伍對(duì)黃芪甲苷含量的影響。1   儀器與試藥    高效液相色譜儀（日本島津LC?10A）；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）；黃芪甲苷對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；3批黃芪、防風(fēng)、白術(shù)（炒）飲片，分別購(gòu)于廣東多家藥材公司，黃芪為豆科蒙古黃芪Astragalus membranaceus(F

4、isch.)Bge. var mongholicus(Bge.)Hsiao的根，防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.的根，白術(shù)為傘形科植物白術(shù)Atractylodes macrocephala Koidz.的根的麩炒品；乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。2  方法與結(jié)果2.1  色譜條件5，6色譜柱為Phenomen（250 nm×4.6 nm，5 m）；流動(dòng)相為乙腈-水（3268）；流速1 ml/min；柱溫35；ELSD漂移溫度103，載氣（氮?dú)猓┝髁?.5 L/min。結(jié)果表明在此條件下此成分能

5、達(dá)到較好的分離效果，理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4 000，缺黃芪陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見圖13。圖1  黃芪甲苷對(duì)照品HPLC圖（略）圖2  玉屏風(fēng)湯劑HPLC圖（略）圖3  缺黃芪甲陰性對(duì)照HPLC圖（略） 2.2  對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇溶解配制成每毫升含0.5 mg的對(duì)照品溶液。2.3  不同配伍湯劑的制備 按中國(guó)藥典的處方配比黃芪18 g，防風(fēng)6 g，白術(shù)（炒）6 g，取黃芪飲片45 g，防風(fēng)飲片15 g，白術(shù)（炒）飲片15 g，加水500 ml，浸泡30 min，加熱煮沸后文火慢煎40 mi

6、n，取出，趁熱用四層紗布濾過，藥渣再加水300 ml加熱煮沸后文火慢煎30 min，取出，趁熱濾過，合并2次煎液，放冷，置500 ml量瓶中，加水至刻度，得全方湯劑。分別取黃芪、黃芪加白術(shù)、黃芪加防風(fēng)等不同配伍藥材飲片，同法制得各配伍湯劑。2.4  供試品溶液的制備5 精密吸取各配伍湯液50   ml，分別用水飽和正丁醇提取5次，30 ml/次，合并正丁醇液；用氨試液洗滌3次，20 ml/次，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓⒍ㄈ葜? ml，即得不同配伍湯劑供試品溶液。2.5  線性關(guān)系考察  取黃芪甲苷對(duì)照品，精密稱定，用甲醇溶解并配制成每毫

7、升含1.01 mg的對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液1，2，5，10，20 l，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（g）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以峰面積（A）的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，求得線性回歸方程為Y=5.000 6+1.564 1X，線性范圍為1.0120.2 g，r=0.999 9。論文參考網(wǎng)2.6  精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液10 l，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果黃芪甲苷峰面積的RSD為1.85%，表示儀器精密度良好。 2.7  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一玉屏風(fēng)湯劑供試品溶液各20l，分別在0，2，4，8，16，24 h進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果黃芪甲

8、苷峰面積的RSD為0.94%，表明在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。2.8   重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批玉屏風(fēng)飲片5份，按湯劑的制備及其供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定，結(jié)果玉屏風(fēng)湯劑中黃芪甲苷含量的RSD為8.52%，表明湯劑煎煮的重復(fù)性好。2.9   加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取5份已知含量的玉屏風(fēng)湯劑25   ml，精密加入一定量的黃芪甲苷對(duì)照品溶液，按湯劑供試品溶液的制備及樣品的測(cè)定同法操作。結(jié)果見表1。表1   玉屏風(fēng)湯劑回收率測(cè)定結(jié)果（略）2.10   樣品的測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液10 l，20 l及各配伍

9、供試品溶液20 l，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算各供試品溶液的含量。3批不同配伍湯劑中黃芪甲苷的含量見表2。以黃芪單煎的含量為100%計(jì)，計(jì)算不同配伍湯劑的含量變化率。結(jié)果見表2。表2   不同配伍玉屏風(fēng)湯劑中黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果及變化率（略）3  討論    黃芪甲苷的紫外吸收在近末端處，受試劑影響很大，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，能克服黃芪甲苷在紫外檢測(cè)器上易受干擾的缺陷。本研究參照中國(guó)藥典5及文獻(xiàn)6中“玉屏風(fēng)口服液”的供試品溶液制備方法及色譜條件測(cè)定玉屏風(fēng)湯劑中黃芪甲苷的含量，結(jié)果峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適中，空白

10、樣品無(wú)干擾。     3批不同配伍湯劑中黃芪甲苷含量結(jié)果表明，與黃芪單煎相比，黃芪配伍防風(fēng)、黃芪配伍白術(shù)、黃芪配伍白術(shù)與防風(fēng)，黃芪甲苷的含量均呈不同程度的下降趨勢(shì)。結(jié)果提示玉屏風(fēng)不同配伍湯劑中黃芪甲苷的含量在煎煮過程中存在動(dòng)態(tài)變化，為玉屏風(fēng)湯劑的配伍規(guī)律及物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了一定的參考。不同配伍對(duì)毛蕊異黃酮苷、升麻素苷、5?O?布諄?維斯阿米醇苷的影響另文發(fā)表。     由于湯劑重復(fù)性相對(duì)較差，因此，每批湯劑至少應(yīng)煎煮3份，以減少誤差。通過測(cè)定3批不同配伍的含量，表明不同批次間的配伍結(jié)果有一定的差異，提示測(cè)定3批結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)配伍規(guī)律更為合理?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 王曉輝，劉 濤，李 清，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃芪中的五種異黃酮類成分J.色譜，2006，24（5）:486.2 胡芳弟，趙建雄，封士蘭，等.黃芪的高效液相指紋圖譜及主成分含量測(cè)定J.中藥材，2004，27（11）:831.3 姜艷艷，劉 斌，石任兵.高效液相色譜法測(cè)定防風(fēng)色原酮部位中4種成分含量J.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，29（2）:128.4 于永明，宋長(zhǎng)義，賈天柱.白