1、微生物分類鑒定方法微生物分類鑒定方法u從不同層次（細胞的、分子的），用不同學科（化學、物理學、遺傳學、免疫學、分子生物等）的技術方法來研究和比較不同微生物的細胞、細胞組分或代謝產(chǎn)物，從中發(fā)現(xiàn)的反映微生物類群特征的資料。u在微生物分類中，任何能穩(wěn)定地反映微生物種類特征的資料，都有分類學意義，都可以作為分類鑒定的依據(jù)。微生物分類鑒定方法微生物的純化鑒定指標的測取權威菌種鑒定手冊的查找鑒定指標的測取經(jīng)典分類鑒定法經(jīng)典分類鑒定法現(xiàn)代分類鑒定法現(xiàn)代分類鑒定法流程經(jīng)典微生物鑒定方法微生物分類學發(fā)展早期，主要的分類、鑒定指標尚局限于利用常規(guī)方法鑒定微生物的形態(tài)、構造和習性等表型特征水平上，即經(jīng)典分類鑒定方法

2、。定義經(jīng)典微生物鑒定方法鑒定指標權威菌種鑒定手冊細菌細菌：伯杰氏鑒定細菌學手冊（第八版1974、第九版1994）、伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊（第一版）19841989，2000年分五卷出版。放線菌放線菌：中國科學院微生物研究所編著的放線菌目分科、分屬檢索表真菌：真菌：Smith、 Alexopoulos (阿歷克索鮑羅斯 ） 、 Ainsworth（安斯沃思）的分類系統(tǒng)細菌自動鑒定系統(tǒng) API細菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)“Enterotube”系統(tǒng)“Biolog”全自動和手動細菌鑒定系統(tǒng) API細菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)流程微生物分類鑒定中的現(xiàn)代方法核酸分析鑒定微生物的遺傳型細胞化學成分用作鑒定指標（略）數(shù)值分類法（略）

3、核酸分析鑒定微生物的遺傳型DNA是除少數(shù)RNA病毒以外的一切微生物的遺傳信息載體遺傳信息載體。每一種微生物均有其自己特有的、穩(wěn)定的DNA即基因組的成分和結構，不同種不同種微生物間基因組序列的差異程度代表著它們之間親緣關系的遠近、疏密。微生物間基因組序列的差異程度代表著它們之間親緣關系的遠近、疏密。因此可以用基因組的一些指標作為鑒定微生物類別的依據(jù)。微生物分類鑒定中的現(xiàn)代方法DNA堿基比例測定核酸分子雜交法rRNA寡聚核苷酸編目DNA堿基比例DNA堿基比例 每個生物種都有特定的GC%范圍，因此 可以作為分類鑒定的指標。細菌的GC%范圍為25-75%，變化范圍最大，因此更適合于細菌的分類鑒定。DN

4、A堿基比例 GC%測定主要用于對表型特征難區(qū)分的細菌作測定主要用于對表型特征難區(qū)分的細菌作出鑒定，并可檢驗表型特征分類的合理性出鑒定，并可檢驗表型特征分類的合理性，從，從分子分子水平上判斷物種的親緣關系。水平上判斷物種的親緣關系。 但具有相似但具有相似G+C含量的生物并不一定含量的生物并不一定表明它表明它們們之間具有近的親緣關系。之間具有近的親緣關系。核酸分子雜交按堿基互補配對的原理，用人工方法對兩條不同來源的單鏈核酸進行復性，以構建新的雜合雙鏈核酸的技術，成為核酸雜交。包括DNA-RNA、DNA-rRNA、rRNA-rRNA分子間的雜交。定義核酸分子雜交根據(jù)雙鏈DNA（dsDNA）分子解鏈的

5、可逆性和堿基配對的轉(zhuǎn)移性，將不同來源的待測DNA在體外分別加熱使其解鏈成單鏈DNA（ssDNA）,然后在合適條件下再混合，使其復性并形成雜合的dsDNA，最后再測定其間的雜交百分率。核酸分子雜交rRNA寡核苷酸數(shù)目20世紀70年代末由于美國伊利諾斯大學的C.R.Woese等人對大量微生物和其他生物進行16s和18srRNA的寡核苷酸測序，并比較其同源性水平后，提出了一個與以往各種界級分類不同的新系統(tǒng)，稱為三域?qū)W說，域是一個比界更高的界級分類單元，過去曾稱原界。三個域指的是細菌域(以前稱真細菌域)、古生菌域(以前稱古細菌域)和真核生物域。rRNA寡核苷酸數(shù)目一種通過分析原核或真核細胞種最穩(wěn)定的r

6、RNA寡核苷酸序列同源性程度，以確定不同生物之間的親緣關系和進化譜系的方法。定義rRNA寡核苷酸數(shù)目u它們普遍存在于一切細胞內(nèi)，不論是原核生物和真核生物，因此可比較他們在進化中的相互關系u他們的生理功能既重要又恒定 u在細胞中的含量較高 輕易提取 u 編碼rRNA的基因十分穩(wěn)定 urRNA的某些核苷酸序列非常保守 u相對分子質(zhì)量適中優(yōu)勢rRNA寡核苷酸數(shù)目細菌16S rRNA基因約含有1540個核苷酸，分可變區(qū)和保守區(qū)，不同微生物可變區(qū)核苷酸序列不同，從而可以利用這些特異性序列進行微生物的鑒定； rRNA寡核苷酸數(shù)目rRNA寡核苷酸數(shù)目采用RNase T1酶可以將16S rRNA酶解在G位點上切割，得到620個堿基大小的序列對這些620堿基片段進行分離、測序比較不同微生物之間SAB（Dice型相關系數(shù)）的相似性。 測定方法：rRNA寡核苷酸數(shù)目SAB =2NAB /（NA +NB ）NAB代表兩