1、化合物黃酮提取以及檢測(cè)方法的研究黃酮類(lèi)化合物是廣泛存在于自然界的一大類(lèi)化合物, 在銀杏葉、山楂、杜仲、山香圓葉、水芹、竹葉、黃芪、丹參等植物中均有檢出。到目前為止, 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有5000 多種植物中含有黃酮類(lèi)和異黃酮類(lèi)化合物1。黃酮類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是具有C6- C3- C6 的基本骨架,根據(jù)中間三碳鏈的氧化程度、B 環(huán)( 苯基) 連接位置( 2-或3- 位) 以及三碳鏈?zhǔn)欠癯虱h(huán)狀等特點(diǎn), 分為許多不同類(lèi)型: 包括黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇、異黃酮、二氫異黃酮、查爾酮等化合物2?，F(xiàn)代研究證明黃酮類(lèi)化合物是重要的抗氧化劑, 其生理作用是多種多樣的, 例如蘆丁、槲皮素等能夠增強(qiáng)心臟收縮; 杜

2、鵑素具有止咳祛痰作用; 黃芩苷具有抗菌消炎、抑制腫瘤細(xì)胞作用; 水飛薊素具有保肝作用等3; 此外, 黃酮類(lèi)化合物還有降血脂、止血、抑制血小板聚集等多種藥理作用。正是其上述生物活性引起了人們的廣泛重視, 對(duì)該類(lèi)化合物的研究已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界研究的熱門(mén)課題, 是一類(lèi)具有廣泛開(kāi)發(fā)前景的天然藥物4。黃酮類(lèi)化合物在人體不能直接合成, 只能從食品中獲得。主要是作為食品添加劑或直接應(yīng)用于食品中增加其保健作用。例如茶多酚在功能食品中的應(yīng)用主要是以茶葉及其提取物的形式添加到食品中。茶多酚具有抗疲勞、抗輻射、抗衰老等功能特性, 茶葉具有獨(dú)特的色、香、味、形, 能使食品增香、調(diào)味、著色, 因此茶多酚以茶葉的形式在食

3、品中的應(yīng)用十分廣泛。近年來(lái)科學(xué)家都積極關(guān)注從植物體中提取純度高、活性強(qiáng)的天然黃酮成分, 并進(jìn)一步將其加工成有特異功能的保健食品和藥品等產(chǎn)品。1 黃酮類(lèi)化合物的提取方法1.1 有機(jī)溶劑提取法甲醇和乙醇是最常用的黃酮類(lèi)化合物提取溶劑,高濃度的醇( 如90 %左右) 適宜于提取苷元, 60 %左右濃度的乙醇或甲醇水溶液適宜于提取苷類(lèi)。田呈瑞5采用索氏提取法, 利用乙醇提取銀杏葉黃酮, 通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn), 確定乙醇提取銀杏葉總黃酮的最佳條件為: 銀杏葉粉碎至50 目60 目, 以70 %乙醇按照液固比61 的比例, 于80 條件下提取2 次, 每次1 h,銀杏葉總黃酮提取率可達(dá)87.6 %。此

4、外, 歐美國(guó)家采用的主要溶劑法工藝有: 醇(酮)浸提- 鹵代烴萃取- 酮/銨鹽萃取法、酮浸提- 氨水沉淀- 混合酮萃取法、酮浸提-綜述154食品研究與開(kāi)發(fā)2008 年1 月第29 卷第1 期鹵代烴萃取- 鉛化物沉淀法和醇(酮)浸提- 甲苯/丁醇萃取樹(shù)脂法6。該工藝采用中等溫度50 60 浸泡, 雜質(zhì)較少, 經(jīng)濃縮、水析可除去烷基酚等脂溶性物質(zhì), 用CCl4 等非極性溶劑萃取除去蠟質(zhì)、葉綠素等脂溶性雜質(zhì); 調(diào)節(jié)pH89 或Pb( OH) 2 沉降, 可除去原花青素、蛋白質(zhì)、高分子單寧等雜質(zhì), 加入( NH4) 2SO4 等鹽, 增加相密度, 有利于C4- C6 酮和醇萃取有效成分和減少乳化現(xiàn)象,

5、 改善分層, 提高有效成分的萃取率7。1.2 微波提取法微波加熱是透入內(nèi)部的能量被物料吸收置換成熱能對(duì)物料的加熱, 形成獨(dú)特的物料受熱方式, 具有均勻性的特點(diǎn), 同時(shí)具有反應(yīng)高效性和強(qiáng)選擇性等特點(diǎn), 而且操作簡(jiǎn)便, 副產(chǎn)物少, 提取率高及產(chǎn)物純度高等優(yōu)點(diǎn)。本法多用在藥材的浸出, 在黃酮類(lèi)化合物的提取上取得了良好的效果。段蕊8等人對(duì)微波法提取銀杏葉中黃酮類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行研究, 用175 W 微波強(qiáng)度處理5 min后, 以體積分?jǐn)?shù)80 %的乙醇, 在70 提取1 h, 得到提取物的黃酮類(lèi)物質(zhì)質(zhì)量濃度比未經(jīng)微波處理的高出18.8 %。此外李嶸與金美芳9在以水為介質(zhì)的條件下,對(duì)銀杏葉進(jìn)行微波處理, 提取效果

6、與傳統(tǒng)方法對(duì)照, 表明此方法提取率高, 省溶劑, 大大提高了提取效率。實(shí)驗(yàn)方法是稱(chēng)取100 g 銀杏葉絲, 加160 mL 蒸餾水, 微波解凍處理5 min 及15 min, 提取液以440 mL60 %乙醇,55 回流提取。結(jié)果表明, 微波處理后進(jìn)行乙醇水浸提比同樣方法未用微波處理可以提高銀杏葉中有效成分的提取率達(dá)22.6%, 而且大大縮短了提取所需時(shí)間。1.3 超臨界萃取法超臨界流體萃取是利用超臨界流體在臨界壓力和臨界溫度附近具有的特殊性能作為溶劑進(jìn)行萃取的一門(mén)科學(xué), 最常用的超臨界流體為CO2。應(yīng)用CO2- SPE 技術(shù)提取分離黃酮類(lèi)物質(zhì), 具有萃取速度快, 效率高, 操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn),

7、產(chǎn)品中沒(méi)有殘留有機(jī)溶劑, 與傳統(tǒng)的萃取分離工藝相比優(yōu)勢(shì)是明顯的。此外, 超臨界CO2 萃取較易與其它先進(jìn)技術(shù)聯(lián)用, 成為新型而有效的分離分析技術(shù)。孫婷10利用超臨界CO2 萃取法從銀杏葉中提取黃酮類(lèi)化合物, 確定了超臨界流體萃取的最佳條件: 壓力為20MPa, 萃取罐的溫度為40 , 流量為14 mL/min,萃取時(shí)間為2 h, 在此條件下測(cè)得總黃酮的含量為29.1 %, RSD 為3.1%。張玉祥11通過(guò)正交試臉, 確定最優(yōu)化的提取工藝是: 20 MPa 的壓力下, 夾帶劑15 %,50 萃取40 min, 含量測(cè)定顯示, CO2 超臨界流體萃取法能有效萃取銀杏葉中的總黃酮和總內(nèi)酯, 含量高

8、于歐洲( EGb761) 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。游海等人12在提取銀杏葉中的黃酮類(lèi)化合物藥用活性成分的實(shí)驗(yàn)中, 確定了實(shí)驗(yàn)最佳條件: 萃取壓力12 665.6 kPa, 萃取溫度為45 ,萃取時(shí)間為30 min45 min, 分離壓力為6 586.1 kPa, 其中黃酮含量達(dá)28%以上。1.4 酶浸漬萃取法最近幾年, 隨著酶技術(shù)的快速發(fā)展, 科學(xué)工作者充分利用了酶的特性發(fā)展了新的提取方法。酶浸漬法是指在黃酮提取過(guò)程中, 通過(guò)加入恰當(dāng)?shù)拿赴l(fā)生轉(zhuǎn)糖反應(yīng)和酶解反應(yīng)而使產(chǎn)品黃酮得率和含量大大提高的新興技術(shù)。傳統(tǒng)的水提取只能提取水溶性黃酮, 致使類(lèi)黃酮得率和含量過(guò)低; 此時(shí)如選用恰當(dāng)?shù)拿讣尤? 不僅可以將油溶性的

9、類(lèi)黃酮轉(zhuǎn)化為易溶于水的糖苷類(lèi)而利于提取, 而且還可通過(guò)酶反應(yīng)將植物組織分解, 使提取傳質(zhì)阻力減小; 另外也可使提取液中的雜質(zhì)分解去除, 從而簡(jiǎn)化后續(xù)分離純化工序。并且其提取條件溫和, 有利于黃酮類(lèi)活性保護(hù), 且成本低、安全4。1.5 超聲波輔助提取法用超聲波法提取黃酮類(lèi)物質(zhì), 是目前比較新的方法。其原理主要是利用超聲波在液體中的空化作用加速植物有效成份的浸出提取。另外,還利用其次效應(yīng),如機(jī)械振動(dòng), 擴(kuò)散, 擊碎等, 使其加速被提取成份的擴(kuò)散, 釋放。超聲波提取法大大縮短了提取時(shí)間, 提高了有效成分的提取率、原料的利用率。吳傳茂13等用超聲波振蕩法提取大豆和豆豉中的大豆異黃酮苷元, 其提取方法最

10、佳方案是: 樣品中加入100 %乙醇300 mL, 超聲振蕩30 min, 通過(guò)檢測(cè)得出大豆中大豆黃素的含量為106.5 g/g, 染料木黃酮的含量為155.1 g/g; 豆豉中大豆黃素的含量為312.8 g/g, 染料木黃酮的含量為555.6 g/g。王延峰14等人研究了銀杏葉黃酮的超聲提取法, 并與連續(xù)熱回流中的索氏提取作了比較研究, 最佳操作條作為超聲波頻率40 kHz, 處理時(shí)間10 min,靜置時(shí)間12 h, 結(jié)果表明超聲波法優(yōu)于索式提取法。2 黃酮類(lèi)物質(zhì)的測(cè)定方法2.1 分光光度法黃酮類(lèi)化合物多采用硝酸鋁比色法測(cè)定。其基本原理是以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品, Al( NO3) 3 絡(luò)合體系顯色,

11、 全波段掃描在510 nm 處有最大吸收峰, 測(cè)定其吸光度, 以此來(lái)計(jì)算含量。羅憲堂15等人利用該法測(cè)定了山香圓葉中的黃酮類(lèi)成分的含量, 但硝酸鋁比色法專(zhuān)一性較差, 測(cè)定受處理過(guò)程顏色變化的影響。研究人員對(duì)此法進(jìn)行了多項(xiàng)改進(jìn)以提高其準(zhǔn)確度。尉芹16等人在測(cè)定杜仲總黃酮的實(shí)驗(yàn)中認(rèn)為綠原酸是主要干擾因素, 他們采用紙層析法將樣品中的黃酮與綠原酸分離后, 再進(jìn)行測(cè)定, 從而提高了測(cè)定的準(zhǔn)確度。劉佳佳17等用硼綜述1552008 年1 月食品研究與開(kāi)發(fā)第29 卷第1 期酸- 檸檬酸比色法測(cè)定了銀杏葉黃酮的含量。徐燕18以黃芩苷為對(duì)照品, 采用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定黃芩總黃酮含量。另外, 周榮琪19將過(guò)濾

12、法應(yīng)用于竹葉黃酮測(cè)定中, 并對(duì)濾紙對(duì)于黃酮類(lèi)物質(zhì)的吸附進(jìn)行了校對(duì), 發(fā)現(xiàn)濾紙對(duì)黃酮類(lèi)物質(zhì)吸附甚微, 此方法應(yīng)用于竹葉黃酮體系大大提高了測(cè)定穩(wěn)定性, 且準(zhǔn)確度較高, 重現(xiàn)性良好。2.2 紙色譜法紙色譜用于黃酮類(lèi)分析選擇性和重現(xiàn)性較差, 一般作為定性檢測(cè)。余戟20采用高于臨界膠束濃度( CMC)的十二烷基硫酸鈉( SDS) , 溴化十二烷基甲基卞胺水溶液作展開(kāi)劑, 通過(guò)紙色譜法分離和檢測(cè)桑色素、楊梅黃素等8 種黃酮苷和苷元, 發(fā)現(xiàn)了適宜于分離其黃酮苷類(lèi)的展開(kāi)體系。2.3 薄層色譜法( TLC)薄層色譜又叫薄板層析, 是色譜法中的一種, 是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù), 屬固-

13、液吸附色譜, 它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn), 一方面適用于少量樣品( 1 g, 甚至0.01 g) 的分離; 另一方面在制作薄層板時(shí), 把吸附層加厚加大, 因此, 又可用來(lái)精制樣品。此法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、分離速度快等特點(diǎn), 但離線操作使分辯率和重現(xiàn)性等不如高效液相色譜法和氣相色譜法, 常被作為定性和半定量的手段。固定相一次性使用, 樣品無(wú)需復(fù)雜處理, 分離物的性質(zhì)不受限制, 應(yīng)用廣泛; 可同時(shí)平行分離多個(gè)樣品, 測(cè)試速度快, 所需溶劑量少, 選擇范圍寬,并有不同展開(kāi)方式, 有利于不同性質(zhì)的物質(zhì)分離; 此方法可以在同一色譜板上可根據(jù)組分性質(zhì)選擇不同顯色劑或檢測(cè)方法進(jìn)行定性或定量; 薄層色譜

14、圖像可提供原始彩色圖像, 不僅便于保存原始圖像, 而且可以提供較多信息, 直觀性、可比性均較好都是此法的獨(dú)特之處4。2.4 極譜法極譜分析是在特殊條件下進(jìn)行電解分析, 其特殊性在于采用了一個(gè)面積很大的參比電極和一個(gè)面積很小的滴汞電極進(jìn)行電解。孫仕萍21等為了測(cè)定保健食品中的黃酮含量, 探討用單掃示波極譜法測(cè)定總黃酮含量的快速方法, 以蘆丁為對(duì)照品, 建立了良好的直線關(guān)系。2.5 氣相色譜法氣相色譜法( GC) 具有進(jìn)樣量少、高靈敏度、高選擇性、高特異性等優(yōu)點(diǎn); 但需樣品需要衍生, 步驟較為復(fù)雜, 耗時(shí)長(zhǎng), 且儀器較為昂貴, 從而限制該法推廣應(yīng)用。Liggins 等22采用毛細(xì)管- 質(zhì)聯(lián)法測(cè)定8

15、0 余種蔬菜和堅(jiān)果中大豆黃素和染料木素, 其中36 種含有被測(cè)物質(zhì), 而大豆中大豆黃素和染料木素總含量達(dá)2 g/kg。孫艷梅23選取SE- 30 毛細(xì)管柱, 在柱溫為恒溫260 時(shí),利用氣相色譜法, 進(jìn)行了大豆- 葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮糖苷的研究, 確定黃豆苷元含量工作曲線方程為Y=71 519X- 85 913, X 為黃豆苷元的含量( g/L) , 相關(guān)系數(shù)R2=0.993 7。2.6 高效液相色譜法( HPLC)HPLC 分析黃酮類(lèi)化合物, 正相系統(tǒng)一般采用乙烷或異辛烷等體系為流動(dòng)相, 以極性較大的乙醇、丙醇、乙腈等有機(jī)溶劑調(diào)節(jié)。反相體系則一般優(yōu)先選擇甲醇/水及乙腈/水體系為流動(dòng)相,

16、還需要加入酸調(diào)節(jié)pH,抑制解離, 克服拖尾現(xiàn)象。為了提高分離度需要梯度洗脫, 多用C18 柱分離。胡芳弟24以甲醇- 水為流動(dòng)相, 梯度洗脫, 在254 nm 檢測(cè)波長(zhǎng)下測(cè)定黃芪中黃芪甲苷和2 個(gè)黃酮類(lèi)化合物含量。劉斌25建立了苦參湯有效部位中4 種黃酮類(lèi)成分的HPLC 含量測(cè)定方法。此外鄭瑩26等人使用反相高效液相色譜法對(duì)三七葉中的黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行了含量測(cè)定。其方法為: 使用ZORBAX Extend C8 柱( 250 mm4.6 mm, 5 m) , 流動(dòng)相為甲醇-0.15 %乙酸水溶液( 3565) , 流速1.2 mL/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)268 nm, 柱溫25 。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下: 山

17、柰酚- 3- O- BD-半乳糖葡萄糖苷與槲皮素- 3- O- B- D- 半乳糖葡萄糖苷在進(jìn)樣量0.5 g20 g 范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系, 相關(guān)系數(shù)r2 皆為0.999 9。池靜端27等人用反相高效液相色譜法測(cè)定了銀杏葉中6 種黃酮成分即槲皮素、異鼠李素、山萘酚、白果黃素、銀杏黃銀杏黃素、西阿多黃素。色譜柱為ZORBAX ODS 柱, 流動(dòng)相: 甲醇以及THF- H2O- HCOOH( 34651) , 梯度洗脫, 流速:1.0 mL/min, 檢測(cè)波長(zhǎng): 350nm, 線性范圍0.10g2.57g,相關(guān)系數(shù)2= 0.999 40.999 8, 回收率98.0 %102.0 %。2.7

18、液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法液相色譜- 質(zhì)譜( LC-MS) 成為現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室一種確定的分析工具, 是由于它相對(duì)于通常的檢測(cè)方式, 能提供更優(yōu)越的選擇性和更低的檢測(cè)限, 對(duì)混合物的分析有很高的靈敏度和選擇性以及廣泛的適用性, 可大大縮短分析時(shí)間, 減少原料的浪費(fèi)。馬強(qiáng)28等人采用高效液相色譜與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究了紅車(chē)軸草中的異黃酮類(lèi)化合物。實(shí)驗(yàn)采用反相C18 色譜柱, 二元線性梯度洗脫, 分離并檢測(cè)了紅車(chē)軸草中的14 種異黃酮類(lèi)化合物; 通過(guò)與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用獲得了相應(yīng)化合物的分子量信息, 并利用質(zhì)譜的源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離技術(shù)鑒定這些化合物的可能結(jié)構(gòu)。董淮海29等人應(yīng)用高效液相色譜- 電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法,

19、直接對(duì)大豆胚芽的70 %乙醇室溫提取液進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)各色譜峰的質(zhì)譜特征,綜述156食品研究與開(kāi)發(fā)2008 年1 月第29 卷第1 期在室溫提取液中鑒定出9 種異黃酮, 7 種A 組皂苷,4 種B 組皂苷和2 種E 組皂苷。肖貽菘30等人使用液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)苦竹葉中的黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行了分析。結(jié)果證明對(duì)于復(fù)雜天然產(chǎn)物的定性定量分析, 高效液相色譜- 電噴霧質(zhì)譜( HPLC/ESI-MS)聯(lián)用分析法是一種方便快捷有效的方法。2.8 毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳以高效、快速、進(jìn)樣量少、重現(xiàn)性好、不易污染等優(yōu)點(diǎn), 近幾年用于分析天然產(chǎn)物得到較大的發(fā)展。陳剛31等人用毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定了葛根和

20、葛藤中葛根素、大豆甙元和蘆丁含量。以碳圓盤(pán)電極為檢測(cè)電極, 電極電位為0.90 V( VS.SCE) , 在50 mmol/L 硼酸鹽緩沖液( pH=9.0) 中, 使用長(zhǎng)40 cm 熔融石英毛細(xì)管。當(dāng)分離電壓為9 kV, 上述三組分在12 min 內(nèi)完全分離。此外, 吳婷32等人用毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)( CE- ED) 法同時(shí)測(cè)定了益母草及3 種益母草沖劑中的根皮苷、橙皮素、蘆丁、山奈酚、洋芹素和槲皮素6 種黃酮類(lèi)化合物的含量。采用300 m 碳圓盤(pán)電極為工作電極, 檢測(cè)電位為+0.95 V( VS.SCE) ,在80 mmol/L 的Na2B4O7- H3BO3 ( pH=8.7) 的運(yùn)

21、行緩沖液中, 上述各組分在20 min 內(nèi)能完全分離。3 結(jié)語(yǔ)黃酮類(lèi)化合物的主要提取方法是有機(jī)溶劑提取法、超聲波輔助提取法、微波提取法、超臨界CO2 萃取法、酶浸漬萃取法。超臨界萃取法速度快、操作簡(jiǎn)單, 產(chǎn)品無(wú)溶劑殘留; 超聲波輔助提取無(wú)需加熱, 對(duì)有效成分具有保護(hù)作用。在提取某些中草藥黃酮類(lèi)成分時(shí), 可以將二者合理地結(jié)合利用。測(cè)定方法有比色法、薄層色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法、以及毛細(xì)管電泳法。比色法適于測(cè)定總黃酮, 但不適用于單一成分的測(cè)定。高效液相色譜是測(cè)定黃酮類(lèi)化合物的有效方法。它克服了傳統(tǒng)定量方法繁瑣、費(fèi)時(shí)、分離度欠佳以及GC 法的拖尾現(xiàn)象或制成相應(yīng)衍生物操作繁

22、瑣等缺點(diǎn), 分離效率高, 在該類(lèi)化合物中的應(yīng)用日趨增多。高效液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法為黃酮類(lèi)化合物的指紋圖譜的建立提供了高效準(zhǔn)確的方法。毛細(xì)管電泳以高效、快速、進(jìn)樣量少、節(jié)省溶劑、重現(xiàn)性好、不易污染等優(yōu)點(diǎn), 近幾年在黃酮類(lèi)化合物的分析中得到了較大的發(fā)展。由于黃酮類(lèi)化合物具有降壓、降血脂、鎮(zhèn)痛、抑制血小板聚集、抗骨質(zhì)舒松、抗心律失常、抗過(guò)敏及抗缺氧等多種藥理及保健作用, 而且黃酮類(lèi)化合物在人體不能直接合成, 只能從食品中獲得, 所以近年來(lái)科學(xué)家都積極關(guān)注從植物體中提取純度高、活性強(qiáng)的天然黃酮成分。因此, 對(duì)黃酮類(lèi)化合物的提取以及測(cè)定方法的研究具有廣泛的前景。參考文獻(xiàn):1 蔡健, 華景清.黃酮提取工

23、藝進(jìn)展J.淮陰工學(xué)院學(xué)報(bào), 2003, 12( 5) 82- 852 葉文峰.天然黃酮類(lèi)化合物以及在食品中的應(yīng)用J.宜春師專(zhuān)學(xué)報(bào), 2000, 22( 5) 9- 123 肖常厚.中藥化學(xué)M.上海上海科學(xué)技術(shù)出版社, 1997: 2654 李莉, 劉成梅, 田建文,等.現(xiàn)代提取分析技術(shù)在黃酮類(lèi)化合物中的應(yīng)用J.江西食品工業(yè), 2006( 4) 42- 445 田呈瑞, 李昀.銀杏葉黃酮的乙醇提取方法研究J. 西北植物學(xué)報(bào), 2001, 21( 3) 556- 5616 馮曉萍,查忠勇,王槐三.銀杏葉黃酮提取工藝研究現(xiàn)狀J.四川化工與腐蝕控制, 2002, 2( 5) 13- 167 王成章,

24、郁青,沈兆邦.銀杏葉提取物( GBE) 質(zhì)量和制備工藝J.林業(yè)科技通訊, 1999( 8) 4- 68 段蕊, 王蓓, 時(shí)海峽.微波法提取銀杏葉黃酮最佳工藝的研究J.淮海工學(xué)院學(xué)報(bào), 2001,10( 3) 46- 489 李嶸,金美芳.微波法提取銀杏黃酮甙的新工藝J.食品科學(xué),2000,21( 2) 39- 4110 孫婷.超臨界CO2 法萃取銀杏葉黃酮及其含量測(cè)定的研究J.中國(guó)食品學(xué)報(bào), 2005, 5( 3) 126- 12911 張玉祥, 邱蔚芬.CO2 超臨界萃取銀杏葉有效成分的工藝研究J.中國(guó)中醫(yī)藥科技, 2006, 13( 4) 255- 25612 游海, 陶秉瑩, 張立麒.超

25、臨界萃取法從銀杏葉中提取黃酮類(lèi)化合物的工藝研究J.南昌大學(xué)學(xué)報(bào):工科版, 2000, 22( 4) 34- 3813 吳傳茂,董青,吳周和,等.超聲波振蕩法提取大豆和豆豉中大豆異黃酮甙元及用HPLC 檢測(cè)其含量的研究J.飼料工業(yè),2006,27( 16) 47- 4914 王延峰,李延清,郝永紅.超聲法提取銀杏葉黃酮的研究J.食品科學(xué),2002,23( 8) 166- 16715 羅憲堂,熊友香,余世平.UV 法測(cè)定山香圓葉總黃酮類(lèi)成分含量J.中醫(yī)藥研究,2002,18( 5) 48- 4916 尉芹,馬希漢.杜仲葉黃酮含量測(cè)定方法研究J.西北農(nóng)林科技大學(xué):自然科學(xué)版,2001,29( 5)

26、199- 12217 劉佳佳.硼酸- 檸檬酸比色法測(cè)銀杏葉中黃酮苷含量J.食品與發(fā)酵工業(yè),1999,25( 6) 42- 4418 徐燕,邵家德.雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定積芩合劑中黃芩總黃酮的含量J.中國(guó)藥事,1997,11( 4) 250- 25119 周榮琪.竹葉提取物總黃酮含量測(cè)定方法的改進(jìn)J.食品科技,2005( 7) 76- 7920 余戟,陳杰.膠束紙色譜法分離和鑒定黃酮類(lèi)化合物J.廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1999,l7( 2) 102- 10421 孫仕萍,張文德,馬志東,等.單掃示波極譜法測(cè)定保健食品中總黃酮的研究J.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志, 2002, 14( 6) 15- 1622 Ligg

27、Jns J B.Deidzein and genistein content of fruits and nutsJ.Journalof Nutritional Biochemistry,2000,11( 6) 326- 33123 孫艷梅.大豆- 葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮糖苷的研究J.中國(guó)綜述1572008 年1 月食品研究與開(kāi)發(fā)第29 卷第1 期作者簡(jiǎn)介: 張杰( 1975- ) , 女( 漢) , 講師, 碩士研究生, 研究方向: 表面活性劑的應(yīng)用及天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)。糧油學(xué)報(bào), 2006, 21( 2) 86- 8924 胡芳弟, 封士蘭, 張勇,等.HPLC 法測(cè)定黃芪中黃酮類(lèi)成分和黃芪

28、甲苷的含量J.分析測(cè)試技術(shù)與儀器, 2003, 9( 3) 173- 17725 劉斌, 石任兵, 姜艷艷,等.HPLC 法測(cè)定苦參湯有效部位中4 種黃酮類(lèi)成分含量J.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 28( 6) 59- 6226 鄭瑩, 李緒文, 金永日.RP- HPLC 法測(cè)定三七葉中黃酮類(lèi)成分的含量J.藥物分析雜志, 2005, 25( 9) 1089- 109127 池靜端, 何秀峰, 劉愛(ài)茹,等.HPLC 法測(cè)定銀杏葉中6 種黃酮成分的含量J.藥學(xué)學(xué)報(bào), 1997, 32( 8) 625- 62828 馬強(qiáng), 張金蘭, 周玉新,等.高效液相色譜- 電噴霧質(zhì)譜法測(cè)定紅車(chē)軸草中異黃酮類(lèi)化合物J.分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào), 2006( 9) 247- 25029 董淮海,陶冠軍, 王林祥,等.高效液相色譜- 電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)大豆異黃酮和皂苷J(rèn).無(wú)錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào),2002,21( 4) 415- 419