1、.2 反應(yīng)結(jié)果的分析檢測 本實驗的樣品使用氣相色譜（GC）法進(jìn)行檢測。氣相色譜具有快速，靈敏，簡易的特點。對手性化合物中對映體含量的定量檢測這個具體問題而言，使用手性固定相色譜柱的 GC 法還具有精確，重復(fù)性好等優(yōu)點。本實驗樣品使用氣相色譜（GC）法進(jìn)行檢測。色譜柱為 -Cyclodexb 安捷倫科技生產(chǎn)，長度為 30 m，內(nèi)徑為 0.25 mm，膜厚為 0.25 m 的毛細(xì)管手性柱。檢測時采用程序升溫，分流比為 25:1，進(jìn)樣口溫度為 250 ，檢測器溫度為 250 。檢測時的色譜條件為：90 保留 5 min 后，9 /min 升溫至 180 ，180 保留 1 min；采用自動進(jìn)樣，進(jìn)樣

2、量為 1L。在上述色譜條件下標(biāo)樣的色譜圖如圖 2.1 所示。min891011121314pA0100200300400500600700800900 FID1 B, (WY0528BIYANG2.D) 8.436 10.877 12.117 12.237 圖 2.1 標(biāo)樣的色譜圖其中，苯甲醛的保留時間為 8.436min，苯乙酮的保留時間為10.877min，R-構(gòu)型苯乙醇的保留時間為 12.117min，S-構(gòu)型苯乙醇的保留時間為 12.237min。在 GC 法檢測樣品時，使用內(nèi)標(biāo)法定量檢測。內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對的校準(zhǔn)方法。在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校準(zhǔn)和消除出于

3、操作條件的波動而對分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。內(nèi)標(biāo)法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標(biāo)法時，在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜拄所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積與相對響應(yīng)值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。采用內(nèi)標(biāo)法定量時，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個能得到純樣的己知化合物，這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的一個同系物。當(dāng)然，在色譜分析條

4、件下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離51。根據(jù)內(nèi)標(biāo)法原理，在一定的色譜操作條件下，流入檢測器的待測組分 I 的含量 MI（質(zhì)量或濃度）與檢測器的響應(yīng)信號（峰面積 A 或峰高 H）成正比： mi=fi At 或 mi=fi hi (2.1) 上式中，F(xiàn)I 為校正因子。要準(zhǔn)確進(jìn)行定量分析，必須準(zhǔn)確地測量響應(yīng)信號，確求出定量校正因子。 本實驗色譜檢測所所用的內(nèi)標(biāo)物為苯甲醛，在進(jìn)行定量檢測時，取含有已知量的乙酸乙酯，苯甲醛，底物和產(chǎn)物組成的標(biāo)樣進(jìn)樣，根據(jù)標(biāo)樣計算出校正因子： iiisssmf Amf A(2.2)設(shè) f 為相對校正因子，則相對校正因子為： iisssifm Af =fm A(2.3)計算出相對校正因子后，再根據(jù)待測物的峰面積由公式 2.1 就可以求出待測物的量。取待測物的量為 m，待測物的峰面積為 A，則由公式 2.1 和公式 2.3可將待測物的量表示為： issim AmfAAm A(2.4)上述公式中的、為絕對校正因子， f 為相對校正因子，AS為內(nèi)標(biāo)物的sfif峰面積，ms為內(nèi)標(biāo)物的量，Ai為標(biāo)樣中待測物的峰面積，ms為標(biāo)樣中待測物的量。通過內(nèi)標(biāo)法求出各產(chǎn)品的量后，再根據(jù)各旋光性產(chǎn)物的濃度就可以得到手性產(chǎn)物的對映體過量值。計算公式如下： . .100% RSeeSR(2