1、關(guān)于免疫細胞功能檢測技術(shù)現(xiàn)在學習的是第一頁，共42頁一一 淋巴細胞的功能檢測淋巴細胞的功能檢測 淋巴細胞功能測定可分為體內(nèi)實驗和體外實淋巴細胞功能測定可分為體內(nèi)實驗和體外實驗。體內(nèi)實驗主要是間接了解淋巴細胞對抗原、驗。體內(nèi)實驗主要是間接了解淋巴細胞對抗原、半抗原或有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)；體外實驗主半抗原或有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)；體外實驗主要包括淋巴細胞對抗原或有絲分裂原刺激后的要包括淋巴細胞對抗原或有絲分裂原刺激后的增殖反應(yīng)、細胞毒性試驗及淋巴細胞分泌產(chǎn)物增殖反應(yīng)、細胞毒性試驗及淋巴細胞分泌產(chǎn)物的測定的測定 現(xiàn)在學習的是第二頁，共42頁淋巴細胞淋巴細胞T T細胞（負責細胞免疫功能）細胞（負責細胞免

2、疫功能）B B細胞（執(zhí)行體液免疫功能）細胞（執(zhí)行體液免疫功能）NKNK細胞（非特異性免疫作用）細胞（非特異性免疫作用） 現(xiàn)在學習的是第三頁，共42頁一、一、T細胞功能的檢測細胞功能的檢測T T細胞增殖試驗細胞增殖試驗T T細胞分泌功能測定細胞分泌功能測定T T細胞介導的細胞毒試驗細胞介導的細胞毒試驗體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗現(xiàn)在學習的是第四頁，共42頁（一）（一）T T淋巴細胞增殖試驗淋巴細胞增殖試驗1. 1. 原理：原理：淋巴細胞DNA合成分化母細胞刺激物細胞變大細胞漿擴大空泡核仁明顯核染色質(zhì)疏松現(xiàn)在學習的是第五頁，共42頁 未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細胞的形態(tài)特征轉(zhuǎn)化的淋巴細胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細胞淋巴母細胞 過渡

3、型細胞大小(直徑m)1220121668核大小、染色質(zhì)增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、14個有或無無有絲分裂有或無無無胞質(zhì)、著色增多、嗜堿增多、嗜堿極少、天青色漿內(nèi)空泡有或無有或無無偽足有或無有或無無現(xiàn)在學習的是第六頁，共42頁2. 2. 淋巴細胞轉(zhuǎn)化的刺激物淋巴細胞轉(zhuǎn)化的刺激物非特異性刺激物：非特異性刺激物： PHA -TPHA -T細胞細胞 ConA -TConA -T細胞細胞 PWM -TPWM -T、 B B細胞細胞 LPS -BLPS -B細胞細胞特異性刺激物：特異性刺激物： 異種抗原異種抗原 同種組織抗原同種組織抗原 現(xiàn)在學習的是第七頁，共42頁3. 3. 檢測方法檢測方

4、法 形態(tài)法：刺激物 淋巴細胞（4-6天） 母細胞化 同位素法：PHA 淋巴細胞（54h） DNA合成期 + 3HTdR摻入 收集細胞 檢測射線 測定細胞內(nèi)的3HTdR現(xiàn)在學習的是第八頁，共42頁（1 1）形態(tài)學檢查法）形態(tài)學檢查法%100胞數(shù)轉(zhuǎn)化和未轉(zhuǎn)化的淋巴細轉(zhuǎn)化的淋巴細胞數(shù)轉(zhuǎn)化率現(xiàn)在學習的是第九頁，共42頁方法學評價：方法學評價：優(yōu)點：形態(tài)學方法簡便易行，普優(yōu)點：形態(tài)學方法簡便易行，普通光學顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于通光學顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于基層實驗室應(yīng)用?；鶎訉嶒炇覒?yīng)用。缺點：是依靠肉眼觀察形態(tài)學變?nèi)秉c：是依靠肉眼觀察形態(tài)學變化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，

5、重復(fù)性和準確性較差。重復(fù)性和準確性較差。 現(xiàn)在學習的是第十頁，共42頁培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性（2）3H-TdR摻入法現(xiàn)在學習的是第十一頁，共42頁優(yōu)點：優(yōu)點：3H-TdR3H-TdR摻入法敏感性高，客摻入法敏感性高，客觀性強，重復(fù)性好。觀性強，重復(fù)性好。缺點：但需一定設(shè)備條件，同時還缺點：但需一定設(shè)備條件，同時還存在放射性核素污染問題。存在放射性核素污染問題。均值對照孔A均值試驗孔A570nm570nmSI 現(xiàn)在學習的是第十二頁，共42頁培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性MTT測吸光度(3) MTT 比色法現(xiàn)在學習的是第十三頁，共

6、42頁( (二二) T) T細胞分泌功能測定細胞分泌功能測定 體外培養(yǎng)的體外培養(yǎng)的T T細胞經(jīng)各種絲裂原或抗細胞經(jīng)各種絲裂原或抗原刺激后原刺激后, ,分泌各種細胞因子分泌各種細胞因子, ,可借助免疫學、可借助免疫學、細胞生物學及分子生物學技術(shù)分別檢測細胞因細胞生物學及分子生物學技術(shù)分別檢測細胞因子含量、生物學活性或基因表達水平，以反映子含量、生物學活性或基因表達水平，以反映T T細胞功能。細胞功能。 現(xiàn)在學習的是第十四頁，共42頁（三）（三）T T細胞介導的細胞毒試驗細胞介導的細胞毒試驗1.1.原理：原理：靶細胞抗原T細胞觀察殺傷活力致敏CTL靶細胞現(xiàn)在學習的是第十五頁，共42頁形態(tài)學方法：淋

7、巴細胞形態(tài)學方法：淋巴細胞+ +腫瘤細胞腫瘤細胞 計數(shù)殘計數(shù)殘留腫瘤細胞留腫瘤細胞2.2.方法方法意義： 腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細胞的能力 現(xiàn)在學習的是第十六頁，共42頁圖15-2 T細胞細胞毒試驗示意圖現(xiàn)在學習的是第十七頁，共42頁靶細胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時51Cr釋放法現(xiàn)在學習的是第十八頁，共42頁( (四四) ) 體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗特異性抗原皮膚試驗特異性抗原皮膚試驗PHAPHA皮膚試驗皮膚試驗 現(xiàn)在學習的是第十九頁，共42頁二、二、B細胞功能檢測細胞功能檢測B B細胞增殖能力的試驗細胞增殖能力的試驗溶血空斑試驗溶血空斑試驗B

8、B細胞抗體形成功能的檢測細胞抗體形成功能的檢測體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗現(xiàn)在學習的是第二十頁，共42頁( (一一)B)B細胞增殖能力的試驗細胞增殖能力的試驗抗抗IgMIgM細菌脂多糖細菌脂多糖SACSAC的的SPASPAB細胞增殖形態(tài)學3HTdR摻入法現(xiàn)在學習的是第二十一頁，共42頁( (二二) ) 溶血空斑試驗溶血空斑試驗1. 1. 原理：原理：現(xiàn)在學習的是第二十二頁，共42頁2. 2. 方法學：方法學：經(jīng)典溶血空斑形成試驗經(jīng)典溶血空斑形成試驗被動溶血空斑試驗被動溶血空斑試驗 現(xiàn)在學習的是第二十三頁，共42頁3 3臨床應(yīng)用與評價臨床應(yīng)用與評價溶血空斑試驗主要用于測定藥溶血空斑試驗主要用于測定藥物和手術(shù)

9、等因素對體液免疫功能物和手術(shù)等因素對體液免疫功能的影響的影響評價免疫治療或免疫重建后機評價免疫治療或免疫重建后機體產(chǎn)生抗體的能力。體產(chǎn)生抗體的能力。 現(xiàn)在學習的是第二十四頁，共42頁( (三三) ) B B細胞抗體形成功能的檢測細胞抗體形成功能的檢測 酶聯(lián)免疫斑點法酶聯(lián)免疫斑點法ELISPOTELISPOT1.原理：原理：現(xiàn)在學習的是第二十五頁，共42頁2 2應(yīng)用與方法學評價：應(yīng)用與方法學評價：該方法既可檢測抗體分泌細胞，又該方法既可檢測抗體分泌細胞，又可檢測抗體分泌量。可檢測抗體分泌量。優(yōu)點：優(yōu)點：穩(wěn)定、特異、抗原用量少；穩(wěn)定、特異、抗原用量少；可同時檢測不同抗原誘導的不同抗體分泌，并可定量

10、；可同時檢測不同抗原誘導的不同抗體分泌，并可定量；可檢測組織切片中分泌抗體的單個細胞?？蓹z測組織切片中分泌抗體的單個細胞。現(xiàn)在學習的是第二十六頁，共42頁( (四四) )體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風類毒素、多價肺炎鏈球菌菌苗等。破傷風類毒素、多價肺炎鏈球菌菌苗等。將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后疫前及免疫后1 1周、周、2 2周、周、3 3周分別采血，分周分別采血，分離血清，測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的離血清，測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判斷受檢者體內(nèi)效價，判斷受檢者

11、體內(nèi)B B細胞的功能。細胞的功能?，F(xiàn)在學習的是第二十七頁，共42頁染色計數(shù)離心取上清測LDH或AKP離心取沉淀測活細胞熒光測發(fā)光強度測CPM值形態(tài)法酶釋法熒光法同位素法化學發(fā)光法三、三、NK細胞活性測定細胞活性測定靶細胞溶解常用靶細胞: K562細胞株現(xiàn)在學習的是第二十八頁，共42頁二二 吞噬細胞功能檢測技術(shù)吞噬細胞功能檢測技術(shù) 按其形態(tài)大小分為兩類：按其形態(tài)大小分為兩類：大吞噬細胞大吞噬細胞單核單核- -吞噬細胞系統(tǒng)吞噬細胞系統(tǒng)小吞噬細胞小吞噬細胞中性粒細胞中性粒細胞現(xiàn)在學習的是第二十九頁，共42頁一、中性粒細胞功能的檢測一、中性粒細胞功能的檢測 細胞趨化功能的檢測細胞趨化功能的檢測 吞噬和

12、殺菌功能的檢測吞噬和殺菌功能的檢測現(xiàn)在學習的是第三十頁，共42頁( (一一) ) 細胞運動功能細胞運動功能趨化功能檢測趨化功能檢測1.1.原理：原理：現(xiàn)在學習的是第三十一頁，共42頁2. 2. 方法：方法： 瓊脂糖平板法瓊脂糖平板法 濾膜滲透法（Boyden小室法）現(xiàn)在學習的是第三十二頁，共42頁( (二二) )吞噬和殺菌功能測定吞噬和殺菌功能測定 1 1顯微鏡檢查法：顯微鏡檢查法：100(%)計數(shù)的白細胞數(shù)吞噬細菌的白細胞數(shù)吞噬率100(%)計數(shù)的白細胞數(shù)數(shù)胞內(nèi)含著染菌體的細胞殺菌率現(xiàn)在學習的是第三十三頁，共42頁2. 2. 溶菌法溶菌法100min0min9060301(%)）菌落數(shù)菌落數(shù)

13、或、作用（殺菌率現(xiàn)在學習的是第三十四頁，共42頁NBTNBT還原試驗還原試驗 原理：N-N-C+H+N=N-R-N-NH2CN=NH四氮唑基（淡黃色）甲臜（紫黑色）3NBT還原試驗 現(xiàn)在學習的是第三十五頁，共42頁中性粒細胞NBT甲臜顆粒沉積于胞質(zhì)中現(xiàn)在學習的是第三十六頁，共42頁二、巨噬細胞功能檢測二、巨噬細胞功能檢測( (一一) )炭粒廓清試驗炭粒廓清試驗 正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒。據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。現(xiàn)在學習的是第三十七頁，

14、共42頁( (二二) )吞噬功能檢測吞噬功能檢測 巨噬細胞對顆粒性抗原物質(zhì)具有很強的吞巨噬細胞對顆粒性抗原物質(zhì)具有很強的吞噬功能，常用雞紅細胞噬功能，常用雞紅細胞(CRBC)(CRBC)、白色念珠菌、白色念珠菌、酵母細胞等作為吞噬顆粒，用斑蟊敷貼法收集酵母細胞等作為吞噬顆粒，用斑蟊敷貼法收集人巨噬細胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細胞。人巨噬細胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細胞。 現(xiàn)在學習的是第三十八頁，共42頁( (三三) )巨噬細胞溶酶體酶的測定巨噬細胞溶酶體酶的測定1 1酸性磷酸酶的測定酸性磷酸酶的測定 硝酸鉛法硝酸鉛法 偶氮法偶氮法2 2非特異性酯酶的測定非特異性酯酶的測定 常用常用-萘醋酸法萘醋酸法現(xiàn)在學習的是第三十九頁，共42頁( (四四) ) 細胞毒作用測定細胞毒作用測定 用用IFN-IFN-激活小鼠巨噬細胞，觀察其對激活小鼠巨噬細胞，觀察其對125125I-UdRI-UdR標記的標記的DBA/2DBA/2小鼠肥大細胞瘤小鼠肥大細胞瘤P815P815的的殺傷活性。殺傷活性?，F(xiàn)在學習的是第四十頁，共42頁( (五五) ) 巨噬細胞促凝血活性測定巨噬細胞促凝血活性測定 激活的巨噬細