1、第四部分第四部分 : :淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1.進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)2.嘗試植物激素的應(yīng)用嘗試植物激素的應(yīng)用組織培養(yǎng)就是取一部分植物組織，如葉、芽、莖、根、組織培養(yǎng)就是取一部分植物組織，如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等，在無菌條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基花瓣或花粉等，在無菌條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定的溫度和光照，使之產(chǎn)生愈傷組織，或進(jìn)而生上，給予一定的溫度和光照，使之產(chǎn)生愈傷組織，或進(jìn)而生根發(fā)芽。根發(fā)芽。一、組織培養(yǎng)概述一、組織培養(yǎng)概述1.概念概念2、植物組織培養(yǎng)的原理是什么？、植物組織培養(yǎng)的原理是什么？植物細(xì)胞具有全能性，即生

2、物體的細(xì)胞，具有使后代細(xì)植物細(xì)胞具有全能性，即生物體的細(xì)胞，具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的能力。胞形成完整個(gè)體的能力。3.植物組織培養(yǎng)的基本過程植物組織培養(yǎng)的基本過程:離體離體的植物的植物器官、組織、器官、組織、細(xì)胞細(xì)胞脫分化脫分化愈愈傷傷組組織織再分化再分化根根芽芽植植物物體體植物組織培養(yǎng)過程示意圖植物組織培養(yǎng)過程示意圖 上面的示意圖中還有什么地方不夠完善的？上面的示意圖中還有什么地方不夠完善的？沒有進(jìn)行滅菌處理，試管也沒有做密封等。沒有進(jìn)行滅菌處理，試管也沒有做密封等。4.植物組織培養(yǎng)條件植物組織培養(yǎng)條件 含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、空氣、無菌

3、環(huán)境、適合的空氣、無菌環(huán)境、適合的PH、適時(shí)光照等，培、適時(shí)光照等，培養(yǎng)對象離體。養(yǎng)對象離體。生長素生長素/細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素 高高 利于根的形成利于根的形成適中適中 有利于根芽的分化有利于根芽的分化低低 有利于芽的形成有利于芽的形成二、菊花的組織培養(yǎng)二、菊花的組織培養(yǎng)(一一)設(shè)備及用品設(shè)備及用品1. 100ml三角瓶或大口培養(yǎng)瓶三角瓶或大口培養(yǎng)瓶 2. 鑷子鑷子 3. 超凈臺(tái)超凈臺(tái) 4. 滅滅菌鍋菌鍋 5.封口膜和橡皮圈封口膜和橡皮圈 6. 有棉球的廣口瓶有棉球的廣口瓶 7. 酒精燈酒精燈 8.三角漏斗三角漏斗 9.培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿(二二)材料材料1.MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基(用于配置發(fā)芽和生根培養(yǎng)基

4、用于配置發(fā)芽和生根培養(yǎng)基)2.奈乙酸用少量奈乙酸用少量0.1mol/LNaOH溶液溶解溶液溶解,芐基腺嘌呤用芐基腺嘌呤用少量少量0.1mol/LHCL溶解溶解3.發(fā)芽培養(yǎng)基發(fā)芽培養(yǎng)基(滅菌滅菌)4.生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基(滅菌滅菌)(三三)步驟步驟1.取外植體取外植體超凈臺(tái)上將無菌幼苗切段超凈臺(tái)上將無菌幼苗切段,每段至少每段至少1張葉片張葉片2.生芽培養(yǎng)生芽培養(yǎng)生芽培養(yǎng)基中生芽培養(yǎng)基中,放入放入1-3段切段段切段(莖部插入培養(yǎng)基莖部插入培養(yǎng)基,蓋上蓋上封口膜封口膜.日光燈下保持日光燈下保持1825的溫度培養(yǎng)的溫度培養(yǎng),每天光照每天光照不少于不少于14.5h3.生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)23周后周后,將叢狀

5、苗在無菌條件下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中將叢狀苗在無菌條件下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中,在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng).4.適應(yīng)鍛煉適應(yīng)鍛煉將苗轉(zhuǎn)移至草炭土或蛭石中將苗轉(zhuǎn)移至草炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持用玻璃罩或塑料布保持80以上的濕度以上的濕度,23天后打開減低濕度進(jìn)行鍛煉天后打開減低濕度進(jìn)行鍛煉,直直到將罩全部打開處于自然濕度下為止到將罩全部打開處于自然濕度下為止5.定植定植將苗轉(zhuǎn)移到土中培養(yǎng)將苗轉(zhuǎn)移到土中培養(yǎng)6.自然生長的莖進(jìn)行組織培養(yǎng)方法自然生長的莖進(jìn)行組織培養(yǎng)方法:課后題課后題:1.不同植物、不同組織的生根和生芽是否都可使用與本實(shí)不同植物、不同組織的生根和生芽是否都可使用與本實(shí)驗(yàn)相同的

6、生長素和細(xì)胞分裂素濃度？驗(yàn)相同的生長素和細(xì)胞分裂素濃度？2.本實(shí)驗(yàn)用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激本實(shí)驗(yàn)用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，為什么？素，為什么？不可相同不可相同天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，所以使用天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，所以使用時(shí)間短，而人工合成的，沒有分解酶，作用時(shí)時(shí)間短，而人工合成的，沒有分解酶，作用時(shí)間長，效果顯著。間長，效果顯著。3.如果在自然界取植物樣本進(jìn)行組織培養(yǎng)如果在自然界取植物樣本進(jìn)行組織培養(yǎng),你認(rèn)為應(yīng)采取什你認(rèn)為應(yīng)采取什么措施保證樣本不被污染么措施保證樣本不被污染?（1）操作環(huán)境清潔（）操作環(huán)境清潔（2）植物樣本的潔凈（）植物樣

7、本的潔凈（3）操作）操作敏捷迅速敏捷迅速 脫分化：脫分化：將來自已分化組織的已停止分裂的細(xì)胞從將來自已分化組織的已停止分裂的細(xì)胞從植物體部分的抑制性影響下解脫出來，恢復(fù)細(xì)胞的植物體部分的抑制性影響下解脫出來，恢復(fù)細(xì)胞的分裂活性。分裂活性。 再分化再分化:經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可有轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細(xì)胞類型的能力?？捎修D(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細(xì)胞類型的能力。愈傷組織愈傷組織1、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔、環(huán)境不清潔污染途徑污染途徑污染的預(yù)防措施污染的預(yù)防措施（一）防止外植體帶菌（一）防止外植體帶菌（二）保證培養(yǎng)