1、722/2013金品檢驗(yàn)中的應(yīng)用酶 聯(lián) 免 疫 分 析 法(ELISA) 是 把 抗 原抗體反應(yīng)的特異化作用有機(jī)結(jié)合 起來的一種非放 射性標(biāo)記免疫檢 測技術(shù)。酶聯(lián)免疫分析技術(shù)在性ELISAELISA技術(shù)流程kftivt4/22/2013食品中農(nóng)藥殘留的檢測 食品中藥物殘留的檢測 食品中毒素的檢測食品中微生物的檢測食品中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測 食品中其他成分的檢測4/22/2013自1983年以來，ELISA成為許多國際權(quán)威分析機(jī)構(gòu)（如A0AC）分析殘留農(nóng)藥 的首選方法。有些發(fā)達(dá)國家，如美國、德國已開發(fā)出商品檢測試劑盒應(yīng)用于 食品、蔬菜和環(huán)境中的農(nóng)藥殘留的檢測分析。迄今為止， 應(yīng)用ELISA檢測食品中

2、的殘留農(nóng)藥主要是除草劑、 殺菌劑和殺 蟲劑。Clegg建立了分析草甘麟的ELISA；余萬俊等用抗殺蟲瞇單克隆抗體為試劑，建立了間接競爭法、直接競爭法和標(biāo)記抗原競爭法等三種測出大米中殺 蟲瞇的ELISA；浙江大學(xué)的朱國念等研究出ELISA試劑盒來檢測克百威。1.2食品中藥物殘留的檢測為了促進(jìn)動物生長，預(yù)防動物的各種傳染病、寄 生蟲病ELISA在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用食品中農(nóng)藥殘留的檢測4/22/2013的發(fā)生，越來越多的激素類獸藥、抗菌藥、抗 寄生蟲藥，常常被用作飼料添加劑，小劑量長期喂養(yǎng) 禽畜水產(chǎn)等動物，導(dǎo)致肉類食品中的獸藥殘留超標(biāo)現(xiàn) 象日益嚴(yán)重。現(xiàn)在國際上比較重視的殘留藥物有抗生素、磺胺類、咲喃類

3、、哇喏酮類、激素類和轉(zhuǎn)基因類藥物。人們都在尋求適用的檢測方法.4/22/2013 80年代后期，ELISA 在殘留分析中發(fā)展迅速,吳定等制備了兔抗氨節(jié)西林鈉血清，建立了快速測定乳中氨節(jié)西林鈉含量的 ELISA 方法 o 2003年，LoomansE等用新霉胺作為免疫原建立 ELISA 方法同時檢測牛奶中的慶大霉素、卡那霉素和新霉素。4/22/2013食品中的毒素有三種: 一、細(xì)菌產(chǎn)生的毒素;真菌所產(chǎn)生的毒素三、一些動植物中含有天然毒性蛋白。4/22/2013采用辣根過氧化氫酶(HRP)標(biāo)準(zhǔn)高親和力的黃曲霉B1抗體，可以建立直接競爭抑制ELISA快速篩選法。在獲得抗河豚毒素(TXX)的單克隆抗體

4、的基礎(chǔ)上建立了 檢測TXX的間接ELISA方法，其最低檢出濃度為1.0X103mg/l ,明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。與傳統(tǒng)方法相比，間接EIISA方法的樣品提取方法比較 簡單。1.3食7 /4/22/20131.4食品中微生物的檢測常規(guī)的微生物學(xué)檢驗(yàn)：以分離培養(yǎng).生化試驗(yàn)及血清辜試驗(yàn)來進(jìn)行判斷，不僅需要大量的手工勞動，而且檢驗(yàn)周期長(67d) oELISA檢測：不受各種樣品成分的影響，而且在23d內(nèi)即可 完成樣品篩選。糞樣、魚粉、奶樣，其敏感性和特異性分別髙達(dá)100和97. 6?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有些細(xì)菌，如副溶血性弧菌、幽門螺桿菌.大腸桿 菌等在低溫貧營養(yǎng)的條件下，可以進(jìn)入“活的非可培養(yǎng)態(tài)”，在 適當(dāng)狀態(tài)下還

5、可以復(fù)蘇，仍具有致病力。常規(guī)的培養(yǎng)法無法檢測 到處于這種狀態(tài)的細(xì)菌，造成漏檢。而ELISA在這方面具有一定的 潛力。4/22/20131.5食品中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測, Rogan等人用ELISA法檢測出傳統(tǒng)大豆加工產(chǎn)品中混有的CP4EPSPS蛋白質(zhì)。這種蛋白質(zhì)檢測方法具有商業(yè)可利用 性，并具有高度選擇性和靈敏性。 FDA已研究了用雙夾心ELISA法來檢測食品是否含轉(zhuǎn)基因 玉米成分。Envimlogix ELISA測試盒可用于測定玉米中的cry9e蛋白，共測試了9種含玉米的食品，結(jié)果的重現(xiàn)性相當(dāng)好。Q22/20131.6食品中其它成分的檢測免疫球蛋白(Immunoglobulin,簡稱Ig)指具有

6、抗體活性，能與相 應(yīng)抗原發(fā)生特異結(jié)合的球蛋白，是構(gòu)成體液免疫的重要的物質(zhì)。 牛乳中特別是初乳中免疫球蛋白的含量相當(dāng)高，最近開發(fā)的免疫 奶，就是通過對乳牛進(jìn)行免疫注射從而提高牛奶中的免疫球蛋白 的含量；再有市場中強(qiáng)化免疫球蛋白的奶粉等，因免疫球蛋白也 是一種蛋白質(zhì)，具有蛋白質(zhì)的共性，但其在上述制品中含量又相 對的少，常規(guī)的蛋白測定法無法測出免疫球蛋白的含量。用ELISA即可成功解決這個問題，且同時可完成含量與活性的檢測。以辣根過氧化物酶標(biāo)記不同動物肌肉和血清球蛋A抗 血清檢查牛肉、馬肉、豬肉、羊肉和駝肉，檢出率均在95%以上，經(jīng)與其他血清學(xué)方法比較，證實(shí)用該法鑒別不同肉類具有較高的敏感性和特異性，而且方法簡便,設(shè)備簡單，判斷指標(biāo)客觀真實(shí)。目前,ELISART檢測Q22/2013Q22/2013羊肉、鹿肉和馬肉等，在摻假率為1 %時即可檢出。4/22/2013檢測范圍在ng pg水平。屬于超微量分析技術(shù)結(jié)果準(zhǔn)確重現(xiàn)性好_ )ELISA優(yōu)勢I對試劑的選擇性高，很難同時分析多種成分匚對結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反,分析分子量很小的化合物或很不穩(wěn)定的化合物有一定的困難高特異性和靈敏性廉價操作簡單處理量大丿s_ 7許多學(xué)者致力于改進(jìn)和