1、第十二章第十二章 光度分析法光度分析法sSXxCAAC本章需要掌握的內(nèi)容和解決的問題：本章需要掌握的內(nèi)容和解決的問題：一、問題一、問題 1、光度分析法的顯色反應(yīng)的條件？顯色反應(yīng)的影響因素？、光度分析法的顯色反應(yīng)的條件？顯色反應(yīng)的影響因素？ 2、偏離朗伯比爾定律的原因？、偏離朗伯比爾定律的原因？ 3、光度分析的參比溶液的選擇？測(cè)定的誤差較小的范圍是、光度分析的參比溶液的選擇？測(cè)定的誤差較小的范圍是多少？多少？ 4、吸光光度法的儀器有幾大部件組成？、吸光光度法的儀器有幾大部件組成？二、計(jì)算二、計(jì)算 1、朗伯比爾定律的（、朗伯比爾定律的（1）三個(gè)公式計(jì)算：）三個(gè)公式計(jì)算： A=abc、A=bc、A=

2、lgT （2）比較法）比較法:光譜與能量的關(guān)系光譜與能量的關(guān)系 單色光單色光 復(fù)合光復(fù)合光白光白光青藍(lán)青藍(lán)青青綠綠黃黃橙橙紅紅紫紫藍(lán)藍(lán)互補(bǔ)色互補(bǔ)色基于被測(cè)物質(zhì)的分子基于被測(cè)物質(zhì)的分子對(duì)光具有選擇性吸收對(duì)光具有選擇性吸收的特性而建立起來的的特性而建立起來的分析方法分析方法, ,叫叫吸光光度法吸光光度法. .包括：包括：比色法比色法：通過比較有色溶液顏色深淺通過比較有色溶液顏色深淺 分光光度法：分光光度法：根據(jù)物質(zhì)對(duì)一定波長(zhǎng)的光的吸收程度根據(jù)物質(zhì)對(duì)一定波長(zhǎng)的光的吸收程度 真空紫外光度法：真空紫外光度法：10200 nm（遠(yuǎn)紫外光）遠(yuǎn)紫外光） 紫外吸光光度法：紫外吸光光度法：200 400 nm（近

3、紫外區(qū)）近紫外區(qū)） 可見吸光光度法：可見吸光光度法：400 750 nm 紅外光度法：紅外光度法：2.5 1000 m 依據(jù)物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)范圍光的吸收主要有：依據(jù)物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)范圍光的吸收主要有：一、吸光光度法一、吸光光度法二二、吸光分析基本定律、吸光分析基本定律1. 朗伯朗伯-比爾定律比爾定律（Lambert-Beer law） 當(dāng)一束平行單色光通過任何均勻、非散射的固體、液體當(dāng)一束平行單色光通過任何均勻、非散射的固體、液體或氣體介質(zhì)時(shí)，一部分被吸收，一部分透過介質(zhì)，一部分被或氣體介質(zhì)時(shí)，一部分被吸收，一部分透過介質(zhì)，一部分被器皿的表面反射。如圖所示，設(shè)人射光強(qiáng)度為器皿的表面反射。如圖所示，

4、設(shè)人射光強(qiáng)度為II0 0，吸收光強(qiáng)，吸收光強(qiáng)度為度為I Ia a，透過光強(qiáng)度為，透過光強(qiáng)度為I It t，反射光強(qiáng)度為，反射光強(qiáng)度為I Ir r。rtaIIII0吸收光吸收光透射光透射光是由于物質(zhì)對(duì)不是由于物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有選擇性的吸同波長(zhǎng)的光具有選擇性的吸收作用而產(chǎn)生的，收作用而產(chǎn)生的，。例：例：硫酸銅硫酸銅溶液吸收白光中的黃色光而呈藍(lán)色；溶液吸收白光中的黃色光而呈藍(lán)色； 高錳酸鉀高錳酸鉀溶液因吸白光中的綠色光而呈紫色。溶液因吸白光中的綠色光而呈紫色。 如果兩種適當(dāng)顏色的光按一定的強(qiáng)度比例混合可以如果兩種適當(dāng)顏色的光按一定的強(qiáng)度比例混合可以得白光，這兩種光就叫得白光，這兩種光就叫。物質(zhì)呈

5、現(xiàn)的顏色和物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色和吸收的光顏色之間是互補(bǔ)關(guān)系。吸收的光顏色之間是互補(bǔ)關(guān)系。 吸收曲線：吸收曲線：測(cè)定某種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸測(cè)定某種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸收程度，以收程度，以波長(zhǎng)波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，為橫坐標(biāo)，吸光度吸光度為縱坐標(biāo)作圖。為縱坐標(biāo)作圖。KMnO4 的吸收光譜圖的吸收光譜圖最大吸收波長(zhǎng)，最大吸收波長(zhǎng)， max定量分析的基礎(chǔ)定量分析的基礎(chǔ)：某一波長(zhǎng)：某一波長(zhǎng)下測(cè)得的吸光度與物質(zhì)濃度下測(cè)得的吸光度與物質(zhì)濃度關(guān)系的有關(guān)關(guān)系的有關(guān)三、三、 光吸收基本定律光吸收基本定律: Lambert-Beer定律定律 a-吸光系數(shù)吸光系數(shù)-摩爾吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)，mol / L b-吸光液層的

6、厚度吸光液層的厚度(光程光程)， cm c-吸光物質(zhì)的濃度，吸光物質(zhì)的濃度， g / L, T-透光度，透光度，%或小數(shù)或小數(shù) cbA a 當(dāng)一束平行單色光通過均勻、透明的吸光介質(zhì)當(dāng)一束平行單色光通過均勻、透明的吸光介質(zhì)時(shí)，其吸光度與吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度和吸收層厚度時(shí)，其吸光度與吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度和吸收層厚度的乘積成正比。的乘積成正比。. .cbAA= lg1/T例例1 濃度為濃度為25.0g/50mL的的Cu2+溶液，用雙環(huán)已酮草酰二腙溶液，用雙環(huán)已酮草酰二腙分光光度法測(cè)定，于波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定，于波長(zhǎng)600nm處，用處，用2.0cm比色皿測(cè)得比色皿測(cè)得T=50.1%，求吸光系數(shù)，求吸光系數(shù)a和摩爾吸

7、光系數(shù)和摩爾吸光系數(shù)。已知。已知M(Cu)=64.0。)1000.5100 .50100 .251436LgLgc（11 -2-14.L.g103.001000. 50 . 2300. 0cmLgcmbcAa解解 已知已知T=0.501，則，則A=lgT=0.300，b=2.0cm,則根據(jù)朗伯則根據(jù)朗伯比爾定律比爾定律 A=abc，而而= Ma = 64.0gmol-13.00102 Lg-1cm-1=1.92104(Lmol-1cm-1)解解: 由由A=-lgT=abc可得可得 T=10-abc 當(dāng)當(dāng)b1=1cm時(shí)，時(shí)，T1=10-ac=T 當(dāng)當(dāng)b2=2cm時(shí)，時(shí)，T2=10-2ac=T2例

8、例2 某有色溶液，當(dāng)用某有色溶液，當(dāng)用1cm比色皿時(shí)，其透光度為比色皿時(shí)，其透光度為T，若改用，若改用2cm比色皿，則透光度應(yīng)為多少？比色皿，則透光度應(yīng)為多少？安絡(luò)血的相對(duì)摩爾質(zhì)量為安絡(luò)血的相對(duì)摩爾質(zhì)量為236，將其配成，將其配成100 mL含安含安絡(luò)血絡(luò)血 0.4300 mg的溶液，盛于的溶液，盛于1 cm吸收池中，在吸收池中，在max55 nm處測(cè)得處測(cè)得A值為值為0.483，試求安絡(luò)血的，試求安絡(luò)血的和和值。值。解：由解：由EclIITA0lglg112314300. 01000483. 01%1cmclAE1%41cm23611232.65 101010ME 稱取維生素稱取維生素C 0

9、.0500 g溶于溶于100 mL的的5 mol/L硫酸溶液中，準(zhǔn)硫酸溶液中，準(zhǔn)確量取此溶液確量取此溶液2.00 mL稀解：釋至稀解：釋至100 mL，取此溶液于，取此溶液于1 cm吸收池中，在吸收池中，在max245 nm處測(cè)得處測(cè)得A值為值為0.498。求樣品中維。求樣品中維生素生素C 的百分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。（的百分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。（mL/gcm）解：由解：由EclIITA0lglg40.4988.89 10 (g/100mL)560 1AcEl%.%.988100100205000108984維生素維生素C 的百分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的百分質(zhì)量分?jǐn)?shù)摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)的討論的討論摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) (

10、Lmol-1cm-1)在數(shù)值上等于濃度為在數(shù)值上等于濃度為1 mol/L, 液層厚度為液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度,吸收物質(zhì)在一定波長(zhǎng)和溶劑條件下的吸收物質(zhì)在一定波長(zhǎng)和溶劑條件下的特征常數(shù)特征常數(shù)在溫度和波長(zhǎng)等條件一定時(shí)，在溫度和波長(zhǎng)等條件一定時(shí)，僅與吸收物質(zhì)本身的性僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與待測(cè)物濃度無關(guān)；質(zhì)有關(guān)，與待測(cè)物濃度無關(guān)； 同一吸光物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的同一吸光物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的值是不同的。在最大吸收值是不同的。在最大吸收波長(zhǎng)波長(zhǎng)max處的摩爾吸光系數(shù)，以處的摩爾吸光系數(shù)，以max表示表示 表明了該表明了該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力吸收物

11、質(zhì)最大限度的吸光能力，也反映了光，也反映了光度法測(cè)定該物質(zhì)可能達(dá)到的最大靈敏度。度法測(cè)定該物質(zhì)可能達(dá)到的最大靈敏度。4.4.吸光光度法的靈敏度的表示方法吸光光度法的靈敏度的表示方法 105 超超高靈敏度高靈敏度 =(610）104 高靈敏高靈敏 =(26)104 中等靈敏度中等靈敏度; 10104 4* *選擇性好選擇性好* *顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無明顯吸收。顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無明顯吸收。 對(duì)照性好對(duì)照性好, , maxmax60 nm .60 nm .* *反應(yīng)生成的有色化合物反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定組成恒定，穩(wěn)定，穩(wěn)定。* *顯色條件易于控制，顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好重現(xiàn)性好。3. 顯

12、色條件的確定顯色條件的確定c(R)c(R)c(R)（1） 顯色劑用量顯色劑用量 Mo(SCN)32+ 淺紅淺紅Mo(SCN)5 橙紅橙紅Mo(SCN)6- 淺紅淺紅Fe(SCN)n3-n選擇曲線變化平坦處。選擇曲線變化平坦處。（2） 顯色反應(yīng)酸度顯色反應(yīng)酸度 RH = R- + H+ pH = 2 3FeR紫紅色紫紅色pH = 4 7FeR2橙色橙色pH = 8 10FeR3黃色黃色 pH12 Fe(OH)3 沉淀pH1pHpH2選擇曲線中吸光度較大且選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)恒定的平坦區(qū)ApH鄰二氮菲亞鐵反應(yīng)完全度與鄰二氮菲亞鐵反應(yīng)完全度與pH的關(guān)系的關(guān)系 2+eFFNN3e2+3N

13、NFFNN3e2+3NNpH38(檸檬酸鹽介質(zhì))為適宜的酸度范圍為適宜的酸度范圍2550t /minA（3） 顯色溫度及顯色時(shí)間顯色溫度及顯色時(shí)間 另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、表面活性劑等另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、表面活性劑等. .一般盡量采用水相測(cè)定一般盡量采用水相測(cè)定3.參比溶液的選擇參比溶液的選擇(不加顯色劑不加顯色劑)(不加試樣溶液不加試樣溶液)1086420204060800.70.40.20.1AT%Err0.434lg(0.01)cTEcTTT (36.8)0.434濃度測(cè)濃度測(cè)量的相量的相對(duì)誤差對(duì)誤差與與T(或或A)的關(guān)系的關(guān)系實(shí)際工作中，應(yīng)控制實(shí)際工作中，應(yīng)控制T在在1

14、070, A在在0.151.0之間之間 (調(diào)調(diào)c, b, )4. 吸光度讀數(shù)范圍的選擇：吸光度讀數(shù)范圍的選擇：最佳值最佳值最佳讀數(shù)范圍最佳讀數(shù)范圍 定量分析時(shí)，通常液層定量分析時(shí)，通常液層厚度是相同的，按照比爾厚度是相同的，按照比爾定律，濃度與吸光度之間定律，濃度與吸光度之間的關(guān)系應(yīng)該是一條通過直的關(guān)系應(yīng)該是一條通過直角坐標(biāo)原點(diǎn)的直線。但在角坐標(biāo)原點(diǎn)的直線。但在實(shí)際工作中，往往會(huì)偏離實(shí)際工作中，往往會(huì)偏離線性而發(fā)生彎曲。線性而發(fā)生彎曲。五、五、偏離朗伯一比爾定律的原因偏離朗伯一比爾定律的原因 0 1 2 3 4 mg/mLA。 。 。 。*0.80.60.40.20工作曲線工作曲線 標(biāo)準(zhǔn)曲線法

15、測(cè)定未知溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯比耳定律的偏比耳定律的偏離。離。引起這種偏離的因素（兩大類）：引起這種偏離的因素（兩大類）： （1 1）物理性因素，即儀器的非理）物理性因素，即儀器的非理想引起的；想引起的； （2 2）化學(xué)性因素。）化學(xué)性因素。 單色光不純，導(dǎo)致負(fù)偏差。單色光不純，導(dǎo)致負(fù)偏差。散射光的影響，膠體、乳濁液或懸濁液由散射光的影響，膠體、乳濁液或懸濁液由于散射的作用使吸光度增大，或入射光不是垂直通過比色皿（非平行入于散射的作用使

16、吸光度增大，或入射光不是垂直通過比色皿（非平行入射光）產(chǎn)生正偏差射光）產(chǎn)生正偏差 為克服非單色光引起的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器此外還應(yīng)為克服非單色光引起的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器此外還應(yīng)將入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸收曲線較平坦處。將入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸收曲線較平坦處。（1）物理性因素）物理性因素(2) 化學(xué)性因素化學(xué)性因素 吸光質(zhì)點(diǎn)的相互作用，吸光質(zhì)點(diǎn)的相互作用，濃度較大時(shí)，產(chǎn)生負(fù)偏差，濃度較大時(shí)，產(chǎn)生負(fù)偏差， 朗伯朗伯-比爾定律只比爾定律只適合于稀溶液適合于稀溶液（C 10-2 mol/L )。 平衡效應(yīng)：平衡效應(yīng)：溶液中存在著離解、聚合、互變異

17、構(gòu)、配合物的形成等化溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡時(shí)。使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。學(xué)平衡時(shí)。使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。 例：例： 鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡：鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡： CrO42- 2H = Cr2O72- H2O 溶液中溶液中CrO42-、 Cr2O72-的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。故此時(shí)溶的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。故此時(shí)溶液液pH 對(duì)測(cè)定有重要影響。對(duì)測(cè)定有重要影響。六、六、 吸光光度分析的方法和儀器吸光光度分析的方法和儀器 吸光分析是根據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收為基礎(chǔ)吸光分析是根據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收為

18、基礎(chǔ)，以朗伯，以朗伯-比爾定律為依據(jù)的分析方法。按照測(cè)定原比爾定律為依據(jù)的分析方法。按照測(cè)定原理、操作特點(diǎn)以及使用的一起又分目視比色法、光理、操作特點(diǎn)以及使用的一起又分目視比色法、光電比色法和分光光度法。電比色法和分光光度法。1. 目視比色法目視比色法 colorimetry 用眼睛觀察、比較溶液顏色深度以確定物質(zhì)含量的方用眼睛觀察、比較溶液顏色深度以確定物質(zhì)含量的方法。優(yōu)點(diǎn)是儀器簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，適宜于大批試樣的分析。法。優(yōu)點(diǎn)是儀器簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，適宜于大批試樣的分析。靈敏度高，因?yàn)槭窃趶?fù)合光靈敏度高，因?yàn)槭窃趶?fù)合光- -白光下進(jìn)行測(cè)定，故某些顯白光下進(jìn)行測(cè)定，故某些顯色反應(yīng)不符合朗伯色反應(yīng)不

19、符合朗伯- -比爾定律時(shí)，仍可用該法進(jìn)行測(cè)定。比爾定律時(shí)，仍可用該法進(jìn)行測(cè)定。主要缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度不高，標(biāo)準(zhǔn)系列不能久存，需要在測(cè)定主要缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度不高，標(biāo)準(zhǔn)系列不能久存，需要在測(cè)定時(shí)臨時(shí)配制。時(shí)臨時(shí)配制。標(biāo)準(zhǔn)系列標(biāo)準(zhǔn)系列未知樣品未知樣品特點(diǎn)特點(diǎn)利用自然光利用自然光比較吸收光的互補(bǔ)色光比較吸收光的互補(bǔ)色光準(zhǔn)確度低準(zhǔn)確度低(半定量半定量)不可分辨多組分不可分辨多組分方法簡(jiǎn)便，靈敏度高方法簡(jiǎn)便，靈敏度高觀察方向觀察方向2. 光電比色法光電比色法(colorimetry) 光電比色法光電比色法是利用光電池和檢流計(jì)代替人眼，測(cè)是利用光電池和檢流計(jì)代替人眼，測(cè)定吸光物質(zhì)對(duì)某一波長(zhǎng)的光的吸收來進(jìn)行測(cè)定方法。定

20、吸光物質(zhì)對(duì)某一波長(zhǎng)的光的吸收來進(jìn)行測(cè)定方法。 光電比色計(jì)是通過濾光片(filter)得一窄范圍的光(幾十nm)，即單色光為光源，但單色光的單色性不好，常發(fā)生偏離郎伯-比爾定律的情況。靈敏度和準(zhǔn)靈敏度和準(zhǔn)確度較差確度較差( photoelectric colorimeter)3. 吸光光度法吸光光度法 Spectrophotometry 借助分光光度計(jì)來測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制借助分光光度計(jì)來測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)被測(cè)試液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得被測(cè)，根據(jù)被測(cè)試液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得被測(cè)物質(zhì)的濃度或含量。物質(zhì)的濃度或含量。Standard curv

21、eStandard curve * *吸光光度法特點(diǎn)：吸光光度法特點(diǎn)：入射光是純度較高的單色光入射光是純度較高的單色光，故便偏離朗伯，故便偏離朗伯- -比爾定律的情況大為減少，標(biāo)準(zhǔn)曲比爾定律的情況大為減少，標(biāo)準(zhǔn)曲線直線部分的范圍更大，分析結(jié)果的準(zhǔn)確度較高。線直線部分的范圍更大，分析結(jié)果的準(zhǔn)確度較高。因可任意選取某種波長(zhǎng)的單色光，故利用吸光度的因可任意選取某種波長(zhǎng)的單色光，故利用吸光度的加和性，同時(shí)測(cè)定溶液中兩種或兩種以上的組分。加和性，同時(shí)測(cè)定溶液中兩種或兩種以上的組分。由于入射光的波長(zhǎng)范圍擴(kuò)大了，許多無色物質(zhì)，只由于入射光的波長(zhǎng)范圍擴(kuò)大了，許多無色物質(zhì)，只要它們?cè)谧贤饣蚣t外光區(qū)域內(nèi)有吸收峰，

22、都可以測(cè)要它們?cè)谧贤饣蚣t外光區(qū)域內(nèi)有吸收峰，都可以測(cè)定。定。通過棱鏡或光柵得到一束近似的單色光通過棱鏡或光柵得到一束近似的單色光.波長(zhǎng)可調(diào)波長(zhǎng)可調(diào), 故選擇性故選擇性好好, 準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高. 分光光度計(jì)按工作波長(zhǎng)范圍分類：紫外、可見分光光度計(jì)按工作波長(zhǎng)范圍分類：紫外、可見分光光度計(jì)應(yīng)用于無機(jī)物和有機(jī)物含量的測(cè)定，紅分光光度計(jì)應(yīng)用于無機(jī)物和有機(jī)物含量的測(cè)定，紅外分光光度計(jì)主要用于結(jié)構(gòu)分析。分光光度計(jì)又可外分光光度計(jì)主要用于結(jié)構(gòu)分析。分光光度計(jì)又可分為單光束和雙光束兩類。分為單光束和雙光束兩類。722722型分光光度計(jì)是數(shù)型分光光度計(jì)是數(shù)字顯示的單光束、可見分光光度計(jì)字顯示的單光束、可見分光光度

23、計(jì)(recording (recording spectrophotometer)spectrophotometer)。 檢測(cè)系檢測(cè)系統(tǒng)統(tǒng)吸收池吸收池光光源源單色器單色器吸收池吸收池分光光度計(jì)的基本部件分光光度計(jì)的基本部件: 光源、單色器、比色皿、檢測(cè)器和顯示裝置。光源、單色器、比色皿、檢測(cè)器和顯示裝置。單色光器光電管光源檢流計(jì)0.575光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測(cè)器檢測(cè)器顯示顯示單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有一般不能作全波段光譜掃

24、描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。很高的穩(wěn)定性。單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈自動(dòng)記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈 敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜， 價(jià)格較高。價(jià)格較高。儀器儀器 紫外-可見分光光度計(jì)U-3400U-3400型紫外型紫外- -可見分光光度計(jì)可見分光光度計(jì)七、七、分光光度計(jì)的主要部件分光光度計(jì)的主要部件1. 1. 光源光源(Light source)(Light source)：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)

25、的連續(xù)光譜，有足夠的光強(qiáng)度譜，有足夠的光強(qiáng)度, ,穩(wěn)定。穩(wěn)定。 可見光區(qū)：可見光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈鎢燈，碘鎢燈(320 (320 2500 nm)2500 nm) 紫外區(qū)：紫外區(qū)：氫燈，氘燈氫燈，氘燈(180 (180 375 nm)375 nm) 用用612 V612 V鎢絲燈作可見光區(qū)的光源，發(fā)出的連鎢絲燈作可見光區(qū)的光源，發(fā)出的連續(xù)光譜在續(xù)光譜在360800 nm 360800 nm 范圍內(nèi)。光源應(yīng)該穩(wěn)定，即范圍內(nèi)。光源應(yīng)該穩(wěn)定，即要求電源電壓保持穩(wěn)定。為此，通常在儀器內(nèi)同時(shí)要求電源電壓保持穩(wěn)定。為此，通常在儀器內(nèi)同時(shí)配有電源穩(wěn)壓器。配有電源穩(wěn)壓器。 氫燈氫燈 氘燈氘燈 鎢燈鎢燈 汞燈汞燈

26、 hydrogen deuterium tungsten mercury lamp lamp lamp lamp /nm鎢燈（熱輻射光源）鎢燈（熱輻射光源）400400 600600 800800 10001000氙燈（氣體放電光源）氙燈（氣體放電光源）氫燈氫燈強(qiáng)強(qiáng)度度氙燈氫燈鎢燈吸光光度法儀器主要差異比較吸光光度法儀器主要差異比較2. 單色器單色器(monochromator)：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。單色光的裝置。棱鏡棱鏡: :玻璃玻璃350 350 3200 nm, 3200 nm, 石英石英185 185 4000 nm4000 nm光柵光柵

27、: :波長(zhǎng)范圍寬波長(zhǎng)范圍寬, , 色散均勻色散均勻, ,分辨性能好分辨性能好, , 使用方便使用方便 棱鏡(prism)：根據(jù)光的折射原理，將 復(fù) 合 光色散為不同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過一個(gè)很窄的狹縫(slit)照射到吸收池上。由玻璃或石英制成。玻璃棱鏡用于可見光范圍，石英棱鏡則在紫外和可見光范圍均可使用。 光柵(grating)是根據(jù)光的衍射和干涉原理將復(fù)合光色散為不同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過狹縫照射到吸收池上。它的分辨率比棱鏡大，可用的波長(zhǎng)范圍也較寬。光柵：光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等寬度等間距等間距條痕條痕(60

28、0、1200、2400條條/mm )。M1M2出出射射狹狹縫縫光屏光屏透透鏡鏡平面透平面透射光柵射光柵光柵衍射示意圖光柵衍射示意圖原理原理：利用光通過光柵時(shí)利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.波長(zhǎng)范圍寬波長(zhǎng)范圍寬, , 色散均勻色散均勻, ,分辨性能好分辨性能好, , 使用方便使用方便 吸收池吸收池( (比色皿比色皿) )：用于盛待測(cè)及參比溶液。：用于盛待測(cè)及參比溶液。 可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池（可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池（35035032003200nmnm） 紫外區(qū)：石英池玻璃紫外區(qū)：石英池玻璃 （18518540004000nmnm）檢流計(jì)檢流計(jì)（指示器）：（指示器）： 低檔儀器：刻度顯示低檔儀器：刻度顯示 中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動(dòng)掃描記錄中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動(dòng)掃描記錄檢測(cè)器檢測(cè)器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成 電流訊號(hào)。電流訊號(hào)。光電管藍(lán)敏（銻銫）光電管藍(lán)敏（銻銫） 210625nm ，光電管，光電管紅紅 敏（氧化敏（氧化銫）光電管銫）光電管 6251000nm ，光電倍增管，光電倍增管3. 比色皿比色皿(coloritrough) 也稱吸收池也稱吸收池。 。 它是由無色透明、耐腐蝕、化學(xué)性質(zhì)相