實驗六酵母核糖核酸的分離及組分ppt課件_第1頁
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文檔簡介

1、實驗六實驗六 酵母核糖核酸的分離酵母核糖核酸的分離 及組分鑒定及組分鑒定一一 實驗原理實驗原理 1. 酵母核酸中酵母核酸中RNA含量較高；含量較高；RNA可溶于可溶于堿性溶液，在堿提取液中加入酸性乙醇溶堿性溶液，在堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即可液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即可得得RNA的粗制品。的粗制品。 2. 核糖核酸含有核酸、嘌呤堿、嘧啶堿和核糖核酸含有核酸、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸各組分；加硫酸煮沸可使其水解，從磷酸各組分；加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以定性測出上述組分的存在。水解液中可以定性測出上述組分的存在。二二 實驗步驟實驗步驟 1. 取取10g

2、 酵母酵母放入研缽放入研缽用量筒量取用量筒量取60ml 0.04mol/L NaOH 溶液溶液202020三次三次添加）添加）倒入錐形瓶倒入錐形瓶在沸水浴中加熱在沸水浴中加熱20min冷卻冷卻 2. 倒入大離心管，蓋上蓋子倒入大離心管，蓋上蓋子離心離心10min, V=5000上清液倒入燒杯上清液倒入燒杯A用量筒量用量筒量取取20ml酸性乙醇溶液酸性乙醇溶液倒入燒杯倒入燒杯B然后然后將燒杯將燒杯A液緩緩倒入燒杯液緩緩倒入燒杯B,注意不斷攪拌注意不斷攪拌待核酸沉淀下來后離心待核酸沉淀下來后離心5min,V=5000棄去棄去上清液上清液 3. 沉淀加入沉淀加入10ml 95乙醇乙醇攪拌均勻攪拌均勻

3、倒入小離心管中倒入小離心管中離心離心5min,V=5000棄棄去上清液去上清液沉淀中加入沉淀中加入10ml乙醚乙醚攪拌攪拌均勻均勻過濾過濾濾紙上的物品即為核酸濾紙上的物品即為核酸自然風干一星期自然風干一星期 4. 取取200mg風干的核酸風干的核酸放入小燒杯放入小燒杯用量筒量取用量筒量取10ml 1.5mol/L H2SO4溶液倒入溶液倒入小燒杯小燒杯用玻璃棒攪拌使其溶解用玻璃棒攪拌使其溶解在在沸水浴中加熱沸水浴中加熱10min制成水解液制成水解液然后進然后進行各項的組分鑒定行各項的組分鑒定 4.1 嘌呤堿鑒定：嘌呤堿鑒定： 取取1ml水解液水解液加入過量濃氨水加入過量濃氨水再再加入加入1ml0.1mol/LAgNO3溶液溶液觀察有無沉觀察有無沉淀淀 4.2 核糖鑒定核糖鑒定 取取1ml水解液于試管中水解液于試管中加入三氯化鐵濃加入三氯化鐵濃鹽酸溶液鹽酸溶液2ml再加入苔黑酚乙醇溶液再加入苔黑酚乙醇溶液0.2ml放沸水浴中煮放沸水浴中煮10min觀察溶液觀察溶液是否變綠色是否變綠色 4.3 磷酸鑒定磷酸鑒定 取取1ml水解液

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