1、會(huì)計(jì)學(xué)1細(xì)胞生物學(xué)的研究方法細(xì)胞生物學(xué)的研究方法形態(tài)觀察形態(tài)觀察目鏡物鏡集光器載物臺(tái)光源1. 普通光鏡的結(jié)構(gòu)普通光鏡的結(jié)構(gòu):第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)2. 普通光鏡的成像原理普通光鏡的成像原理圖像圖像樣品樣品光線光線聚光器聚光器物鏡物鏡光學(xué)顯微鏡的光路圖光學(xué)顯微鏡的光路圖第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)切片機(jī)切片機(jī)(microtome):第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)在普通光學(xué)顯微鏡下，細(xì)胞結(jié)構(gòu)呈在普通光學(xué)顯微鏡下，細(xì)胞結(jié)構(gòu)呈，不易，不易看清?？辞濉?往往將標(biāo)本切片進(jìn)行往往將標(biāo)本切片進(jìn)行染色染色提高可辨程度提高可辨程度。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)紫外線顯微

2、鏡以紫外線紫外線顯微鏡以紫外線(波長(zhǎng)介于波長(zhǎng)介于400nm與與X射線之射線之間間)為光源，分辨率可提高為光源，分辨率可提高1倍，可以看到許多在普通光倍，可以看到許多在普通光學(xué)顯微鏡下看不到的膠體顆粒。學(xué)顯微鏡下看不到的膠體顆粒。此外，核酸和有些蛋白質(zhì)可吸收一定波長(zhǎng)的紫外線，此外，核酸和有些蛋白質(zhì)可吸收一定波長(zhǎng)的紫外線，因而這種顯微鏡可用來(lái)因而這種顯微鏡可用來(lái)測(cè)定細(xì)胞核中的核酸含量測(cè)定細(xì)胞核中的核酸含量。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)然而，波長(zhǎng)越短的紫外線越不易穿透普通玻璃，然而，波長(zhǎng)越短的紫外線越不易穿透普通玻璃，故必須用以特殊材料（如石英、螢石故必須用以特殊材料（如石英、螢石(CaF

3、2)、碳酸、碳酸鋰等）制造的光學(xué)玻璃來(lái)制作顯微鏡透鏡，鋰等）制造的光學(xué)玻璃來(lái)制作顯微鏡透鏡，造價(jià)較造價(jià)較高高。另外，紫外線顯微鏡還要求配置有照相裝置，另外，紫外線顯微鏡還要求配置有照相裝置，價(jià)格比較昂貴價(jià)格比較昂貴。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)實(shí)用性較差實(shí)用性較差這種顯微鏡使照明光線不能直接進(jìn)入物鏡，只允這種顯微鏡使照明光線不能直接進(jìn)入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡。許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)中央遮光板中央遮光板暗視野聚光器的設(shè)計(jì)原理暗視野聚光器的設(shè)計(jì)原理第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)視野的背景黑視野的背景黑物體的邊緣

4、亮物體的邊緣亮利用這種顯微鏡能見(jiàn)到小至利用這種顯微鏡能見(jiàn)到小至5nm的質(zhì)點(diǎn)，分的質(zhì)點(diǎn)，分辨率比普通顯微鏡高了辨率比普通顯微鏡高了40倍倍，有一些細(xì)胞器，如，有一些細(xì)胞器，如核、線粒體，均清晰可見(jiàn)。核、線粒體，均清晰可見(jiàn)。荷蘭物理學(xué)家荷蘭物理學(xué)家F. Zernike(1932)：提高了活細(xì)胞結(jié)提高了活細(xì)胞結(jié)構(gòu)的反差，從而解決了對(duì)活細(xì)胞觀察的難題。構(gòu)的反差，從而解決了對(duì)活細(xì)胞觀察的難題。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)(phase contrast microscope)特點(diǎn)：在聚光器或光源上加了一：在聚光器或光源上加了一環(huán)形光闌環(huán)形光闌(annular diaphragm), 在物鏡中加了

5、一在物鏡中加了一環(huán)形相板環(huán)形相板(annular phase plate)。上有一環(huán)形區(qū)，制成凹槽或上有一環(huán)形區(qū)，制成凹槽或凸起（亦可涂上特殊物質(zhì)）：凸起（亦可涂上特殊物質(zhì)）：環(huán)形區(qū)的設(shè)計(jì)深度（或高度）環(huán)形區(qū)的設(shè)計(jì)深度（或高度）恰好可使通過(guò)此區(qū)的光線提前恰好可使通過(guò)此區(qū)的光線提前或延后或延后1/41/4光程差。光程差。環(huán)形光闌環(huán)形光闌環(huán)形相板環(huán)形相板使透過(guò)聚光器的光使透過(guò)聚光器的光線形成線形成空心光錐空心光錐，焦聚到標(biāo)本上。焦聚到標(biāo)本上。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)根據(jù)設(shè)計(jì)，根據(jù)設(shè)計(jì)，只有未透過(guò)只有未透過(guò)標(biāo)本的直射光可通過(guò)相標(biāo)本的直射光可通過(guò)相板

6、環(huán)形區(qū)板環(huán)形區(qū)，而透過(guò)標(biāo)本而透過(guò)標(biāo)本的偏折光則由相板其他的偏折光則由相板其他部分通過(guò)部分通過(guò)。兩組光線和。兩組光線和軸后發(fā)生干涉現(xiàn)象。軸后發(fā)生干涉現(xiàn)象。兩組光線合軸后光波相減，振幅變小，形兩組光線合軸后光波相減，振幅變小，形成成暗反差（正反差正反差）結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗。結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗。未透過(guò)標(biāo)本的直射光（通過(guò)相板環(huán)形區(qū)未透過(guò)標(biāo)本的直射光（通過(guò)相板環(huán)形區(qū)）與）與透過(guò)標(biāo)本透過(guò)標(biāo)本的偏折光（由相板其他部分通過(guò)）的偏折光（由相板其他部分通過(guò)）和軸和軸后發(fā)生后發(fā)生干涉干涉：第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)如果為如果為凹形相板：-1/4-1/4 則兩組光波相加，振幅加大，形成則兩組光波相

7、加，振幅加大，形成亮反差（負(fù)反差）（負(fù)反差）標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮。標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)如果為如果為凸性相板：由于標(biāo)本的各種結(jié)構(gòu)的厚度和折射系數(shù)不同，在由于標(biāo)本的各種結(jié)構(gòu)的厚度和折射系數(shù)不同，在相差顯微鏡下顯示出不同的明暗度。相差顯微鏡下顯示出不同的明暗度。Nomarski (1952)在相差顯微鏡原理的基礎(chǔ)上在相差顯微鏡原理的基礎(chǔ)上發(fā)明的：又稱發(fā)明的：又稱Nomarski相差顯微鏡，其優(yōu)點(diǎn)是相差顯微鏡，其優(yōu)點(diǎn)是能能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)(differential inter

8、ference contrast (DIC) microscope)與相差顯微鏡相比，其標(biāo)本可略厚一點(diǎn)，折射與相差顯微鏡相比，其標(biāo)本可略厚一點(diǎn)，折射率差別更大。率差別更大。DIC顯微鏡首先顯微鏡首先DIC利用的是利用的是偏振光偏振光。此外，。此外，除了物鏡外，還增加了四個(gè)光學(xué)組件：除了物鏡外，還增加了四個(gè)光學(xué)組件：偏振器偏振器(polarizer)、DIC棱鏡棱鏡、DIC滑行器滑行器和和檢偏器檢偏器(analyzer)。DIC顯微鏡使細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)立體感特別強(qiáng)，顯微鏡使細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)立體感特別強(qiáng)，適合于顯微操作。目前像適合于顯微操作。目前像基因注入基因注入、核移植核移植等生物等生物工程的顯微操

9、作常在這種顯微鏡下進(jìn)行。工程的顯微操作常在這種顯微鏡下進(jìn)行。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)DIC顯微鏡顯微鏡暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡相差顯微鏡相差顯微鏡普通顯微鏡普通顯微鏡第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)分裂細(xì)胞的分裂細(xì)胞的免疫熒光圖像免疫熒光圖像不同熒光染料不同熒光染料標(biāo)記標(biāo)記抗抗 體體抗原抗原(細(xì)胞的蛋白質(zhì)成分細(xì)胞的蛋白質(zhì)成分)特異性結(jié)合特異性結(jié)合第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)(Laser Confocal Microscope, LCM)光源：光源：通過(guò)共聚焦可進(jìn)行光學(xué)切片通過(guò)共聚焦可進(jìn)行光學(xué)切片對(duì)固相、液相物體均可進(jìn)行觀察對(duì)固相、液相物體均可進(jìn)行觀察特點(diǎn)：特點(diǎn)：激

10、光激光Q550MW型型LCM第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)分辨力的概念及其提高方法分辨力的概念及其提高方法N.A.0.612D 分辨力分辨力(resolution)是指是指顯微鏡能將近鄰的兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)顯微鏡能將近鄰的兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)分辨清楚的能力分辨清楚的能力，通常是用相鄰兩點(diǎn)間的距離來(lái)表示，通常是用相鄰兩點(diǎn)間的距離來(lái)表示，可通過(guò)公式換算出：可通過(guò)公式換算出：可見(jiàn)光波長(zhǎng)為可見(jiàn)光波長(zhǎng)為400700nm，顯微鏡分辨率的最小數(shù)值，顯微鏡分辨率的最小數(shù)值不會(huì)小于不會(huì)小于0.2 m，這一數(shù)值是光學(xué)顯微鏡分辨率的極限。，這一數(shù)值是光學(xué)顯微鏡分辨率的極限。2innN.A.s鏡口率的大小決定于鏡口角的大小鏡口率的

11、大小決定于鏡口角的大小和物鏡與標(biāo)本間介質(zhì)折射率的大小和物鏡與標(biāo)本間介質(zhì)折射率的大小第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)限制顯微鏡分辨率的關(guān)鍵因素是限制顯微鏡分辨率的關(guān)鍵因素是光的波長(zhǎng)光的波長(zhǎng)，一般光學(xué)顯，一般光學(xué)顯微鏡的最大放大倍數(shù)為微鏡的最大放大倍數(shù)為10001500 。小 于小 于 0 . 2 m 的 一 些 細(xì) 微 結(jié) 構(gòu) ， 稱 為的 一 些 細(xì) 微 結(jié) 構(gòu) ， 稱 為 亞 顯 微 結(jié) 構(gòu)亞 顯 微 結(jié) 構(gòu)(submicroscopic structure)或或超微結(jié)構(gòu)超微結(jié)構(gòu)(ultrastructure)，在光，在光學(xué)顯微鏡下無(wú)法看清。學(xué)顯微鏡下無(wú)法看清。要想看清這些結(jié)構(gòu)，就必須

12、選擇波長(zhǎng)更短的光源，以要想看清這些結(jié)構(gòu)，就必須選擇波長(zhǎng)更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率。提高顯微鏡的分辨率。oD90sin68. 110550612. 03放大倍數(shù)放大倍數(shù)= =顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率人肉眼的分辨率人肉眼的分辨率0.2 m鏡口率鏡口率折射率折射率光源波長(zhǎng)光源波長(zhǎng)(nm)第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)名名 稱稱 波波 長(zhǎng)長(zhǎng) (nm) 可可見(jiàn)見(jiàn)光光 760-390 紫紫外外光光 390-13 X 射射線線 13-0.05 射射線線 1-0.005 電電子子束束: 100V 0.123 10,000V 0.0122 100,000V 0.00387 RuskaRuska

13、(19331938)便選擇了電子束為光源來(lái)突破便選擇了電子束為光源來(lái)突破光學(xué)顯微鏡分辨率的極限，發(fā)明了光學(xué)顯微鏡分辨率的極限，發(fā)明了透射電子顯微鏡透射電子顯微鏡(transmission electron microscope, TEM)。電子束的波長(zhǎng)要比可見(jiàn)光和紫外光短得多，電子束電子束的波長(zhǎng)要比可見(jiàn)光和紫外光短得多，電子束的波長(zhǎng)與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說(shuō)電的波長(zhǎng)與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說(shuō)電壓越高波長(zhǎng)越短。壓越高波長(zhǎng)越短。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)V1第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)電電 鏡鏡光光 鏡鏡電子束電子束可見(jiàn)光可見(jiàn)光電磁透鏡電磁透鏡玻璃

14、透鏡玻璃透鏡電磁聚焦電磁聚焦機(jī)械聚焦機(jī)械聚焦超薄切片超薄切片(0.05 m)石蠟切片石蠟切片(110 m)光光 源源透透 鏡鏡聚焦方式聚焦方式切片厚度切片厚度圖圖 像像彩色圖像彩色圖像黑白圖像黑白圖像第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)由于電子束不能透過(guò)玻璃，因此用于電鏡的標(biāo)本須由于電子束不能透過(guò)玻璃，因此用于電鏡的標(biāo)本須制成厚度僅有制成厚度僅有0.05 m的的超薄切片超薄切片，并放在銅網(wǎng)上。，并放在銅網(wǎng)上。這種切片需要用超薄切片機(jī)這種切片需要用超薄切片機(jī)制作。電子顯微鏡的放大倍制作。電子顯微鏡的放大倍數(shù)最高可達(dá)近數(shù)最高可達(dá)近百萬(wàn)倍。銅網(wǎng)銅網(wǎng)第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)透射式電子顯

15、微鏡透射式電子顯微鏡(TEM)第第一一節(jié)節(jié) 形形態(tài)態(tài)觀觀察察技技術(shù)術(shù)它是將標(biāo)本表面上發(fā)射出的它是將標(biāo)本表面上發(fā)射出的次級(jí)電子次級(jí)電子，被帶樣，被帶樣電荷的柵極收集后，即向電荷的柵極收集后，即向電子顯象管電子顯象管發(fā)送信號(hào)，在發(fā)送信號(hào)，在熒光屏上顯示出熒光屏上顯示出與電子束同步的掃描圖像與電子束同步的掃描圖像。圖像為。圖像為立體形象，反映了標(biāo)本表面的真實(shí)結(jié)構(gòu)。，反映了標(biāo)本表面的真實(shí)結(jié)構(gòu)。用來(lái)觀察標(biāo)本的用來(lái)觀察標(biāo)本的表面形態(tài)結(jié)構(gòu)表面形態(tài)結(jié)構(gòu)。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)(scanning electron microscope, SEM)掃掃描描式式電電子子顯顯微微鏡鏡第第一一節(jié)節(jié) 形形

16、態(tài)態(tài)觀觀察察技技術(shù)術(shù)耳聽(tīng)毛的掃描電鏡圖像耳聽(tīng)毛的掃描電鏡圖像第第一一節(jié)節(jié) 形形態(tài)態(tài)觀觀察察技技術(shù)術(shù)其關(guān)鍵部件是有一個(gè)其關(guān)鍵部件是有一個(gè)加上一定電壓的精密探針加上一定電壓的精密探針，當(dāng)探針，當(dāng)探針接近物質(zhì)時(shí)，由于接近物質(zhì)時(shí)，由于隧道效應(yīng)隧道效應(yīng)而有電子飛出，從而在探而有電子飛出，從而在探針與物質(zhì)之間有電流通過(guò)。針與物質(zhì)之間有電流通過(guò)。BinnigBinnig、RohrerRohrer等等(1981)發(fā)明：發(fā)明：據(jù)量子力學(xué)中隧道效應(yīng)設(shè)計(jì)，用來(lái)顯示晶體表面原子布陣據(jù)量子力學(xué)中隧道效應(yīng)設(shè)計(jì)，用來(lái)顯示晶體表面原子布陣第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)(scanning tunneling micro

17、scope, STM)當(dāng)探針沿物質(zhì)表面掃描時(shí)，使探針與物質(zhì)表當(dāng)探針沿物質(zhì)表面掃描時(shí)，使探針與物質(zhì)表面間的距離不斷發(fā)生改變，從而引起電流不斷面間的距離不斷發(fā)生改變，從而引起電流不斷發(fā)生改變。將電流的這種改變圖象化，即可顯發(fā)生改變。將電流的這種改變圖象化，即可顯示出原子水平的凹凸形形態(tài)。示出原子水平的凹凸形形態(tài)。探針探針物質(zhì)物質(zhì)第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)掃描隧道顯微鏡的分辨率很高（掃描隧道顯微鏡的分辨率很高（橫向?yàn)闄M向?yàn)?.1-0.2nm,縱向可達(dá)縱向可達(dá) 0.001nm）。）。掃描隧道顯微鏡能直接觀察掃描隧道顯微鏡能直接觀察生物大分子生物大分子(如如DNA、RNA和蛋白質(zhì)等和蛋白質(zhì)等

18、)的原子布陣的原子布陣，也能觀察一些，也能觀察一些生物結(jié)構(gòu)生物結(jié)構(gòu)(如生物膜、細(xì)胞壁等如生物膜、細(xì)胞壁等)的原子排列的原子排列。在生物學(xué)研究中發(fā)。在生物學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用，將把生物學(xué)研究推進(jìn)到揮著重要作用，將把生物學(xué)研究推進(jìn)到納米科學(xué)水平納米科學(xué)水平。其優(yōu)越之處：其優(yōu)越之處：三態(tài)三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可物質(zhì)均可進(jìn)行觀察進(jìn)行觀察。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)掃描隧道電子顯微鏡下掃描隧道電子顯微鏡下金原子的晶格排列圖像金原子的晶格排列圖像第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)亦稱冰凍斷裂亦稱冰凍斷裂(freeze-fracture)，是研究生物膜內(nèi)，是研究

19、生物膜內(nèi)部結(jié)構(gòu)的一種有用的技術(shù)，關(guān)于膜結(jié)構(gòu)的許多資料即部結(jié)構(gòu)的一種有用的技術(shù)，關(guān)于膜結(jié)構(gòu)的許多資料即是利用這種方法取得的。是利用這種方法取得的。冰凍斷裂技術(shù)也是研究細(xì)胞內(nèi)部各種細(xì)胞器結(jié)構(gòu)冰凍斷裂技術(shù)也是研究細(xì)胞內(nèi)部各種細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的有用手段。的有用手段。第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)(freeze-etching)將標(biāo)本于將標(biāo)本于-100干冰中或干冰中或-196液氮中，液氮中，超低溫冰凍超低溫冰凍。 然后用冷刀驟然將標(biāo)本沖斷開(kāi)，升溫后冰在真空條件下然后用冷刀驟然將標(biāo)本沖斷開(kāi)，升溫后冰在真空條件下迅即升華，暴露出了斷裂面結(jié)構(gòu)迅即升華，暴露出了斷裂面結(jié)構(gòu)蝕刻蝕刻(etching)。蝕刻蝕刻斷

20、裂斷裂第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)蝕刻后，再向斷裂上噴涂一層蝕刻后，再向斷裂上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下，此膜即為把碳和鉑的膜剝下，此膜即為復(fù)膜復(fù)膜(replica)。復(fù)膜復(fù)膜復(fù)膜顯示出了標(biāo)本蝕刻面的形復(fù)膜顯示出了標(biāo)本蝕刻面的形態(tài)，可置于透射電鏡下觀察。態(tài)，可置于透射電鏡下觀察。電鏡下的影像即代表標(biāo)本中細(xì)電鏡下的影像即代表標(biāo)本中細(xì)胞斷裂面處的結(jié)構(gòu)。胞斷裂面處的結(jié)構(gòu)。第第一一節(jié)節(jié) 形形態(tài)態(tài)觀觀察察技技術(shù)術(shù)(3) 細(xì)胞冰凍斷裂后的電鏡圖像細(xì)胞冰凍斷裂后的電鏡圖像第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)觀察技術(shù)形態(tài)觀察技術(shù)電鏡三維重構(gòu)電鏡三維重構(gòu)冷凍蝕刻和冷

21、凍斷裂冷凍蝕刻和冷凍斷裂負(fù)染技術(shù)負(fù)染技術(shù)超薄切片超薄切片包埋包埋切片切片固定固定染色染色掃描電鏡技術(shù)掃描電鏡技術(shù)組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法(histochemical and cytochemical staining method)依據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理，對(duì)無(wú)色依據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理，對(duì)無(wú)色透明細(xì)胞的某些成分進(jìn)行定性和定位研究。透明細(xì)胞的某些成分進(jìn)行定性和定位研究。細(xì)胞化學(xué)染色是利用染色劑可同細(xì)胞的某種成份發(fā)生細(xì)胞化學(xué)染色是利用染色劑可同細(xì)胞的某種成份發(fā)生反應(yīng)而著色的原理，從而得以對(duì)某種成份進(jìn)行研究和分析。反應(yīng)而著色的原理，從而得以對(duì)某種成份進(jìn)行研究和分析。利用這種方法對(duì)細(xì)胞的

22、各種成分幾乎都能顯示，利用這種方法對(duì)細(xì)胞的各種成分幾乎都能顯示，包括無(wú)機(jī)物、醛、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸、酶等包括無(wú)機(jī)物、醛、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸、酶等。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)最典型的組織化學(xué)顯示法是最典型的組織化學(xué)顯示法是Feulgen反應(yīng)顯示法反應(yīng)顯示法(Feulgen reaction)。此法由。此法由Feulgen和和Rossenbeck (1924)發(fā)明，對(duì)發(fā)明，對(duì)DNA的反應(yīng)具有高度專一性。的反應(yīng)具有高度專一性。其原理是其原理是: : 標(biāo)本經(jīng)稀鹽酸水解后，標(biāo)本經(jīng)稀鹽酸水解后，DNA分子中的分子中的嘌呤堿基被解離，從而在核糖的一端出現(xiàn)了醛基。嘌呤堿基被解離

23、，從而在核糖的一端出現(xiàn)了醛基。Schiff試劑中的無(wú)色品紅與醛基反應(yīng)，形成含有醌基的試劑中的無(wú)色品紅與醛基反應(yīng)，形成含有醌基的化合物，醌基為發(fā)色團(tuán)，呈現(xiàn)出化合物，醌基為發(fā)色團(tuán)，呈現(xiàn)出紫紅色紫紅色。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)免疫細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用免疫細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特同特定定抗原結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行專一定位測(cè)定的技術(shù)。結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行專一定位測(cè)定的技術(shù)。如果將抗體結(jié)合上如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物標(biāo)記物，再與組織中的抗原發(fā)生，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。中的部位

24、。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)常用的標(biāo)記物有常用的標(biāo)記物有熒光素?zé)晒馑睾秃兔该福簶?biāo)記熒光素的稱為標(biāo)記熒光素的稱為免疫熒光法免疫熒光法(immunofluorescent technique)，常用的螢光素有異硫氰酸熒光素，常用的螢光素有異硫氰酸熒光素(FITC)、羅、羅丹明丹明(rhodamine)等。等。標(biāo)記酶的稱為標(biāo)記酶的稱為酶標(biāo)免疫法酶標(biāo)免疫法(enzyme-labelled antibody method)，常用的酶有辣根過(guò)氧化物酶，常用的酶有辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase)等，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成等，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積

25、物或有色物，從而顯示出抗原的存在部位。不透明的沉積物或有色物，從而顯示出抗原的存在部位。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)抗體與抗原的結(jié)合方法可分為以下兩種：抗體與抗原的結(jié)合方法可分為以下兩種：第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)直接法直接法間接法間接法間間接接免免疫疫細(xì)細(xì)胞胞化化學(xué)學(xué)法法的的原原理理示示意意圖圖次級(jí)次級(jí)抗體抗體初級(jí)初級(jí)抗體抗體標(biāo)記物標(biāo)記物第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)第一抗體（一抗）第一抗體（一抗）第二抗體（二抗）第二抗體（二抗）第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)此顏色深淺可用酶標(biāo)儀精確地測(cè)定出來(lái)此顏色深淺可用酶標(biāo)儀精確地測(cè)定

26、出來(lái)酶與底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物，顏色深淺代表了反應(yīng)的強(qiáng)弱酶與底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物，顏色深淺代表了反應(yīng)的強(qiáng)弱鹵蟲(chóng)孵化腺細(xì)胞的鹵蟲(chóng)孵化腺細(xì)胞的ELISA染色照片染色照片(樊樊廷俊等廷俊等, 2003)第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)1為轉(zhuǎn)GFP基因的煙草單細(xì)胞；2為轉(zhuǎn)SCaM1-GFP融合基因的煙草單細(xì)胞；3為轉(zhuǎn)SCaM4-GFP融合基因的煙草單細(xì)胞。 質(zhì)壁分離后轉(zhuǎn)基因煙草單細(xì)胞的激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞壁細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞壁細(xì)胞壁細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞膜細(xì)胞壁細(xì)胞核細(xì)胞膜放射性同位素發(fā)射出的各種射線能使照相乳膠中放射性同位素發(fā)射出的各種射線能使照相乳膠中的溴化銀晶體還原的溴

27、化銀晶體還原(感光感光) 。利用放射性物質(zhì)使照相乳膠。利用放射性物質(zhì)使照相乳膠膜產(chǎn)生該物質(zhì)自身影像的技術(shù)，稱為膜產(chǎn)生該物質(zhì)自身影像的技術(shù)，稱為放射自顯影術(shù)放射自顯影術(shù)。放射自顯影的切片用染料染色后，便可在顯微鏡放射自顯影的切片用染料染色后，便可在顯微鏡下對(duì)標(biāo)記上放射性的化合物進(jìn)行定位或定量測(cè)定。下對(duì)標(biāo)記上放射性的化合物進(jìn)行定位或定量測(cè)定。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)(autoradiography)由于有機(jī)大分子均含有碳、氫原子，故實(shí)驗(yàn)室一般由于有機(jī)大分子均含有碳、氫原子，故實(shí)驗(yàn)室一般常選用常選用14C和和3H標(biāo)記標(biāo)記(14C和和3H均為弱均為弱放射性同位素，半放射性同位素，

28、半衰期長(zhǎng)衰期長(zhǎng): 14C為為5730年年; 3H為為12.26年年)。一般一般常用常用3H胸腺嘧啶脫氧核苷來(lái)顯示胸腺嘧啶脫氧核苷來(lái)顯示DNA，用，用3H-尿嘧啶核苷顯示尿嘧啶核苷顯示RNA。在研究。在研究蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)和和粘多糖粘多糖時(shí)，則分時(shí)，則分別選用別選用3H-氨基酸和氨基酸和3H-甘露糖甘露糖、3H-巖藻糖巖藻糖等。等。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)常用常用3H胸腺嘧啶脫氧核苷顯示胸腺嘧啶脫氧核苷顯示DNA的放射自顯影圖像的放射自顯影圖像第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)放射自顯影技術(shù)與電鏡技術(shù)結(jié)合，也可進(jìn)行放射自顯影技術(shù)與電鏡技術(shù)結(jié)合，也可進(jìn)行電鏡自顯影（e

29、lectron-microscopic autoradiography）。）。電鏡自顯影照片電鏡自顯影照片要研究細(xì)胞的各中結(jié)構(gòu)和成分的化學(xué)性質(zhì)和生理功要研究細(xì)胞的各中結(jié)構(gòu)和成分的化學(xué)性質(zhì)和生理功能，需要把它們分離和抽提出來(lái)進(jìn)行研究。能，需要把它們分離和抽提出來(lái)進(jìn)行研究。離心是研究亞細(xì)胞成分和生物大分子的必要手段。離心是研究亞細(xì)胞成分和生物大分子的必要手段。細(xì)胞勻漿后，懸液中含有各種細(xì)胞器（如細(xì)胞核、細(xì)胞勻漿后，懸液中含有各種細(xì)胞器（如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體等）及各種大分子。線粒體、高爾基體、溶酶體和微體等）及各種大分子。要想把它們一一分離開(kāi)，只利用普通低速離心機(jī)是很難要想把它們

30、一一分離開(kāi)，只利用普通低速離心機(jī)是很難做到的。做到的。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)離心機(jī)結(jié)構(gòu)與原理示意圖離心機(jī)結(jié)構(gòu)與原理示意圖馬達(dá)馬達(dá)冷凍冷凍真空真空沉降物沉降物轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)子 裝甲室裝甲室第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)轉(zhuǎn)速為轉(zhuǎn)速為1000025000r/min（離心力小于（離心力小于89000g）的離心機(jī)稱為）的離心機(jī)稱為高速離心機(jī)高速離心機(jī)；轉(zhuǎn)速超過(guò)轉(zhuǎn)速超過(guò)25000r/min（離心力大于（離心力大于89000g）者）者稱為稱為超速離心機(jī)超速離心機(jī)。目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)80000r/min，離心力超過(guò)離心力超過(guò)500000g。

31、第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)被離心的物質(zhì)所受的被離心的物質(zhì)所受的離心力不僅與不僅與轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)速有關(guān)，而且有關(guān)，而且還同還同物質(zhì)到轉(zhuǎn)頭中心的距離物質(zhì)到轉(zhuǎn)頭中心的距離有關(guān)。因此要準(zhǔn)確表示離心有關(guān)。因此要準(zhǔn)確表示離心條件要用離心力，而不單是轉(zhuǎn)速。條件要用離心力，而不單是轉(zhuǎn)速。離心力離心力(g)是由是由角速度和和旋轉(zhuǎn)半徑(R)的大小決定的，的大小決定的，單位為克，計(jì)算公式如下單位為克，計(jì)算公式如下:g = 2R(2 n)23600 980 Rg =第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)各種顆粒在離心場(chǎng)中的沉降速度不同，這取決顆粒各種顆粒在離心場(chǎng)中的沉降速度不同，這取決顆粒的的大小

32、大小、形狀形狀和和密度密度，也與，也與離心力離心力以及以及懸液介質(zhì)的密度懸液介質(zhì)的密度和和粘度粘度有關(guān)。有關(guān)。式中式中S為沉降系數(shù)為沉降系數(shù)(秒秒)；R為沉降顆粒到轉(zhuǎn)頭為沉降顆粒到轉(zhuǎn)頭中心的距離中心的距離(半徑，半徑，cm)；為角速度，以每為角速度，以每秒轉(zhuǎn)動(dòng)的弧度表示；秒轉(zhuǎn)動(dòng)的弧度表示；t為時(shí)間為時(shí)間(秒秒)。當(dāng)顆粒受到的凈離心力（離心力與浮力之差）與溶當(dāng)顆粒受到的凈離心力（離心力與浮力之差）與溶劑的摩擦阻力達(dá)到平衡時(shí)，單位離離心場(chǎng)強(qiáng)度的沉降速度劑的摩擦阻力達(dá)到平衡時(shí)，單位離離心場(chǎng)強(qiáng)度的沉降速度為定值，此即為為定值，此即為沉降系數(shù)沉降系數(shù)(sedimentation coefficient,

33、 S)。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)根據(jù)分離的對(duì)象和目的不同，超離心技術(shù)可分為兩大類：根據(jù)分離的對(duì)象和目的不同，超離心技術(shù)可分為兩大類：用于制備和純化亞細(xì)胞成分用于制備和純化亞細(xì)胞成分和大分子，目的是制備樣品和大分子，目的是制備樣品分析和測(cè)定制劑中大分子的種分析和測(cè)定制劑中大分子的種類和性質(zhì)類和性質(zhì)( (浮力密度和分子量等浮力密度和分子量等) )(preparative cetrifugation)(analytical centrifugation)第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)利用肝臟制備利用肝臟制備各種亞細(xì)胞組各種亞細(xì)胞組分的制備離心分的制備離心過(guò)程示意

34、圖過(guò)程示意圖勻漿物勻漿物肝臟肝臟上清夜上清夜完整完整細(xì)胞細(xì)胞完整完整細(xì)胞細(xì)胞1000g20min核核線粒體線粒體溶酶體溶酶體過(guò)氧化物酶體過(guò)氧化物酶體微粒體微粒體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)100000g120min105000g20minDNase靜置靜置20min10000g20min核糖體核糖體第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)CsCl密度密度梯度梯度離心離心蔗糖蔗糖密度密度梯度梯度離心離心第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù) 低速離心低速離心 中速離心中速離心 高速離心高速離心 超高速離心超高速離心 細(xì)胞勻漿細(xì)胞勻漿細(xì)胞細(xì)胞核仁核仁細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架大細(xì)胞器大細(xì)胞器小細(xì)胞器小細(xì)胞器核

35、糖體核糖體大分子大分子 離心離心 樣品樣品蔗糖的穩(wěn)定梯度蔗糖的穩(wěn)定梯度慢速沉降成分慢速沉降成分快速沉降成分快速沉降成分分畫(huà)分畫(huà)樣品樣品蔗糖的不蔗糖的不連續(xù)梯度連續(xù)梯度低浮力密低浮力密度成分度成分高浮力密高浮力密度成分度成分流式細(xì)胞分選術(shù)流式細(xì)胞分選術(shù)(fluorescence-associated cell sorting, FACS)激光激光細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液鞘液鞘液液滴加電信號(hào)液滴加電信號(hào)探測(cè)器探測(cè)器超聲波振搖器超聲波振搖器加負(fù)電的液滴加負(fù)電的液滴加正電的液滴加正電的液滴細(xì)胞收集容器細(xì)胞收集容器細(xì)胞收集容器細(xì)胞收集容器廢液容器（未探測(cè)細(xì)胞）廢液容器（未探測(cè)細(xì)胞）第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)

36、生物化學(xué)分析技術(shù)核酸雜交原理示意圖核酸雜交原理示意圖第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)原理：具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸：具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過(guò)氫鍵結(jié)合，形成分子片段，在適當(dāng)條件下，通過(guò)氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或或RNA-RNA雜交的雙鏈分雜交的雙鏈分子。子。這種技術(shù)可用來(lái)測(cè)定單鏈分子核苷酸序列間是這種技術(shù)可用來(lái)測(cè)定單鏈分子核苷酸序列間是否具有否具有互補(bǔ)關(guān)系互補(bǔ)關(guān)系。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)(molecular hybridization)在在高高pH值值下，染色體下，染色體DNA解鏈，帶標(biāo)記的

37、核酸解鏈，帶標(biāo)記的核酸探針即可與染色體一定部位的互補(bǔ)單鏈探針即可與染色體一定部位的互補(bǔ)單鏈DNA雜交。雜交。這種方法既可檢測(cè)這種方法既可檢測(cè)DNA序列序列，也可檢測(cè)，也可檢測(cè)RNA序序列列。既可用。既可用放射性探針?lè)ǚ派湫蕴结樂(lè)?，又可使用，又可使用免疫探針?lè)庖咛结樂(lè)?。在不破壞?xì)胞或細(xì)胞器的情況下，用核酸探針在不破壞細(xì)胞或細(xì)胞器的情況下，用核酸探針檢測(cè)特定核苷酸序列在染色體上的精確位置的技術(shù)，檢測(cè)特定核苷酸序列在染色體上的精確位置的技術(shù)，稱為稱為原位雜交原位雜交(in situ hybridization)。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)熒光原位雜交熒光原位雜交 (fluore

38、scence in situ hybridization, FISH):FISH技術(shù)的原理圖解技術(shù)的原理圖解第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)芯片芯片根據(jù)雙鏈根據(jù)雙鏈DNA的變性與復(fù)性和分子雜交原理設(shè)計(jì)出的變性與復(fù)性和分子雜交原理設(shè)計(jì)出的技術(shù)，目的是將極微量的技術(shù)，目的是將極微量DNA大量擴(kuò)增。大量擴(kuò)增。原 理：將：將DNA片段經(jīng)過(guò)若干次解鏈和復(fù)性循環(huán)，大片段經(jīng)過(guò)若干次解鏈和復(fù)性循環(huán)，大量擴(kuò)增，甚至可擴(kuò)增到十幾億倍，以便于對(duì)已知量擴(kuò)增，甚至可擴(kuò)增到十幾億倍，以便于對(duì)已知DNA片片段進(jìn)行分析，如段進(jìn)行分析，如基因分析基因分析、序列分析序列分析、進(jìn)化關(guān)系分析進(jìn)化關(guān)系分析和和臨床診斷臨床

39、診斷等。等。第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)(多聚酶鏈反應(yīng)多聚酶鏈反應(yīng), polymerase chain reaction)第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)經(jīng)過(guò)經(jīng)過(guò)PCR獲得的大量獲得的大量DNA片斷都是以原有的微量片斷都是以原有的微量DNA片斷為模板擴(kuò)增而來(lái)，故此技術(shù)亦稱為片斷為模板擴(kuò)增而來(lái)，故此技術(shù)亦稱為分子克隆技分子克隆技術(shù)術(shù)(molecular cloning)。用于細(xì)胞組分的分離及其純化用于細(xì)胞組分的分離及其純化第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)凝膠過(guò)濾柱層析凝膠過(guò)濾柱層析第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)離子交換柱層析離子交換柱

40、層析親合層析親合層析第二節(jié)第二節(jié) 生物化學(xué)分析技術(shù)生物化學(xué)分析技術(shù)細(xì)胞的質(zhì)膜內(nèi)外兩側(cè)由于陽(yáng)離子濃度不同而形細(xì)胞的質(zhì)膜內(nèi)外兩側(cè)由于陽(yáng)離子濃度不同而形成濃度梯度差（常為外高內(nèi)低）成濃度梯度差（常為外高內(nèi)低）, 從而在質(zhì)膜兩側(cè)造從而在質(zhì)膜兩側(cè)造成 一 定 的 電 位 差 ， 該 電 位 差 即 稱 為成 一 定 的 電 位 差 ， 該 電 位 差 即 稱 為 膜 電 位膜 電 位(membrane potential)。膜電位的大小因膜電位的大小因細(xì)胞種類細(xì)胞種類不同而異，范圍在不同而異，范圍在 -20-100mV之間，負(fù)值表示之間，負(fù)值表示膜內(nèi)與膜外相比為負(fù)膜內(nèi)與膜外相比為負(fù)。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生

41、理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)因而因而膜電位的變化反映了細(xì)胞的生理變膜電位的變化反映了細(xì)胞的生理變化化，測(cè)定膜電位的數(shù)值可作為，測(cè)定膜電位的數(shù)值可作為細(xì)胞生理狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。在神經(jīng)傳導(dǎo)和肌肉收縮運(yùn)動(dòng)中的一個(gè)指標(biāo)。在神經(jīng)傳導(dǎo)和肌肉收縮運(yùn)動(dòng)中膜電位的變化起著極其重要的作用。膜電位的變化起著極其重要的作用。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞體積微小，要使用極其微細(xì)的電極進(jìn)行測(cè)量膜電細(xì)胞體積微小，要使用極其微細(xì)的電極進(jìn)行測(cè)量膜電位，這種電極稱為位，這種電極稱為微電極微電極。微電極的構(gòu)造圖解微電極的構(gòu)造圖解金屬絲金屬絲(鍍有氯化銀的銀絲鍍有氯化銀的銀絲)玻璃毛細(xì)管玻璃毛細(xì)管電解質(zhì)溶液電解質(zhì)溶液(KC

42、l)微電極是由用玻璃毛細(xì)管拉制成的細(xì)管和插入一條金微電極是由用玻璃毛細(xì)管拉制成的細(xì)管和插入一條金屬絲組合而成。屬絲組合而成。用于插入細(xì)胞中的微電極的直徑不超過(guò)用于插入細(xì)胞中的微電極的直徑不超過(guò)1 m。微電極。微電極通過(guò)導(dǎo)線和示波器或大電位計(jì)相連。通過(guò)導(dǎo)線和示波器或大電位計(jì)相連。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)(microelectrode)V電位計(jì)電位計(jì)( (或示波器或示波器) )微電極微電極細(xì)胞膜細(xì)胞膜核核細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)細(xì)細(xì) 胞胞測(cè)量時(shí)使用一對(duì)微電極，一個(gè)插入細(xì)胞內(nèi)，另一個(gè)測(cè)量時(shí)使用一對(duì)微電極，一個(gè)插入細(xì)胞內(nèi)，另一個(gè)置于細(xì)胞外的介質(zhì)中，這樣即可顯示或記錄膜電位的變置于細(xì)胞外的介質(zhì)中，

43、這樣即可顯示或記錄膜電位的變化。化。神經(jīng)細(xì)胞的靜息電位和動(dòng)作電位神經(jīng)細(xì)胞的靜息電位和動(dòng)作電位第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)微電極技術(shù)也可用于測(cè)量細(xì)胞內(nèi)局部的某種微電極技術(shù)也可用于測(cè)量細(xì)胞內(nèi)局部的某種離子濃度，進(jìn)行著種測(cè)量時(shí)兩個(gè)位電極都要插入細(xì)離子濃度，進(jìn)行著種測(cè)量時(shí)兩個(gè)位電極都要插入細(xì)胞內(nèi)。胞內(nèi)。V測(cè)量某種離子在細(xì)胞內(nèi)的局部濃度時(shí)測(cè)量某種離子在細(xì)胞內(nèi)的局部濃度時(shí)離子是通過(guò)膜上的離子是通過(guò)膜上的離子通道（親水小孔）進(jìn)出細(xì)胞（親水小孔）進(jìn)出細(xì)胞的。為了檢測(cè)單個(gè)特定離子通道的性質(zhì)和部位，德國(guó)馬的。為了檢測(cè)單個(gè)特定離子通道的性質(zhì)和部位，德國(guó)馬普研究院的普研究院的E. Neher和和B. S

44、akmann經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期合作研究，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期合作研究，終于在終于在1976年研制成功了可檢測(cè)極低濃度的無(wú)機(jī)離子通年研制成功了可檢測(cè)極低濃度的無(wú)機(jī)離子通過(guò)膜通道的過(guò)膜通道的膜片鉗位記錄技術(shù)。該技術(shù)的主要技術(shù)關(guān)鍵：可記錄通過(guò)細(xì)胞微小質(zhì)膜片該技術(shù)的主要技術(shù)關(guān)鍵：可記錄通過(guò)細(xì)胞微小質(zhì)膜片段的段的微弱電流微弱電流(1.01.2 10-11A)。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)(patch-clamp recording)檢測(cè)時(shí)，用內(nèi)經(jīng)約為檢測(cè)時(shí)，用內(nèi)經(jīng)約為1 m的玻的玻璃管電極將細(xì)胞質(zhì)膜緊緊吸住，璃管電極將細(xì)胞質(zhì)膜緊緊吸住，或拉下來(lái)，以測(cè)定進(jìn)入管內(nèi)的離或拉下來(lái)，以測(cè)定進(jìn)入管內(nèi)的離子的種類和數(shù)量，從而

45、表明離子子的種類和數(shù)量，從而表明離子通道的性質(zhì)和功能。通道的性質(zhì)和功能。單 個(gè) 離 子 通 道 的 直 徑 約 為單 個(gè) 離 子 通 道 的 直 徑 約 為0.50.6nm，膜電位的變化可引，膜電位的變化可引起離子通道的開(kāi)啟或關(guān)閉，膜片起離子通道的開(kāi)啟或關(guān)閉，膜片鉗位技術(shù)能檢測(cè)出這種變化。鉗位技術(shù)能檢測(cè)出這種變化。玻璃管玻璃管電極電極第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)膜片鉗位記錄技術(shù)中幾種常用的實(shí)驗(yàn)方法膜片鉗位記錄技術(shù)中幾種常用的實(shí)驗(yàn)方法第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)膽囊炎膽囊炎Cl-通道；通道；癲癇癲癇Na+和和K+通道；通道；心血管病心血管病Ca2+通道；通道；神經(jīng)失常

46、神經(jīng)失常Ca2+通道。通道。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)有些疾病與離子通道失常有關(guān)有些疾病與離子通道失常有關(guān)，例如，例如膜片制導(dǎo)技術(shù)對(duì)許多膜片制導(dǎo)技術(shù)對(duì)許多因離子通道失常而引起的因離子通道失常而引起的疾病的診斷和治療疾病的診斷和治療有著重要的應(yīng)用價(jià)值。有著重要的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)在已根據(jù)該技術(shù)的理論和技術(shù)研制出了許多有效的藥物。細(xì)胞表面帶有許多荷電基團(tuán)，有的為正細(xì)胞表面帶有許多荷電基團(tuán)，有的為正電荷，有的為負(fù)電荷，正負(fù)相抵電荷，有的為負(fù)電荷，正負(fù)相抵總靜電荷為總靜電荷為負(fù)值負(fù)值，因而細(xì)胞在懸液中總是向電場(chǎng)的正極，因而細(xì)胞在懸液中總是向電場(chǎng)的正極移動(dòng)，細(xì)胞在外加電場(chǎng)的作用下發(fā)生泳動(dòng)的移動(dòng)

47、，細(xì)胞在外加電場(chǎng)的作用下發(fā)生泳動(dòng)的現(xiàn)象稱為現(xiàn)象稱為細(xì)胞電泳細(xì)胞電泳(cell eletrophoresis)。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量有所不同，故在一定的電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同。有所不同，故在一定的電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同。在恒定的電場(chǎng)條件下，同種細(xì)胞的電泳速度相當(dāng)在恒定的電場(chǎng)條件下，同種細(xì)胞的電泳速度相當(dāng)穩(wěn)定，因而可通過(guò)測(cè)定電泳速度來(lái)推算出細(xì)胞的穩(wěn)定，因而可通過(guò)測(cè)定電泳速度來(lái)推算出細(xì)胞的 電位電位。細(xì)胞電泳裝置即是根據(jù)這種原理設(shè)計(jì)出來(lái)的。細(xì)胞電泳裝置即是根據(jù)這種原理設(shè)計(jì)出來(lái)的。 電位在診斷疾病上有

48、一定價(jià)值電位在診斷疾病上有一定價(jià)值。此外由于細(xì)胞在。此外由于細(xì)胞在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同，細(xì)胞電泳電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同，細(xì)胞電泳尚可用來(lái)分離不同尚可用來(lái)分離不同種類的細(xì)胞種類的細(xì)胞，例如可把淋巴樣細(xì)胞與造血細(xì)胞分開(kāi)。，例如可把淋巴樣細(xì)胞與造血細(xì)胞分開(kāi)。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)山東大學(xué)劉玉章先生設(shè)計(jì)的山東大學(xué)劉玉章先生設(shè)計(jì)的SD型細(xì)胞電泳儀型細(xì)胞電泳儀第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)細(xì)胞生理學(xué)技術(shù)主要介紹幾種對(duì)細(xì)胞進(jìn)行整體或局部進(jìn)行手術(shù)主要介紹幾種對(duì)細(xì)胞進(jìn)行整體或局部進(jìn)行手術(shù)處理的技術(shù)，這些技術(shù)在細(xì)胞工程領(lǐng)域中有很重要處理的技術(shù)，這些技術(shù)在細(xì)胞工程領(lǐng)域中有很重要的應(yīng)用價(jià)值。的應(yīng)用價(jià)值

49、?；罴?xì)胞離體后要在一定的生理?xiàng)l件下才能存活和進(jìn)行活細(xì)胞離體后要在一定的生理?xiàng)l件下才能存活和進(jìn)行生理活動(dòng)，否則就要死亡。因此，要進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，生理活動(dòng)，否則就要死亡。因此，要進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，就要盡可能滿足細(xì)胞在正常體內(nèi)生理狀態(tài)下的各種條件，就要盡可能滿足細(xì)胞在正常體內(nèi)生理狀態(tài)下的各種條件，其中其中選擇最佳培養(yǎng)基是最關(guān)鍵的因素選擇最佳培養(yǎng)基是最關(guān)鍵的因素。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(cell culture)或稱組織培養(yǎng)技術(shù)即是選或稱組織培養(yǎng)技術(shù)即是選用各種最佳生存條件對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的技術(shù)。用各種最佳生存條件對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的技術(shù)。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技

50、術(shù)組織培養(yǎng)工作開(kāi)始于組織培養(yǎng)工作開(kāi)始于20世紀(jì)初，世紀(jì)初，Harrison(1907)最早對(duì)最早對(duì)兩棲類胚胎的神經(jīng)管組織進(jìn)行了懸滴培養(yǎng)。兩棲類胚胎的神經(jīng)管組織進(jìn)行了懸滴培養(yǎng)。真正開(kāi)創(chuàng)大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)工作是在真正開(kāi)創(chuàng)大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)工作是在20世紀(jì)世紀(jì)40年代，年代，W.Earle和和R.Dulbecco設(shè)計(jì)出了設(shè)計(jì)出了細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞培養(yǎng)液配方，并開(kāi)始了配方，并開(kāi)始了單細(xì)胞的懸液培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)工作才得到廣泛發(fā)展。單細(xì)胞的懸液培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)工作才得到廣泛發(fā)展。培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞倒置顯微鏡倒置顯微鏡第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)群體培養(yǎng)群體培養(yǎng)：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于

51、培養(yǎng)：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，匯合后形成均勻的單細(xì)胞層；瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，匯合后形成均勻的單細(xì)胞層；克隆培養(yǎng)克隆培養(yǎng)：將高度稀釋的游離細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)：將高度稀釋的游離細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)增殖每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落，瓶中，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)增殖每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落，此種集落即稱為此種集落即稱為克隆(clone)。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有細(xì)胞均來(lái)源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。細(xì)胞均來(lái)源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。此外，為了制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計(jì)了規(guī)模培養(yǎng)法，此外，為了制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計(jì)了規(guī)模培養(yǎng)法，如如轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法、發(fā)酵罐培養(yǎng)發(fā)酵罐培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)方式

52、大致可分為兩種：細(xì)胞培養(yǎng)方式大致可分為兩種：第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)針對(duì)不同種類的細(xì)胞，學(xué)者們?cè)O(shè)計(jì)出了許多細(xì)胞培針對(duì)不同種類的細(xì)胞，學(xué)者們?cè)O(shè)計(jì)出了許多細(xì)胞培養(yǎng)基配方，目前使用比較廣泛的養(yǎng)基配方，目前使用比較廣泛的化學(xué)合成培養(yǎng)基化學(xué)合成培養(yǎng)基(chemically defined medium)有有TC-199、MEM、L-15和和RPMI-1640等。等。但是在工作中要針對(duì)不同的培養(yǎng)對(duì)象來(lái)選擇最適培但是在工作中要針對(duì)不同的培養(yǎng)對(duì)象來(lái)選擇最適培養(yǎng)基，養(yǎng)基，培養(yǎng)基選擇恰當(dāng)與否是細(xì)胞培養(yǎng)是否成功的關(guān)鍵培養(yǎng)基選擇恰當(dāng)與否是細(xì)胞培養(yǎng)是否成功的關(guān)鍵。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技

53、術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)細(xì)胞所需要的營(yíng)養(yǎng)成分要盡量予以滿足；細(xì)胞所需要的營(yíng)養(yǎng)成分要盡量予以滿足；要保持適當(dāng)?shù)臐B透壓；要保持適當(dāng)?shù)臐B透壓；嚴(yán)格控制嚴(yán)格控制pH；添加細(xì)胞所需的生長(zhǎng)因子。添加細(xì)胞所需的生長(zhǎng)因子。為了滿足細(xì)胞生長(zhǎng)所需的一些營(yíng)養(yǎng)條件，常在培養(yǎng)為了滿足細(xì)胞生長(zhǎng)所需的一些營(yíng)養(yǎng)條件，常在培養(yǎng)液中加入適量的液中加入適量的血清血清。然而血清的來(lái)源有限，而且血清的。然而血清的來(lái)源有限，而且血清的成份復(fù)雜，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，因而近來(lái)研究出成份復(fù)雜，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，因而近來(lái)研究出無(wú)血清無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)在細(xì)胞培養(yǎng)工作中，有幾種因素需要特別關(guān)注：

54、在細(xì)胞培養(yǎng)工作中，有幾種因素需要特別關(guān)注：正常組織的初級(jí)培養(yǎng)物，細(xì)胞傳代培養(yǎng)均有一定的限正常組織的初級(jí)培養(yǎng)物，細(xì)胞傳代培養(yǎng)均有一定的限度，只有癌細(xì)胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能無(wú)限生長(zhǎng)下去。度，只有癌細(xì)胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能無(wú)限生長(zhǎng)下去。所謂所謂轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化(transformation)即是即是指正常細(xì)胞在某種因指正常細(xì)胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細(xì)胞子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細(xì)胞。如。如HeLa細(xì)胞系細(xì)胞系（1951年從年從Henrietta Lacks的宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)而成）。的宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)而成）。迄今我國(guó)業(yè)已建立了上百個(gè)細(xì)胞系，為細(xì)胞生物學(xué)和迄今我國(guó)業(yè)已建立了上百個(gè)細(xì)胞系，為細(xì)胞生

55、物學(xué)和醫(yī)學(xué)做出了重大貢獻(xiàn)。醫(yī)學(xué)做出了重大貢獻(xiàn)。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)，世界上已建立了大量細(xì)胞株或細(xì)胞系。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)，世界上已建立了大量細(xì)胞株或細(xì)胞系。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)在細(xì)胞生物學(xué)中是一項(xiàng)極為重細(xì)胞培養(yǎng)在細(xì)胞生物學(xué)中是一項(xiàng)極為重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，也是生物工程中不可缺少要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，也是生物工程中不可缺少的重要手段。細(xì)胞生物學(xué)中有大量的生理的重要手段。細(xì)胞生物學(xué)中有大量的生理生化方面的研究成果，都是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)生化方面的研究成果，都是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)再結(jié)合其他技術(shù)取得的。再結(jié)合其他技術(shù)取得的。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)最明顯的特點(diǎn)是：植

56、物細(xì)胞培養(yǎng)最明顯的特點(diǎn)是：可進(jìn)行組織培養(yǎng)，由外植體生長(zhǎng)出植株可進(jìn)行組織培養(yǎng)，由外植體生長(zhǎng)出植株；不易無(wú)限傳代和建立細(xì)胞株不易無(wú)限傳代和建立細(xì)胞株。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)(1) 外植體培養(yǎng)，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織：外植體培養(yǎng)，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織：如果條件適宜，尚可如果條件適宜，尚可培養(yǎng)出再生植株。培養(yǎng)出再生植株。(2) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：在愈傷組織培養(yǎng)技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的在愈傷組織培養(yǎng)技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種培養(yǎng)技術(shù)。一種培養(yǎng)技術(shù)。植物細(xì)胞培養(yǎng)大體有如下幾種技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)大體有如下幾種技術(shù): :(3) 原生質(zhì)體培養(yǎng)：原生質(zhì)體培養(yǎng)：細(xì)胞雜交，轉(zhuǎn)基因等細(xì)胞雜交，轉(zhuǎn)基因

57、等(4) 單倍體培養(yǎng)：?jiǎn)伪扼w培養(yǎng)：通過(guò)通過(guò)花藥花藥或或花粉花粉培養(yǎng)獲得單倍體植株。培養(yǎng)獲得單倍體植株。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)為了直接對(duì)微小細(xì)胞進(jìn)行手術(shù)操作和解剖，又設(shè)為了直接對(duì)微小細(xì)胞進(jìn)行手術(shù)操作和解剖，又設(shè)計(jì)發(fā)明了顯微操作技術(shù)。計(jì)發(fā)明了顯微操作技術(shù)。所謂所謂顯微操作術(shù)顯微操作術(shù)(micromanipulation)就是在顯微就是在顯微鏡下，用顯微操作裝置對(duì)細(xì)胞進(jìn)行解剖手術(shù)和微量注鏡下，用顯微操作裝置對(duì)細(xì)胞進(jìn)行解剖手術(shù)和微量注射的技術(shù)射的技術(shù)。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)現(xiàn)在顯微操作裝置的設(shè)計(jì)越來(lái)越精密，已經(jīng)有可能對(duì)現(xiàn)在顯微操作裝置的設(shè)計(jì)越來(lái)越

58、精密，已經(jīng)有可能對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行解剖和注入微量物質(zhì)（如核酸分子片段）。細(xì)胞核進(jìn)行解剖和注入微量物質(zhì)（如核酸分子片段）。NT-88NE-N型顯微操縱儀型顯微操縱儀 (日本日本Nikon)第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù) 山東省海洋生物工程山東省海洋生物工程 重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室注射吸管注射吸管固定吸管固定吸管細(xì)細(xì)胞胞顯顯微微解解剖剖手手術(shù)術(shù)圖圖解解第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)顯微操作顯微操作蝌蚪蝌蚪未受精卵未受精卵小腸小腸上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞細(xì)胞核細(xì)胞核UV破壞破壞細(xì)胞核細(xì)胞核(或吸出或吸出)注核入卵注核入卵正常囊胚正常囊胚成體蛙成體蛙兩兩棲棲類類核核移移植植實(shí)實(shí)

59、驗(yàn)驗(yàn)圖圖解解第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)真核細(xì)胞通過(guò)介導(dǎo)和培養(yǎng)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞真核細(xì)胞通過(guò)介導(dǎo)和培養(yǎng)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程稱為稱為細(xì)胞融合細(xì)胞融合(cell fusion)或或細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交(cell hybridization)?；蛐拖嗤募?xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱為基因型相同的細(xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱為同同核體核體(homokaryon)；來(lái)自不同基因型的雜交細(xì)胞；來(lái)自不同基因型的雜交細(xì)胞則稱為則稱為異核體異核體(heterokaryon)。第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)目前誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有三種：目前誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有三種： 1. 病毒介導(dǎo)的細(xì)胞融合（如仙臺(tái)病毒）病毒介導(dǎo)的細(xì)胞融合（如仙臺(tái)病毒）2. 化學(xué)介導(dǎo)的細(xì)胞融合（如化學(xué)介導(dǎo)的細(xì)胞融合（如PEG）3. 電激介導(dǎo)的細(xì)胞融合電激介導(dǎo)的細(xì)胞融合第四節(jié)第四節(jié) 其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)其它實(shí)驗(yàn)性操作技術(shù)細(xì)胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究，而且還有重要細(xì)胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究，而且還有重要的應(yīng)用價(jià)值，如的應(yīng)用價(jià)值，如動(dòng)植物育種動(dòng)植物育種和和制取單克隆抗體制取單克隆抗體等。等。ABAB雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞低低 產(chǎn)產(chǎn)抗倒伏抗倒伏高高 產(chǎn)產(chǎn)易倒伏易倒伏高產(chǎn)高產(chǎn)抗倒伏抗倒伏長(zhǎng)長(zhǎng) 命命無(wú)分泌物無(wú)分泌