1、毛系田管ft泳倭鷹用於中蕖成分之分析定量行政院南生署II物食品椀蹶r局I1祐瑞博士一前言中H懸我閾重要的文化之一，原本就值得推廉輿重視，近年來閾內(nèi)多大企it投入大肇，致力於中II新II之研樊。由於中II材之成分親隹，且常因基原、地、探收季、炮裂、儲(chǔ)存等槿槿因素，致使其成分有相常大的差累，迤而影警中II材的品II。因此，有信司中II成分之分析及品之管制，建得相富的重要。行政院衢生署懸了提昇中!渡彳宿裂剜的品II,已於八十九年七月二十四日公告，自九十年一月一日起，凡申言青葛根浸等十槿中II方剜之浸縮裂剜，查瞬登言已新案及!品可If有效期展延日寺，鷹制言丁指檄成分定量方法。美WI物食品管理局（FDA

2、）亦於八十九年八月公怖，GuidanceforIndustry（Draft）BotanicalDrugProducts（美H FDA 植物性 1B物 11品燒靶草案），提出中草II新II研彝，需以 CMC（即化裂造、品）加以管制。目前中II成分之分析定量，以高效液相）1析（HPLC）最普遍，然而 HPLC分析日寺存在著若干燮數(shù)及困莫隹，例如通常分析畤且分析完成彳爰管柱之清洗畤亦甚更換溶媒、管柱，清洗管柱需要畤致使倭器自勤化限制多；成分易殘留於管柱內(nèi)，清洗不易，使用之彳薊溶液等添加剜，即易損害管柱內(nèi)之填充物；管柱及溶剜費(fèi)用高，尤其生大量含有有毒溶剜（如乙月青、二氯甲烷）之屢液。毛區(qū)田管甯泳（Ca

3、pillaryelectrophoresis 或 Highperformancecap川aryelectrophoresis）, UWCE或HPCE ,是最近十年來蓬勃樊展的分析方法，霜泳是雷介II中帶重粒子在H埸作用下，以不同速度向雷荷相反的H趣方向移勤的垣象， 利用道槿琪象封某些化成分迤行分析的技秫亍。毛區(qū)田管重泳的樊展，在1967年Hjerten等率先提出在高霜埸，直彳空3mm毛區(qū)田管中作自由溶液的毛區(qū)田管Hi帶重泳（Capillaryzoneelectrophoresis） , UWCZ CZE； 1984 年 Terabe 等建立一槿重要的分雕模式，即以各成分（特別是中性成分），在毛

4、區(qū)田管內(nèi)的夥束（Micelle）及彳薊溶液之的分配懸基磁之 II 束雷力 毛區(qū)田管）1 析（Micellarelectrokineticcapillarychromatography）,M熱MECC或MEKC ； 1990年Honda 等最早符毛區(qū)田管雷泳鷹用於芍桀中Paeoniflorin 及Oxypaeoniflorin之定量，樊琪毛區(qū)田管重泳之再垣性佳，定量結(jié)果典HPLC相似。毛區(qū)田管重泳的槿槿方法中以上述CZE及MEKC最常用，其中CZE是毛區(qū)田管重泳中最曾罩的一槿方法，毛區(qū)田管內(nèi)只充入彳薊溶液，分析之成分以不同的速率在分立的I帶內(nèi)迤行遭移，正、子化合物即可分雕，而中性化合物在H埸中期

5、不曾移勤。MEKC是毛區(qū)田管ft泳中鷹用最廉的方法之一，既能分雕中性成分，也能分蹄帶重成分，MEKC主要是在彳薊溶液中，加入一定渡度以上的界面活性剜，以形成束，其鷹用靶圉包括雉生素、大部分II物及中II成分。本文所聚之天麻及玄參雨偃I例子，皆懸 MEKC方法，且均以腦酸金內(nèi)作懸界面活性剜，分析二槿II材中之不 帶重荷高趣性成分。毛區(qū)田管雷泳之分析方法，保利用不同檬品蹄子重荷泳勤速度的差累，配合毛區(qū)田管內(nèi)重解II在外加高H埸下所生的H滲流，形成各槿檬品蹄子在毛區(qū)田管中浮移勤速度不同，因而逵到分蹄效果。典傅統(tǒng)的平板重泳或高效液相）1析比較，毛區(qū)田管重泳的分蹄效率趣高，理板數(shù)常在10 510 7左右

6、。另外，毛區(qū)田管口彳空小，散熱效果佳，因此可使用高H埸迤行重泳，大幅縮短檬品分雕日寺毛區(qū)田管重泳輿高效液相）1析皆腐液相分蹄技循:，雨者之分蹄械制不同，各有其鷹用的僵值，惟就分蹄效率、分析速度、成本花費(fèi)及檬品用量而言，毛區(qū)田管重泳之理考病板數(shù)較高，分析速度更快，黑乎不消耗溶剜，而檬品用量僮高效液相）1析的數(shù)百分之一。毛區(qū)田管重泳只要金十封不同便可分蹄不同的的分子性（如分子大小、重荷數(shù)、疏水性等）改建操作模式和彳薊溶液的成分, 檬品。相較之下毛區(qū)田管重泳具有更大的逗攆性，欲分析不同的檬品亦不需更換僵格昂貴的管柱。毛區(qū)田管甯泳輿高效液相Jf析之比較整理如下:毛區(qū)田管甯泳高效液相析分析速度較快的曼理

7、板數(shù)敕局較低溶媒消耗機(jī)或少多檬品量低(以nl言十)iWj （心）管柱僵格低高管柱清洗快、容易費(fèi)日寺自勤化高不容易(一)麻 材中 Parishin、ParishinB 及 ParishinC 之含量測定：天麻，原名赤箭，別名明天麻，彳系篇科(Orchidaceae) 植物天麻 Gastrodiaelata 的乾燥根套Parishin(tris4-( -D-glucopyranosyloxy)benzylcitrate) 、ParishinB 及 ParishinC(1,2-及1,3-bis4- ( -D-glucopyranosyloxy)benzylcitrate)懸自天麻分It得到之三槿高趣

8、性成分，分別卷帶有三偃I及二偃I葡萄糖之槨檬酸蜜，肇者建立了三槿成分之毛區(qū)田管重泳典高效液相Jf析之分析方法，其修件如下：1.高效液相)1析之修件：高效液相析it： Hitachi W牌 HPLCL-6200pump 速接 Hitachi W牌 L-3000Photodiodearray椀限)器及Shimazu W牌SIL-9A自勤注射器。x 150mm分析柱：Cosmosil5C 18-AR , 5 心 m,內(nèi)彳空4.6mmI.D.椀劉波:UV222nm 移勤相：A:甲醇,B: 0.1%磷酸溶液日寺 （分）AB01585性梯度修件152575303070403070流速：1.0mL/min

9、。內(nèi)部檄型品：Sulfamethoxypyridazine 。2.毛系田管雷泳）1析之修件：毛區(qū)田管重泳倭：Beckman W牌P/ACE5500。毛余田管：Beckman 內(nèi)筏 75mm x 67cmuncoatedcap川ary。椀劉波 :UV222nm 。彳薊液：20mMSodiumtetraborate 及 20mMSodiumdihydrogenphosphate配懸 pH6.5含 100mMSodiumch01ate之溶液。溫度： 30 Co匐g： 15KV。內(nèi)部檄型品： Methylparaben 。天麻三槿成分之毛區(qū)田管重泳分析，彳薊液用pH6.5四硼酸金內(nèi)及磷酸二氧金也加入腦

10、酸金內(nèi)作界面活性膏I,其6111如圃一所示，可在十七分金童內(nèi)完成，3t且有很好的回收率（94.8100.5%）及再琪性（同日內(nèi)之相卻票津偏差懸1.232.80% ;累日之相和票津偏差懸1.723.24%）,高效液相)1析分析畤如6I二所示，懸毛區(qū)田管重泳之二倍。比較二槿方法之再琪性(如表一)，毛區(qū)田管雷泳瓢在三次分析成分畤或含量測定之相封檄型偏差，其結(jié)果均在2%以下，典高效液相析相富。以二槿方法定量分析四件市售天麻II材，其結(jié)果相差不多(如表二所示)。表一天麻II材中指檄成分分別以高效液相)1析及毛區(qū)田管重泳分蹄之再琪性比較指檄成分高效液相Jf析毛區(qū)田管甯泳相封檄型偏差(%,n=3)相封檄型偏

11、差(%,n=3)滯留日寺含量測定遭移日寺含量測定Parishin1.240.481.541.18ParishinB1.140.201.312.01ParishinC1.221.751.261.59(二)玄參中2-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)ethyl1-O- oL-arabinopyranosyl(1f-6)uloyl(1-4)- a-L- rhamnopyranosyl(1- -3)-D-glucopyranoside(SN-A)、Harpagoside(SN-B)及 Cinnamicacid(SN-C)之含量測定：玄參別名元參黑參,保玄參科(Scrophulari

12、aceae) 植物玄 Scrophularianingpoensis 或S.buergeriana 之乾燥根。SN-A、SN-B及SN-C懸自玄參分It得到之三槿高趣性成分，其中SN-A懸?guī)в邪⒗甪g糖、鼠李糖及葡萄糖之親隹化合物；SN-B懸?guī)в幸毁菼葡萄糖之化合物；SN-C(桂皮酸)小分子化合物，三槿成分之分子量分別懸784、 494及148 ,其差累頗大，但因毛區(qū)田管重泳之逗攆性高，仍可在短畤內(nèi)完成分析。毛區(qū)田管重泳輿高效液相)1析分析方法之修 件如下：1.高效液相)1析之修件：高效液相Jf析倭：輿天麻相同)1 析管：Cosmosil5C i8-AR,5mm,內(nèi)彳空 4.6mm x 15

13、0mm表二四件市售天麻f!材分別以高效液相析及毛區(qū)田管霜泳定量之結(jié)果毛區(qū)田管甯泳高效液相析指檄成分市售IB材(mg/g)(mg/g)Parishin112.5613.51214.5515.1536.866.9946.456.42ParishinB14.834.6424.884.5333.313.0642.462.32ParishinC12.172.2522.172.0831.381.3741.251.30椀限!波 :UV278nm移勤相：A:乙月青B: 1.0%醋酸溶液。日寺 （分）AB性梯度修件01585442773流速：1.0mL/min 內(nèi)部檄型品：Sorbicacid 。2.毛系田管雷

14、泳析之修件：毛區(qū)田管重泳倭：典天麻相同。毛余田管：Beckman 內(nèi)筏 75mm x 67cmuncoatedcap川ary表三玄材中指檄成分分別以高效液相)1析及毛區(qū)田管重泳分蹄之再琪性高效液相Jf析毛區(qū)田管重泳指檄成分相封檄型偏差(%,n=3)相封檄型偏差(%,n=3)滯留日寺含量測定遭移日寺含量測定SN-A0.061.000.221.11SN-B0.011.720.282.80SN-C0.041.720.211.22椀限J 波 :UV280nm 。彳薊液：20mMSodiumtetraborate 及 20mMSodiumdihydrogenphosphate配懸 pH7.5含 120m

15、MSodiumch01ate 及 12% 甲醇之溶液。溫度： 25 C。8: 25kV。內(nèi)部檄型品：Propylparaben 。玄參三槿成分之毛區(qū)田管重泳分析，彳薊液用pH7.5四硼酸金內(nèi)及磷酸二氧金也加入腦酸金內(nèi)作界面活性剜、甲醇作修解配 其圃|如圃三所示，可在十九分金童內(nèi)完成，也有很好的回收率(102.4103.5%) 及再琪性(同日內(nèi)之相卻軻偏差懸0.551.71% ;累日之相和稟津偏差懸1.363.83%),高效液相)1析分析日寺房，如圃四所示，亦懸毛區(qū)田管重泳之二倍。比較二槿方法之再琪性（如表三），毛區(qū)田管雷泳在三次分析成分畤其結(jié)果均在0.3%以下，含量測定之相封檄型偏差，其結(jié)果均

16、在3.0%以下，輿高效液相Jf析相富。以二槿方法定量分析七件市售玄HII材，其結(jié)果亦相差不多 （如表四所示）。三？結(jié)言吾毛區(qū)田管重泳具有高逗擇性、分析日寺短、管柱清洗日寺短、再現(xiàn)性佳、可自勤化等特性，遹合用於大量品管分析之用。由上述所聚例之二偃I研究覲之，毛區(qū)田管雷泳可用於中II成分之分析，其回收率及再琪性均不至於高效液相）1析，用毛區(qū)田管重泳優(yōu)事中II成分之分析碓腐可行。表四七件市售玄mi材分別以高效液相）1析及毛區(qū)田管霜泳定量之結(jié)果毛區(qū)田管甯泳HPLC指檄成分市售材(mg/g)(mg/g)11.701.7922.092.0031.971.91SN-A41.121.0651.671.6360

17、.700.6571.451.4510.450.4620.600.60SN-B31.461.4241.221.2251.441.4160.330.3470.670.7010.160.1620.320.3230.110.11SN-C40.280.2950.270.2760.070.0770.270.28圃二天麻之高效液相)1析分析gm。1: : ParishinB ；2: ParishinC ；3: Parishin。IS:內(nèi)部檄型品(Sulfamethoxypyridazine) 圃一天麻之毛區(qū)田管ft泳分析圃11。1: : ParishinB ；2: ParishinC ；3: Parishi

18、n 。IS:內(nèi)部檄型品(Methylparaben) 。H三玄參之毛區(qū)田管雷:泳分析HH。IS:內(nèi)部檄型品(Propylparaben)。H四玄參之高效液相眉析分析。 IS：內(nèi)部檄型品(Sorbicacid)。參考文獻(xiàn)1.BealeSC.,1998,Capillaryelectrophoresis. AnalticalChemistry 70:279R-300R.2.McLaughlinGM,NolanJA,LindahlJL,PalmieriRH,AndersonKW,MorrisSC,MorrisonJAandBronzertTJ.,1992,PharmaceuticaldrugseparationsbyHPCE:Practicalguidelines.JournalofLiquidChromatography 15:961-1021. 3.崟U英玫，前嗔吉，1993,毛區(qū)田管雷泳在中桀分析上的鷹用，蕖物食品分析,4(2):131-140.4檎祐瑞 制宜祝，郝景平,1林哲輝 潢文濾，1995,天麻!材中指檄成分 Parishin,ParishinB 及 C之高效液相唇5析定量法之探言寸