1、會計學1生命科學部新產(chǎn)品培訓分子病理診斷生命科學部新產(chǎn)品培訓分子病理診斷每個人體細胞內有一個細胞核，每個細胞核內有46條染色體，每個染色體都蘊含著具有遺傳效應的DNA片段，正是它們決定了我們每個不同的個體?，F(xiàn)在，讓我們一起揭開染色體和DNA的結構與功能之謎。PPT模板下載： 行業(yè)PPT模板： 節(jié)日PPT模板： PPT素材下載： PPT圖表下載： 優(yōu)秀PPT下載： PPT教程： Word教程： Excel教程： 資料下載： PPT課件下載： 范文下載： 試卷下載： 教案下載： 目 錄1.分子病理概述2.分子病理學實驗室設施與環(huán)境3.病理科實驗室質量管理標準4.分子病理學常用檢測設備5.推薦設備型

2、號及預算6.常用試劑及價格國藥集團聯(lián)合醫(yī)療器械有限公司7.經(jīng)濟效益分析分子病理診斷的市場介紹分子病理學概述分子病理診斷的應用范圍常用分子病理診斷技術分子病理診斷的現(xiàn)在和未來1503億美元全球IVD市場2155億美元中國IVD市 場份額35%全球分子診斷 市場份額415%全球分子診斷復合增長速度55%全球IVD市場的平均增長速度620%中國分子診斷增長速度國外廠家：羅氏診斷（瑞士）、Gen-Probe（Hoiogic）（美國）、QIAGEN（荷蘭）、BD（美國）、西門子（德國）、生物梅里埃（法國）、雅培（美國）、諾華（瑞士）、Cepheid（美國）和貝克曼庫爾特（美國）國內廠家：深圳華大、達安基

3、因、科華生物、上海之江、北京博奧、廈門艾德、湖南圣湘、福州泰普、廣州安必平分子病理診斷的應用范圍l腫瘤易感基因的檢測（Rb1視網(wǎng)膜母細胞瘤；WT1腎母細胞瘤）l腫瘤先關病毒的檢測(HPV病毒與宮頸癌發(fā)生有很大關系）l腫瘤的早期診斷：（K-ras基因突變在結腸癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤中發(fā)生率高，結腸癌指導靶向用藥愛必妥，肺癌指導靶向用藥吉非替尼、埃羅替尼）l疑難腫瘤的診斷和分類（T細胞受體基因重排具有鑒別淋巴細胞增生和淋巴瘤，Bcr區(qū)基因重排可對慢性粒細胞性白血病和急性粒細胞性白血病進行鑒別診斷，N-myc和C-myc檢測可對鑒別神經(jīng)母細胞瘤和神經(jīng)上皮瘤有應用價值）l腫瘤的預后監(jiān)測l腫瘤個體化和預

4、見性治療提供依據(jù)l腫瘤的預后判斷：(HER2基因陽性表達表示乳腺癌治療預后不良需要改變治療方案，指導靶向用藥赫賽汀）常用分子病理診斷技術免疫組織化學技術（IHC)-檢測蛋白質分子原位雜交-檢測DNA、RNA熒光原位雜交技術（FISH)-檢測DNA、RNA多聚酶鏈式反應技術(PCR)-檢測DNA、RNA熒光定量PCR技術-檢測DNA、RNADNA測序技術-檢測DNA突變生物芯片技術-檢測DNA、RNA、蛋白質DNA印跡技術(southern blot)-檢測DNA微衛(wèi)星不穩(wěn)定性檢測技術（MSI)分子病理診斷的現(xiàn)在和未來現(xiàn)在（弊端）未來（突破）自動化不足（限制檢測通量）檢測技術難以突破，產(chǎn)品同質化

5、嚴重儀器一體化、自動化、操作簡便增強研發(fā)能力，革新技術，研發(fā)新品二代測序技術突破提升，提高檢測速度，降低檢測成本u熒光原位雜交技術（FISH)原理：通過熒光標記的DNA探針與細胞核內的DNA靶序列雜交，在熒光顯微鏡下能原位顯示細胞核內雜交信號的分子細胞遺傳學技術。步驟：FISH樣本制備 探針的制備 探針標記 雜交 染色體顯帶 熒光顯微鏡 檢測 結果分析在醫(yī)院中的使用：病理科、血液科、婦產(chǎn)科、生殖中心（產(chǎn)前診斷，植入前診斷） 產(chǎn)品種類及廠家品牌：細胞類探針-白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、產(chǎn)前診斷和產(chǎn)后篩查類 實體腫瘤類探針-乳腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、肺癌、軟組織肉瘤、前列腺瘤、甲狀腺癌等方面實驗室基本

6、要求：環(huán)境-樣本準備區(qū)、暗室（10-15平米左右） 設備-熒光顯微鏡以及熒光成像分析系統(tǒng)、水浴鍋、原位雜交儀、冰箱、離心機、恒溫箱 辦公設備-電腦、打印機 實驗耗材-FISH探針、普通實驗耗材技術人員：1人u實時熒光定量PCR技術原理：在PCR反應體系中加入熒光基團，通過探針與擴增產(chǎn)物的結合釋放出熒光信號，再通過專門的儀器對信號進行實時檢測，經(jīng)過軟件分析可以準確計算出目的基因的初始數(shù)量，實現(xiàn)定量檢測。步驟：提取樣本核酸 反轉錄成CDNA 設計引物和探針制備 探針標記 RT-PCR 反應進行 分析熒光實驗圖應用范圍：臨床疾病診斷、動物疾病檢測、食品安全、科學研究、應用行業(yè)檢測腫瘤的項目：CEA(

7、mRNA）、 AFP(mRNA）、 UPA(mRNA）、 CK19(mRNA）、CK20(mRNA）、 MDRI(mRNA）優(yōu)點：特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化，可以在一個試管內將目的基因數(shù)小時內擴增至百萬倍，可從一根毛發(fā)、一滴血、一個細胞內擴增出足量的DNA進行研究和檢測鑒定。實驗室基本要求：需要避光的暗室；有熒光顯微鏡觀察室技術人員：1人uDNA一代測序技術原理：（sanger雙脫氧核苷酸末端終止法）利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設立四種相互獨立的測序反應體系，在體系中加入不同的ddNTP作為鏈延伸終止劑。在測序引物指導下，按照堿基配對原則

8、，每個反應體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過凝膠電泳后，可以讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列。步驟：測序模板的純化與定量、測序反應、測序反應產(chǎn)物純化與變性、上樣電泳、分析結果應用范圍：尋找與疾病相關的突變信息、指導靶向用藥、尋找致病基因、各種基因作用的破解，提高農產(chǎn)品質量、明白個人基因信息，選擇投保臨床檢測項目：K-RAS基因突變檢測（結直腸癌、胃癌、頭頸部癌及肺癌，愛必妥類靶向治療） EGFR基因突變檢測（肺癌，易瑞沙和特羅凱靶向治療） Bcr-Ab1融合基因和C-KIT、PDGFR基因突變檢測（白血病、胃腸道間質瘤，格列衛(wèi)靶向治療） 乳腺癌化療、結直腸腺癌化療的個體化治療

9、方案技術人員：1-2人uDNA二代測序技術原理：（大規(guī)模平行測序法）單鏈DNA文庫被固定在芯片上并帶有合成引物，用不同顏色的熒光標記四種不同的dNTP，逐一加入DNA芯片上，當聚合酶合成互補鏈時，每添加一種dNTP就會釋放不同的熒光，根據(jù)捕捉的熒光信號并經(jīng)過特定的計算機軟件處理，從而獲得待測DNA的序列信息。步驟：文庫制備 DNA芯片創(chuàng)建 進行測序 數(shù)據(jù)分析公司平臺名稱測序方法檢測方法大約讀長優(yōu)點局限性第一代ABI3130XL-3730XLSanger法熒光/光學600-1000bp高讀長，準確性高通量低，樣品制備成本高第二代羅氏基因組測序儀焦磷酸法光學230-400bp通量大讀長短，樣品制備

10、難，準確性差三代DNA測序方法的區(qū)別第一代測序技術第二代測序技術第三代測序技術Sanger雙脫氧鏈終止法循環(huán)芯片技術實現(xiàn)了高通量、高效率、高準確度的測序大大降低了測序的成本單分子測序試劑用量少，成本更低第一代測序技術憑借其長的序列片段和高的準確率，適合對新物種進行基因組長距框架的搭建以及后期GAP填補，但是成本昂貴，而且難以勝任微量DNA樣品的測序工作。第二代測序技術中：u454序列片段最長，比較適合對未知基因組從頭測序，搭建主體結構，但是在判斷連續(xù)單堿基重復區(qū)時準確度不高。uSolexa較454具有通量高、片段短、價位低的特點，可以用于大基因組和小基因組的測序和重測序。uSOLiD基于雙堿基

11、編碼系統(tǒng)的糾錯能力以及較高的測序通量，適合轉錄本研究以及比較基因組學特別是SNP檢測等，但是測序的片段短限制了該技術在基因組拼接中的廣泛應用。u（可以完成一個人整體遺傳組的測序）第三代測序技術目前正在發(fā)展中，在未來會成為主導。？哪種檢測技術才是現(xiàn)在臨床使用最廣的技術成熟、定量準確特異性、敏感性高；成本低廉、儀器價格適中產(chǎn)品種類能夠滿足相關疾病檢測以及科研研究使用PCR技術尚未克服技術缺陷、無法做到準確定量檢測特異性、敏感性低；成本高昂、儀器價格昂貴產(chǎn)品種類少，只用于科研和藥物篩選等用途，無法滿足疾病檢測基因芯片熒光定量PCR技術是臨床疾病基因診斷的主要手段，有廣闊的市場容量和良好的發(fā)展前景總結

12、分子病理學實驗室設施與環(huán)境1.布局合理，實驗室各區(qū)域的正確劃分3.消防設施安全消防通道暢通4. 石蠟組織、DNA樣本的存放2.水電、照明、通風符合實驗室基本要求5.實驗室記錄、操作手冊等文件存放7.安裝生物安全防護措施8. 實驗室的清潔 日常消毒、有相關記錄6.實驗室耗材試劑的存放廢棄物的處理病理科實驗室質量管理標準l衛(wèi)生部【2009】31號文件（病理科建設與管理指南）l2006年6月1日實施的（醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法）l全國各省市的關于臨床病理專業(yè)質量檢查及評價標準l美國CAP認可標準l歐洲NordiQC認證標準l國際標準化組織制定并與2003年正式發(fā)布醫(yī)學實驗室的管理標準，ISO151

13、89：2003(醫(yī)學實驗室質量和能力的專用要求）IHCISH分子病理學實驗室檢測設備免疫組化染色所需試劑：l 機用緩沖液l 機用清洗液l 機用抗原修復液l 一抗試劑l 機用二抗檢測系統(tǒng)分子病理學實驗室檢測設備原位雜交所需試劑：l 原位雜交試劑盒 l 二甲苯l 無水乙醇l PBS清洗液分子病理學實驗室檢測設備熒光原位雜交（FISH)HyChrome是一個創(chuàng)新產(chǎn)品，用于完成高溫原位變性和退火雜交探針過程。HyChrome由一個單獨的平板加熱模塊和一個濕度箱組成：平板加熱模塊的溫度是由一個數(shù)字微處理器來控制，濕度箱為了減少脫水，最終實現(xiàn)高信號和低背景雜交。在一個模塊中完成標本變性和雜交的溫度控制技術

14、以及可能性已被驗證了，該技術以及可能性保證了片子之間溫度的可變性和一個好的再現(xiàn)性所需試劑：l 一抗探針l 二抗試劑l 蛋白酶 l 變性液 l 二甲苯l 無水乙醇l PBS清洗液分子病理學實驗室檢測設備DM2500l熒光顯微鏡部分l數(shù)碼成像系統(tǒng)部分l細胞染色體核型分析軟件l熒光原位雜交分析軟件熒光定量PCR儀顯示器核酸電泳儀椅子空氣流向擴增和分析區(qū)金屬浴水槽離心機生物安全柜冰箱椅子空氣流向樣本制備區(qū)廢液缸振蕩器天平離心機椅子試劑準備區(qū)空氣流向專用走廊專用走廊普通PCR儀凝膠成像系統(tǒng)核酸提取儀DNA測序儀分子病理學實驗室檢測設備核酸提純儀博日GenePure 核酸提純儀l采用磁珠分離技術，提取過程

15、自動化l多選擇性試劑盒可以從多種樣品材料中分離純化高純度的核酸l省時、省力、高效、準確分子病理學實驗室檢測設備PCR擴增儀博日GeneMax所需試劑：l PCR MIXl 引物l 雙蒸水 分子病理學實驗室檢測設備生物安全柜l高效循環(huán)空氣過濾器l自適應壓力調整功能l微機控制l大屏幕液晶顯示l配重前窗l(fā)環(huán)境安全l配備有紫外燈l照明系統(tǒng)分子病理學實驗室檢測設備離心機產(chǎn)品特征：l適應于DNA的分離、提純及后處理清潔工作l最大轉速達15000rpml無需手動，自動關門l運行安靜，無碳刷感應電機l溫度范圍：從-20度 到 40度，保證樣品的生物活性l適用于0.25ml到500ml的樣品l運行時間：9h59

16、min，連續(xù)離心貝克曼 Allegra 25R臺式高速冷凍離心機分子病理學實驗室檢測設備熒光定量PCR儀l采用熒光實時檢測方式，實現(xiàn)在同一管內同時進行擴增和檢測，無須后處理 l先進的熱電制冷技術，保證了超高速的熱循環(huán)系統(tǒng)加熱，制冷迅速、穩(wěn)定 l穩(wěn)定、準確的 136梯度功能，確保 PCR 條件更優(yōu)化 ，SOAK 的恒溫功能，實現(xiàn)了 PCR 試劑的低溫保存 ll對 PCR 擴增全過程進行實時動態(tài)監(jiān)測 l線型范圍大，可達到 10 個數(shù)量級的起始 DNA 拷貝數(shù)無需梯度稀釋 l無需開啟 PCR 反應管，可避免在 PCR 期間及 PCR 之后產(chǎn)物污染，確保結果準確 l多色熒光檢測，在單一反應中取得更多信

17、息 l自動化的熱蓋技術，無需手動開/閉，保證熱蓋在不同高度試管使用時的壓力l可打印多個或單個樣本l先進的模塊底部熒光檢測技術，受發(fā)明專利保護 ll支持 RS232、USB、Bluetooth 接口博日LineGene9600所需試劑：l 待測樣本核酸提取試劑盒l(wèi) 待測樣本濃度測定l 逆轉錄試劑盒l(wèi) 熒光定量PCR試劑盒l(wèi) 其他試劑 分子病理學實驗室檢測設備ABI Step OnepPlus熒光定量PCR儀l性價比極高的三色/48孔(StepOne)或四色/96孔(StepOnePlus)系統(tǒng)l基于使用壽命長的LED的光學系統(tǒng)，可以檢測多種熒光染料，用于基因表達分析、病原體定量檢測、SNP(單核

18、苷酸多態(tài)性)基因分型、以及陰性/陽性分析等多種實驗l可以進行標準模式和快速模式PCR反應，快速模式可以在40分鐘內完成PCR反應lLCD觸摸屏和支持USB存儲，使得系統(tǒng)配置更靈活，并且可以實現(xiàn)無PC操作l具有獨特的VeriFlexTM加熱塊，極大地提高了系統(tǒng)的功能和溫控的精度分子病理學實驗室檢測設備核酸電泳儀l外形尺寸（LWH）：242132105mml凝膠板規(guī)格(LW)：8580mml試樣格：12、15齒，1.0、2.0mm厚l重量：約1Kgl緩沖液總容量：約500m適用于鑒定、分離、制備DNA以及測定其分子量。有冷卻裝置，可做雙排膠。此型號適用PCR電泳或RNA電泳。北京六一電泳儀分子病理

19、學實驗室檢測設備核酸凝膠成像系統(tǒng)l暗箱式，無需暗室，可全天候使用l抽屜式燈箱互換，使用方便，防止污染l具有實時預覽、自動對焦功能l紫外濾光鏡：EB專用超多層鍍膜濾光鏡（M520.75）l*兼容tif、jpg、bmp、gif等諸多圖像格式l高清晰度130萬像素攝像頭，高品質成像質量，遙控電動變焦，智能化控制l專用拍攝軟件與分析軟件一體操作，使“觀察、拍攝、分析一氣呵成l通過USB接口與計算機連接，不觸動計算機內部硬件，便于維護和保修l紫外/白光轉換屏。用途：主要用于核酸、蛋白質電泳觀察、照像和實驗結果科學分析。 分子病理學實驗室檢測設備DNA一代測序儀ABI 3730XLsanger 法毛細管電

20、泳分離電腦熒光檢測數(shù)據(jù)分析可得到DNA堿基序列性能特點：u毛細管規(guī)格: 96道毛細管u毛細管長度: 50cmu凝膠的規(guī)格: POP-7液體分離膠u配套的試劑: 基因測序(BigDye3.1v和5Sequence buffer) 基因分型(Liz120, Liz500, ROX500)u基因測序及分型的運行時間 時間：96樣本 2h 通量：（94-96）/384*12 優(yōu)點： 方法可靠、準確度高,且已形成規(guī)?；?缺點： 測定通量低，成本高u讀長：700-900bp分子病理學實驗室檢測設備DNA二代測序儀Illumina GA循環(huán)芯片技術技術特點：u測序通量高：每個測序反應能達到3G以上的數(shù)據(jù)通量

21、；u 準確率高： 98.5%，同時也有效地解決了多聚重復序列的讀取問題；u 低成本：比傳統(tǒng)毛細管測序技術成本的1%還低；u DNA序列的讀取長度不斷增加，當前達到200 bp；u 可以進行Pair-End雙向測序，目前Pair-End文庫插入片段u大小范圍可由200bp到10kb；u 每張芯片有8個通道，每個通道可單獨測序一個樣品，也可以把多個樣品混合在一起測序。優(yōu)勢：u可擴展的超高通量u需要樣品量少（低至100ng)u簡單、快速、自動化u單個或配對末端支持推薦設備型號及預算初級配置方案（適合二級醫(yī)院，標本量少，常規(guī)檢測）序號設備名稱品牌型號單價數(shù)量金額備注1熒光顯微鏡成像分析系統(tǒng)徠卡DM25

22、0035萬135萬中端顯微鏡，徠卡進口CCD,徠卡進口分析軟件2恒溫加熱平臺常州菲普DB-3A型650016500高溫變性及烤片用3電熱恒溫水槽常州菲普SHA-CA型11000111000洗滌用4電熱恒溫培養(yǎng)箱上海精宏DNP-9052460014600雜交用5生物安全柜上海力康HF safe-900A2268001268006PCR擴增儀Hema9600基因擴增儀47000147000總計445900推薦設備型號及預算專業(yè)性配置方案（適合三甲醫(yī)院，樣本量多）序號設備名稱品牌型號單價數(shù)量金額備注1熒光顯微鏡成像分析系統(tǒng)徠卡DM25003500001350000中端顯微鏡，徠卡進口CCD,徠卡進口

23、分析軟件2原位雜交儀Thermobrite890001890003臺式高速離心機貝克曼Allegra 25R600001600004實時熒光定量PCR儀凱杰66000016600005生物安全柜上海力康HF safe-1200TE380001380006DNA測序儀ABI3730170000011700000總計2897000科研性配置方案（適合綜合醫(yī)院，承擔科研任務）序號設備名稱品牌型號單價數(shù)量金額備注1熒光顯微鏡成像分析系統(tǒng)徠卡DM400050萬150萬中端顯微鏡，徠卡進口CCD,徠卡進口分析軟件2原位雜交儀Thermobrite890001890003臺式高速離心機貝克曼Allegra

24、25R600001600004實時熒光定量PCR儀羅氏LightCyler48068000016800005生物安全柜上海力康HF safe-1200TE380001380006DNA測序儀Illumina GA270000012700000總計4067000推薦設備型號及預算分子病理常用試劑及價格熒光原位雜交（FISH)的經(jīng)濟價值直接效益間接效益有證試劑無證試劑國外廠家：2000元/人份；國內廠家：1100元/人份醫(yī)院收費2500元/人份利潤率：20%-56%國外廠家1500元/人份；國內廠家：700元/人份醫(yī)院收費2400元/人份利潤率：37.5%-70.8%用于增強科研研究、發(fā)表文章、提升科室或醫(yī)院學術地位，獲得巨大的潛在價值目前FISH的發(fā)表文章指數(shù)增長，說明此技術應用迅速