1、綜合項目一不同蔬菜水果中基本營養(yǎng)成分分析實驗一 總糖含量的測定（3,5-二硝基水酸法）、實驗?zāi)康?、掌握總糖的測定原理。2、學(xué)習(xí)用比色法測定還原糖的方法。、實驗原理三、實驗試劑1、2mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4g氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定 容至50mL2、 3,5-二硝基水酸試劑：稱取0.325g 3,5-二硝基水酸溶于15mL熱蒸餾水 中，溶解后移入50ml容量瓶中，加入2mol/L氫氧化鈉溶液16.25mL,再加入 2.25ml丙三醇，搖勻，冷卻后定容至 50mL3、2mg/mL葡萄糖標準溶液：稱取0.04g葡萄糖，加少量的蒸餾水溶解后， 定容至20mL4、6mol/L鹽酸：取2

2、5mL濃鹽酸用蒸餾水稀釋至50mL5、6mol/L氫氧化鈉：稱取12g氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL四、實驗步驟1、葡萄糖標準曲線的制作取6支試管，按下表加入2mg/mL葡萄糖標準溶液和蒸餾水：AvV 口呂號2mg/mL葡萄糖標準溶液/mL蒸餾水/mL葡萄糖濃度mg/mLOD540101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21.66102在上述試管中分別加入 3,5-二硝基水酸試劑2mL搖勻后于沸水浴中加入 2min進行顯色，取出后用流動水迅速冷卻，各加入蒸餾水9mL搖勻，在540nm波長處測定光吸收值。以葡萄糖含量(mg/mL為橫坐標，光

3、吸收值為縱坐標， 繪制葡萄糖標準曲線，得出回歸方程。2、總糖的提取稱取1g實驗材料(如新鮮果蔬)，充分研磨后，放在錐形瓶中，加入6mol/L 鹽酸10mL蒸餾水15mL在沸水浴中加熱30min。水解完畢后，冷卻至室溫后， 加入8mL 6mol/L氫氧化鈉，最終用蒸餾水定容至 50mL此為總糖水解液，用于 總糖測定。3、總糖含量的測定取4支試管，按下表加入不同溶液：AvV 口呂號蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基 水酸試劑/mLOD5401102201230124012加完試劑后，搖勻后于沸水浴中加入 2min進行顯色，取出后用流動水迅速 冷卻，各加入蒸餾水9mL搖勻，在540nm波長處

4、測定光吸收值。測定后，取樣 品的光吸收值平均值在標準曲線上查出相應(yīng)的糖含量( mg/mL。4、計算總糖的百分含量總糖=(Cx V / m x 1000)x 稀釋倍數(shù)x 0.9 x 100%式中,C為總糖提取液的濃度 mg/mL V為總糖提取液的總體積mL m為樣品 質(zhì)量g五、實驗結(jié)果1、葡萄糖標準曲線的繪制(1)光吸收值測得結(jié)果AvV 口呂號2mg/mL葡萄糖蒸餾水/mL葡萄糖濃度OD540標準溶液/mLmg/mL101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21.66102(2)葡萄糖標準曲線圖:(3)回歸方程為：2、樣品總糖含量的測定(1) 材料總糖含量的

5、測定AvV 口呂號蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基 水酸試劑/mLOD5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為 。根據(jù)標準曲線的回歸方程計算得出總糖濃度為 請說明具體計算過程：從而得出樣品總糖的百分含量為。請說明具 體計算過程:AvV 口呂號蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基 水酸試劑/mLOD5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為 。根據(jù)標準曲線的回歸方程計算得出總糖濃度為 請說明具體計算過程：從而得出樣品總糖的百分含量為。請說明具體計算過程：(3)材料總糖含量的測定AvV 口呂號蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基 水酸試劑

6、/mLOD5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為 。根據(jù)標準曲線的回歸方程計算得出總糖濃度為 請說明具體計算過程：體計算過程：3、對比分析不同樣品總糖含量實驗二 蛋白質(zhì)含量的測定（考馬斯亮藍法）、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)用考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)濃度的基本原理與方法2、了解考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)濃度的優(yōu)缺點。、實驗原理三、實驗試劑1、0.15mol/L 氯化鈉溶液：稱取 0.2633g 氯化鈉，加少量的蒸餾水溶解后， 定容至 30mL。2、0.1mg/mL牛血清白蛋白標準溶液：（ 1 ）母液：稱取 0.01g 牛血清白蛋白溶于 10mL 0.15mol/L 氯化鈉溶液中， 配成濃度

7、為1mg/mL的溶液。（2）標準液：取母液1mL用0.15mol/L 氯化鈉溶液定容至10mL配成 0.1mg/mL的牛血清白蛋白標準溶液。3、考馬斯亮藍G-250試劑：稱取0.005g考馬斯亮藍G-250溶于2.5mL 95%乙醇，加蒸餾水40mL加5mL 85%磷酸，最后加蒸餾水定容至 50mL四、實驗步驟1、繪制標準曲線取6支試管，按下表加入各種試劑。試劑加完后混勻，室溫靜置 3min,以1 號管為空白調(diào)零，在595nm處測定其吸光值。以蛋白質(zhì)含量（mg/mL為橫坐標， 對應(yīng)的吸光值為縱坐標，繪制蛋白質(zhì)含量標準曲線，得出回歸方程。試劑/mLAvV 口呂號1234560.1mg/mL牛血清

8、白蛋白標準溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍G-250試劑555555蛋白質(zhì)濃度（ug/mL）020406080100OD952、總蛋白的提取稱取1g實驗材料（如新鮮果蔬），加5mL蒸餾水研磨，過濾后將濾液用蒸餾 水定容至10mL3、總蛋白測定取3支試管，分別加O.ImL未知濃度的蛋白質(zhì)樣品液，加0.9mL 0.15mol/L 氯化鈉溶液，再加入5mL考馬斯亮藍G-250試劑，搖勻，室溫靜置3min,以1 號管為空白管調(diào)零，在595nm處測其吸光值。測定后，取樣品的光吸收值平均值 在標準曲線上查出相應(yīng)的蛋白濃度（ug/mL

9、）。4、蛋白質(zhì)含量（mg/g）蛋白質(zhì)含量（mg/g） = （Cx VT） / （1000X VSX W）式中，C為蛋白質(zhì)提取液的濃度ug/mL； VT為提取液總體積mL Vs為測定時 加樣量mL WF為樣品鮮重g。五、實驗結(jié)果1、牛血清白蛋白標準曲線的繪制（1）光吸收值測得結(jié)果試劑/mLAvV 口呂號1234560.1mg/mL牛血清白蛋白標準溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍G-250試劑555555蛋白質(zhì)濃度（ug/mL）020406080100OD952）標準曲線圖：（3）回歸方程為：2、樣品蛋白質(zhì)含量的測定（ 1）

10、樣品 的光吸收值分別為 、 、，其平均值為 。根據(jù)標準曲線的回歸方程計算得出蛋白質(zhì)濃度為 。請說明具體計算過程：從而得出樣品 蛋白質(zhì)的含量為 。請說明具體計算過程：（ 2）樣品 的光吸收值分別為 、 、，其平均值為 。根據(jù)標準曲線的回歸方程計算得出蛋白質(zhì)濃度為 。請說明具體計算過程：從而得出樣品 蛋白質(zhì)的含量為 。請說明具體 計算過程：（ 3）樣品 的光吸收值分別為 、 、，其平均值為 。根據(jù)標準曲線的回歸方程計算得出蛋白質(zhì)濃度為 。請說明具體計算過程：從而得出樣品 蛋白質(zhì)的含量為 。請說明具體計算過程：3、對比分析不同樣品蛋白質(zhì)含量實驗三 維生素 C 含量的測定（ 2,6- 二氯酚靛酚滴定法

11、）、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握2,6-二氯酚靛酚滴定法測定維生素 C的原理與方法。2、了解水果與蔬菜中維生素 C的含量情況。、實驗原理三、實驗試劑1、2%草酸：稱取 1g 草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 50mL。2、1%草酸：稱取 0.5g 草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 50mL。3、0.1mg/mL標準抗壞血酸溶液：稱取0.0025g抗壞血酸溶于少量1%草酸溶 液中，最終加1%草酸定容至25mL用棕色試劑瓶保存于4C。最好臨用前配制4、0.05% 2,6-二氯酚靛酚溶液：稱取 0.025g 2,6-二氯酚靛酚溶于15mL含 有0.0052g碳酸氫鈉的熱水中，冷卻后加水定容至 50mL

12、濾去不溶物，用棕色 試劑瓶保存于4C。約可保存1周。四、實驗步驟1、樣品的制備稱取 10g 實驗材料（如新鮮果蔬） ，加入 5-10mL 2%草酸，研磨成漿狀，過 濾后，將濾液定容至 25mL。2、標準液滴定準確吸取標準抗壞血酸溶液1mL置于50mL錐形瓶中，加9mL1%草酸，以0.05% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡粉色，并保持15s不褪色，即達到終點；取10mL1% 草酸作空白對照，按以上方法滴定。記錄所用染料溶液的體積（mQ,計算出1mL 染料溶液所能氧化抗壞血酸的量（ mg）。3、樣品滴定準備吸取樣品濾液2份，每份為10mL分別放入2個錐形瓶，另取10mL1% 草酸作空白對照滴定；按

13、上面的操作滴定并記錄所用染料溶液的體積（mL）。4、維生素C含量的計算取2份樣品滴定所用染料體積平均值，代入下列公式中計算100g樣品還原型抗壞血酸含量。維生素 C含量（mg/100g 樣品）=（VA-Vb）x Cx TX 100/ （ D x W式中，VA為滴定樣品所好用的染料的平均用量 mL VB為滴定空白對照所用 的染料的平均用量mL C為樣品提取液的總體積 mL D為滴定時所取的樣品提取 液體積mL T為1mL染料能氧化抗壞血酸質(zhì)量 mg （由操作2計算出）；W為待測 樣品的質(zhì)量 g。五、實驗結(jié)果1、標準抗壞血酸溶液滴定時， 所用染料溶液的體積為 ，從而計算出1mL染料溶液所能氧化抗壞

14、血酸的量為。2、樣品維生素C含量的測定（1）樣品滴定時所用染料溶液的體積分別為 和。其平均用量為。則樣品維生素C含量為。請說明具體計算過程。（2）樣品 滴定時所用染料溶液的體積分別為 和。其平均用量為。則樣品維生素C含量為。請說明具體計算過程。（3）樣品 滴定時所用染料溶液的體積分別為 和。其平均用量為。則樣品維生素C含量為。請說明具體計算過程。3、對比分析不同樣品維生素C含量實驗四 纖維素含量的測定（比色法）、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握比色法測定纖維素的原理與方法2、了解水果與蔬菜中纖維素的含量情況。、實驗原理、實驗試劑1、60僦酸：量取30mL濃硫酸，緩慢倒入15mL蒸餾水中，最終加水定容至5

15、0mL2、濃硫酸3、2泌酮試劑：將1g蒽酮溶解于50mL乙酸乙酯中，存放在棕色試劑瓶中。4、100ug/mL纖維素標準液：（1）母液：稱取25mg纖維素，放入燒杯中，將燒杯放入冰浴中，然后加冷的60%酸15-17mL，在冷的條件下消化處理 20-30min，用60佩酸定容至25mL（2）吸取母液5mL放入另一個容量瓶中，將容量瓶放入冰浴中，加蒸餾水定容至50mL四、實驗步驟1、纖維素標準曲線的繪制取6支試管，按下表加入不同試劑:試劑/ mLAvV 口呂號123456100ug/ mL纖維素標準液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.40纖維素含量ug/ mL02040608

16、0100OD20將各管搖勻后，向每管加入 0.5mL 2%蒽酮，再沿管壁加入5mL濃硫酸，緩 慢搖勻后，靜置1min。然后在620nm下，測得不同含量纖維素溶液的吸光值。 以測得的吸光值為丫值，以對應(yīng)的纖維素含量為x值，繪制標準曲線，得出回歸 方程。2、樣品纖維素含量的測定（1）稱取1g實驗材料（如新鮮果蔬）置于燒杯中，將燒杯置于冷水浴中， 加入60%酸15mL并消化30min,然后將消化好的纖維素溶液轉(zhuǎn)入 25mL容量 瓶中，并用60%硫酸定容至25mL然后用布氏漏斗過濾于另一個燒杯中。（2） 取上述溶液2mL于試管中，加入0.5mL 2%蒽酮試劑，并沿管壁加5mL 濃硫酸，緩慢搖勻后，靜置12min，然后在620nm波長下測定光吸收值。3、纖維素百分含量纖維素百分含量=（XX 10-6 x a / W ）x 100%式中，X為按按回歸方程計算出的纖維素含量 ug； W為樣品重量g; 10-6為微克換算成克的系數(shù)；a為樣品稀釋倍數(shù)五、實驗結(jié)果1、纖維素標準曲線的繪制(1)光吸收值測得結(jié)果試劑/ mLAvV 口呂號123456100ug/ mL纖維素標準液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.40纖維素含量ug/ mL020