1、不同藥物對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型Leptin 、 Stat3 和 Caspase3的影響子宮內(nèi)膜異位癥 (endometriosis, EMS) 也稱內(nèi)異癥, 是一種雌激素依賴性婦科常見病 , 其生物學(xué)特征隨著女性體內(nèi)激素周期性改變而變化。臨床癥狀主要包括：盆腔痛, 盆腔包塊、不孕等表現(xiàn)。EMSft有轉(zhuǎn)移、侵襲、粘附、血管形成、凋亡減少等類似惡性月中瘤細(xì)胞的特征 , 也被稱為 “良性癌” 。 我們前期的研究發(fā)現(xiàn), 瘦素 (leptin) 、 瘦素受體 (leptinreceptor, OB-R)和stat3在EM浙位內(nèi)膜上均有表達(dá),提示leptin 有可能通過 與OB-R結(jié)合,激活JAK2/s

2、tat3途徑,促進(jìn)EMSW灶的增殖,同時伴隨著局部能量 代謝的異常。此外caspase3作為調(diào)控細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子，在EM訴位內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡中扮演著舉足輕重的角色。 辛伐他汀 (simvastatin) 屬于他汀類藥物 , 主要通過抑制膽固醇的合成, 降低低密度脂蛋白 , 增加高密度脂蛋白 , 從而達(dá)到降膽固醇的作用。還可通過多條信號通路作用于全身多個臟器, 發(fā)揮其調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、 抗腫瘤、抗炎、抗凋亡、預(yù)防缺血再灌注損傷等多方面效應(yīng)。二甲雙胍(metformin) 既往主要用于治療2 型糖尿病。然而近年來越來越多的文獻(xiàn)證明： 二甲雙胍可通過不同的機(jī)制發(fā)揮重要的抗月中瘤作用。既然EMSM有能量代

3、謝異常、凋亡降低等特點(diǎn)，那么辛伐他汀和二甲 雙胍這兩種既可改善機(jī)體能量代謝 , 又可通過多種途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡的藥物 , 是 否可以用來治療EMSi!本實(shí)驗(yàn)從EMSI灶的能量代謝和細(xì)胞凋亡異常著手，嘗試 從新的角度，研究EMS勺發(fā)病機(jī)制，為EMS勺藥物治療提供新的靶點(diǎn)。目的1、建立Lewis大鼠同種異體腹腔移植 EMS真型。2、觀察葛根素、辛 伐他汀、二甲雙月瓜和米非司酮對大鼠 EMSW灶的影響。3、探討四種藥物是否對EMSW灶中Leptin及其下游分子stat3產(chǎn)生作用。4、通過觀察四種藥物對 EMSO灶caspase3的影響，探討其對EMSW灶細(xì)胞凋亡 的影響。方法 1、 選擇健康雌性Lew

4、is 大鼠 , 共 70 只 , 其中供體組9 只 , 實(shí)驗(yàn)組 61 只 ,建立大鼠同種異體EMS真型，每日給予苯甲酸雌二醇0.05mg/100g,月幾注，共4 周。2、觀察大鼠EMSW灶的體積，篩選建模成功的大鼠，計算建模成功率。3、隨機(jī)選擇50只EM隊鼠，分為五組：1)對照組;2)葛根素組(50mg/kg);3)辛伐他汀組(5mg/kg);4) 甲雙胍組 (126mg/kg);5) 米非司酮組 (6.33mg/kg), 每組各 10 只。每組分別給相應(yīng)的藥。繼續(xù)每日苯甲酸雌二醇 0.05mg/100g, 肌注 ,飼養(yǎng) 4周。4、處死大鼠, 再次觀察病灶體積, 取出病灶 , 待下一步實(shí)驗(yàn)。5

5、、免疫組化(IHC)、實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和蛋白免疫印跡 法(Western-blot) 檢測 leptin、Stat3、Caspase-3;結(jié)果 1、53 只大鼠建模成功， 成功率 86.9%,每個病灶平均體積為 27.01 ± 3.72mm3。 2、 二甲雙胍組和米非司酮組的病灶體積小于對照組, 葛根素組病灶體積大于對照組, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;辛伐他汀組病灶體積與對照組相比無明顯差異。3、冰凍切片IHC示：葛根素組leptin的表達(dá)與對照組無明顯差異；其他三組 Leptin 的表達(dá)均低于對照組 ; 辛伐他汀組Stat3 的表達(dá)低于對照組; 葛根素組 Sta

6、t3 的表達(dá)與對照組無明顯差異; 二甲雙胍組和米非司酮組的 Stat3 的表達(dá)均高于于對照組。 葛根素組 caspase3 的表達(dá)與對照組相比無明顯差異; 辛伐他汀組 caspase3 的表達(dá)均低于對照組; 二甲雙胍組和米非司酮組 caspase3 的表達(dá)均高于于對照組。4、RT-PCR&示：四組實(shí)驗(yàn)組Leptin mRNA的表達(dá)均低于對照組；葛根素組和辛伐他汀組Stat3 mRNA 的表達(dá)低于對照組; 二甲雙胍組和米非司酮組Stat3 mRNA的表達(dá)高于對照組；葛根素組 caspase3 mRNAft達(dá)與對照組無明顯差異 ; 其他三組實(shí)驗(yàn)組Leptin mRNA 的表達(dá)均低于對照組。

7、 5、 Western-blot示：辛伐他汀組Leptin含量低于對照組；二甲雙月瓜組和米非司酮組Leptin含 量的表達(dá)高于對照組; 葛根素組 Leptin 含量與對照組無差異; 四實(shí)驗(yàn)組stat3蛋白含量均低于對照組：葛根素組 caspase3含量低于對照組；其他三組 caspase3 蛋白含量的表達(dá)高于對照組。結(jié)論1、Lewis大鼠同種異體腹腔移植EMS真型，成活率高，易觀察，大鼠生 存能力強(qiáng)，可接受多次手術(shù)，具有完整的免疫系統(tǒng)，在很大程度上與人EMS 勺組織 和生化特征相一致。2、葛根素可降低EMS位內(nèi)膜中Leptin、Stat3、caspase3 mRNA1達(dá)和caspase3蛋白的含量，Leptin、Stat3蛋白的含量增加，可能是刺激 了 leptin、stat3 途徑，同時抑制了 EMS位內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡，不適用于EMS勺 治療。3、辛伐他汀未抑制病灶生長，但病灶中l(wèi)eptin、stat3、caspase3 mRNAF口 蛋白含量均下降。因此, 需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討辛伐他汀是否可用于治療EMS。4、 二甲雙胍不能通過leptin 、 OB-R、 tat3 信號通路 , 而可能是通過caspase3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制EMSW灶的生長。二甲雙月瓜有望成為新的 EMS臺療藥物。5、米非司酮