1、1.驗證目的驗證方案初始污染菌檢查方法驗證文件編號NO:編制:審核:批準(zhǔn):日期:日期:日期:目錄13 .變更控制記錄初始污染菌檢查法方法驗證方案執(zhí)行過程中產(chǎn)生的每個變更。在初始污染菌 檢查法方法驗證方案執(zhí)行過程中產(chǎn)生的變更必須按照J(rèn)K/CX17-04變更控制管 理規(guī)程進行管理。在表4中填寫初始污染菌檢查法方法驗證方案執(zhí)行過程中產(chǎn)生的每個變更。表1:培養(yǎng)基適用性檢查試驗結(jié)果檢測日期培養(yǎng)基批號使用儀器微限超凈工作儀器編號：JK-FA-ZL-016臺生物平安柜儀器編號：JK-FA-ZL-015生化培養(yǎng)箱儀器編號：JK-FA-ZL-005 JK-FA-ZL-047培養(yǎng)溫度、時間h： 培養(yǎng)基菌株銅綠假單

2、胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌胰酪大豆膝瓊脂培養(yǎng)基12平均胰酪大豆陳瓊脂對照培養(yǎng)基12平均計算結(jié)果陰性對照組無菌生長，被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值 在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。檢驗人復(fù)核人日期日期檢測日期培養(yǎng)基批號使用儀器微限超凈工作臺儀器編號：JK-FA-ZL-016生物平安柜儀器編號：j K-FA-ZL-015霉菌培養(yǎng)箱儀器編號：JK-FA-ZL-006、JK-FA-ZL-048培養(yǎng)溫度、時間:h： h：菌白色念珠菌黑曲霉胰酪大豆豚瓊脂培養(yǎng)基12平均胰酪大豆陳瓊脂對照培養(yǎng)基12平均計算結(jié)果沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基12平均沙氏葡萄糖

3、瓊脂對照培養(yǎng)基12平均計算結(jié)果陰性對照組無菌生長，被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比 值在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。檢驗人復(fù)核人日期日期表2：計數(shù)方法適用性檢查試驗結(jié)果日期取樣產(chǎn)品檢測日期產(chǎn)品序列號培養(yǎng)基批號使用儀器微限超凈工作臺儀器編號：JK-FA-ZL-016生物平安柜儀器編號：J K-FA-ZL-015生化培養(yǎng)箱儀器編號：JK-FA-ZL-005、JK-FA-ZL-047霉菌培養(yǎng)箱儀器編號：JK-FA-ZL-006、JK-FA-ZL-048微生物限度檢測儀儀器編號：JK-FA-ZL-013JK-FA-ZL-050培養(yǎng)溫度、時間細(xì)菌：

4、h： 霉菌：h： 霉菌：h： 菌株銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽泡桿菌試驗組菌液對照組供試品對照組計算結(jié)果菌株白色念珠菌黑曲霉白色念珠菌黑曲霉培養(yǎng)基試驗組菌液對照組供試品對照組計算結(jié)果陰性對照組無菌生長，試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的 比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)。檢驗人復(fù)核人日期表3：偏差及糾偏措施序號偏差描述后續(xù)措施評估人/日期批準(zhǔn)人/日期預(yù)計完成時間完成時間批準(zhǔn)人/日期表4：變更控制序號變更編號變更類型變更名稱及變更簡介變更申請日期變更批準(zhǔn)日期變更關(guān)閉日期第9頁共10頁 TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark14 o Current

5、Document .驗證依據(jù)1 HYPERLINK l bookmark16 o Current Document .驗證人員組成與職責(zé)1 HYPERLINK l bookmark18 o Current Document .驗證人員培訓(xùn)1 HYPERLINK l bookmark20 o Current Document .驗證時間安排2 HYPERLINK l bookmark22 o Current Document .驗證用的測試儀器2 HYPERLINK l bookmark24 o Current Document .驗證用的菌株3 HYPERLINK l bookmark26 o

6、 Current Document .驗證用的培養(yǎng)基3 HYPERLINK l bookmark28 o Current Document .菌株介紹4 HYPERLINK l bookmark30 o Current Document .驗證環(huán)境的檢測4.驗證操作4計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查4計數(shù)方法適用性試驗5 HYPERLINK l bookmark34 o Current Document .偏差處理7 HYPERLINK l bookmark6 o Current Document .變更控制71 .驗證目的1.1初始污染菌檢查用胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查, 確

7、認(rèn)胰2.驗證依據(jù)中華人民共和國藥典2015版3.驗證人員組成與職責(zé)人員職能部門職責(zé)4.驗證人員培訓(xùn)培訓(xùn)人簽名/日期序號姓名部門職責(zé)已接受培訓(xùn)？簽名/日期1是否2是否3是否4是否5.驗證時間安排時間工程2017.02.152017. 02. 17確定驗證方案：驗證方案的編制、審批、確定2017.02.212017. 02. 27驗證實施：驗證前確認(rèn)、準(zhǔn)備工作和驗證操作工作2017.02.272017. 03. 01驗證總結(jié)：數(shù)據(jù)分析、匯總，驗證報告編制，審批。6 .驗證用的測試儀器儀器名稱型號儀器編號計量證書編號微限超凈工作臺SW-CJ-2FDJK-FA-ZL-016/生物平安柜BSC-1300

8、IIA2JK-FA-ZL-015/生化培養(yǎng)箱（無菌培養(yǎng)室）LRH-70FJK-FA-ZL-005JK-JL(T)-022生化培養(yǎng)箱（陽控培養(yǎng)室）LRH-70JK-FA-ZL-047JK-JL(T)-027霉菌培養(yǎng)箱（無菌培養(yǎng)室）MJ-70F-IJK-FA-ZL-006JK-JL(T)-023霉菌培養(yǎng)箱（陽控培養(yǎng)室）MJ-70-IJK-FA-ZL-048JK-JL(T)-028立式壓力滅菌鍋LDZF-50KB-11JK-FA-ZL-010JK-JL(T)-043微生物限度檢測儀（微限室）ZW-600JK-FA-ZL-013/微生物限度檢測儀（陽控室）ZW-300JK-FA-ZL-050/7 .驗

9、證用的菌株菌株中文名CMCC編號批號生產(chǎn)廠家銅綠假單胞菌CMCC(B)10104GC210816-1溫州微穹檢驗 技術(shù)服務(wù)有限 公司枯草芽狗桿菌CMCC(B)63501GC080816-1B溫州微穹檢驗 技術(shù)服務(wù)有限 公司金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003GC030816-2溫州微穹檢驗 技術(shù)服務(wù)有限 公司白色念珠菌CMCC(F)98001GC161007-3溫州微穹檢驗 技術(shù)服務(wù)有限 公司黑曲霉CMCC(F)98003GC080816-2A溫州微穹檢驗 技術(shù)服務(wù)有限 公司8 .驗證用的培養(yǎng)基名稱批號規(guī)格生產(chǎn)廠家胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)160426250g/瓶上海中科昆蟲生物基技術(shù)開發(fā)胰酪大豆陳

10、瓊脂對照培養(yǎng)基135025-20160312.0g/300ml中國食品藥品檢定研究所胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基160909250g/瓶上海中科昆蟲生物技術(shù)開發(fā)胰酪大豆豚液體對照培養(yǎng)基135026-2014016.0g/200ml中國食品藥品檢定研究所沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基160603250g/瓶上海中科昆蟲生物技術(shù)開發(fā)沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基135013-20150213.0g/200ml中國食品藥品檢定研究所9.菌株介紹L來源：溫州微穹檢驗技術(shù)服務(wù)。.質(zhì)控菌株MicroDome是一個含有定性或定量活性微生物的半球形水溶物，它適用 于微物實驗室中培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗，微生物方法學(xué)適用性驗證，抑菌效力認(rèn)證以及

11、陽 性對照等實驗。.質(zhì)控菌株MicroDome質(zhì)控菌株符合中國藥典、美國藥典、歐洲藥典、日本藥局方 的規(guī)和GMP要求。.質(zhì)控菌株MicroDome分類：定量菌株MicroDomeGP定性菌株MicroDomeWC 定制菌株CM。.銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌屬于定量菌株MicroDomeGPo.定量菌株MicroDomeGP：由質(zhì)控菌株MicroDomeGP和1.1ml復(fù)溶液MicroDome RHF兩局部組成。每顆MicroDome GP含有100-999cfu特定菌株，溶解在1.1ml復(fù) 溶液后，每0.1ml中含有10-99cfu的純活性菌種，產(chǎn)品適用于微生物培養(yǎng)基的促生 長試驗和實驗方法適

12、用性以及陽性對照試驗等。10 .驗證環(huán)境的監(jiān)測進行初始污染菌方法驗證的環(huán)境條件應(yīng)符合要求。1L驗證操作計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查菌懸液制備.準(zhǔn)備好MicroDome GP和MicroDome RHF,及備用標(biāo)簽。.貼好相對應(yīng)的備用標(biāo)簽并確認(rèn)標(biāo)簽一致。.撕開鋁塑組合蓋，并在無菌操作下翻開膠塞。.將 MicroDome GP 菌株倒入 MicroDome RHF1.1 ml 復(fù)溶液中。.漩渦振蕩使其充分溶解（約10秒）。6,取0.1ml菌懸液，內(nèi)含10-99cfuo驗證進行3次獨立的平行試驗，每次的試驗結(jié)果都應(yīng)符合要求。L取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽泡桿菌各0.1ml分別移入被檢 胰酪大豆陳瓊

13、脂培養(yǎng)基中，均勻涂布（用涂布棒）菌懸液，直到培養(yǎng)基外表 干燥。每一試驗菌株制備兩個平皿。置3035,培養(yǎng)時間不超過3天。.取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽泡桿菌各0.1ml分別移入被檢 胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基中。每一試驗菌株制備兩試管。置3035,培養(yǎng)時 間不超過3天。.取白色念珠菌、黑曲霉各0.1ml分別移入被檢胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基中， 均勻涂布（用涂布棒）菌懸液，直到培養(yǎng)基外表干燥。每一試驗菌株制備兩 個平皿。置3035,培養(yǎng)時間不超過5天。4,取白色念珠菌、黑曲霉各。.lml分別移入被檢沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中， 均勻涂布（用棉拭子）菌懸液，直到培養(yǎng)基外表干燥。每一試驗菌株制備兩 個平

14、皿。置2025,培養(yǎng)時間不超過5天。.所有被檢培養(yǎng)基中不加菌液做陰性對照。.用相對應(yīng)的對照培養(yǎng)基代替被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。結(jié)果判斷1LL3.1在3次獨立的平行試驗中，陰性對照應(yīng)無菌生長，被檢固體培養(yǎng)基 上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范 圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。被檢液體培養(yǎng) 基管與對照培養(yǎng)基管比擬，試驗菌應(yīng)生長良好。11.132試驗后填寫表U結(jié)論假設(shè)各試驗組的結(jié)果均符合要求，胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂 培養(yǎng)基適合用來檢測醫(yī)療器械產(chǎn)品、半成品、包裝袋初始污染菌的檢查。11.2計數(shù)方法適用性試驗菌懸液制備.準(zhǔn)備好MicroDome GP

15、和MicroDome RHF,及備用標(biāo)簽。.貼好相對應(yīng)的備用標(biāo)簽并確認(rèn)標(biāo)簽一致。.撕開鋁塑組合蓋，并在無菌操作下翻開膠塞。.將 MicroDome GP 菌株倒入 MicroDome RHFl.lml 復(fù)溶液中。.漩渦振蕩使其充分溶解（約10秒）。.取0.1ml菌懸液，內(nèi)含10-99cfuo1122供試液制備將整個樣品浸于100ml 0.9%氯化鈉溶液中，浸泡，振搖，制成1:100的供 試液。11.2.3接種和稀釋進行3次獨立的平行試驗，每次的試驗結(jié)果都應(yīng)符合要求。.試驗組：取制備好的供試液150mL分成3份，分別加入0.1ml的金黃色 葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌，混勻，過濾，濾膜貼

16、于胰酪大豆 陳瓊脂培養(yǎng)基，置3035,培養(yǎng)時間不超過3天;取制備好的供試液100mL 分成2份，分別加入0.1ml的白色念珠菌、黑曲霉的濾膜貼于胰酪大豆陳瓊 脂培養(yǎng)基，置3035,培養(yǎng)時間不超過5天；取制備好的供試液100mL 分成2份，分別加入0.1ml白色念珠菌、黑曲霉的濾膜貼于沙氏葡萄糖瓊脂 培養(yǎng)基，置2025,培養(yǎng)時間不超過5天，每株試驗菌每種培養(yǎng)基制備一 張濾膜。.供試品對照組：取制備好的供試液100ml,分成兩份，不加菌株，過濾, 每種培養(yǎng)基制備一張濾膜。3,菌液對照組：取無菌0.9%氯化鈉溶液，加入0.1ml的各試驗菌株，混勻， 分成兩份，過濾，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽泡桿菌的濾膜貼 于胰酪大豆陳瓊 脂培養(yǎng)基，置3035,培養(yǎng)時間不超過3天；白色念 珠菌、黑曲霉的濾膜貼于胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基，置3035C,培養(yǎng)時間不 超過5天；白色念珠菌、黑曲霉的濾膜貼于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，置 2025,培養(yǎng)時間不超過5天，每株試驗菌每種培養(yǎng)基制備一張濾膜。并 進行微生物回收試驗。.陰性對照組：取0.9%氯化鈉溶液100mL不加菌株，分成兩份，過濾，每 種培養(yǎng)基制備一張