1、成都中醫(yī)藥大學(xué)畢業(yè)課題設(shè)計(jì)報(bào)告學(xué) 院 醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院 班 級(jí) _2011級(jí)衛(wèi)生檢驗(yàn) 學(xué) 生 姓 名_謝 可 洮_ 學(xué) 號(hào)_201146611010_學(xué) 科 方 向_理 化 檢 驗(yàn)_課 題 題 目達(dá)州市市面上染發(fā)劑中對(duì)苯二胺的檢測(cè) 實(shí) 習(xí) 單 位青羊區(qū)疾病預(yù)防控制中心 達(dá)州市達(dá)川區(qū)婦幼保健院 指 導(dǎo) 教 師 _ _李 建_ 醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院 2015 年 5 月 一、立項(xiàng)的必要性及國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)（附主要參考文獻(xiàn)，不低于10篇。） 隨著人民生活水平的提高,現(xiàn)代人更加追求自我表現(xiàn)和個(gè)性的點(diǎn)綴,一方面,人們需要通過(guò)染發(fā)劑來(lái)修飾因遺傳、代謝、營(yíng)養(yǎng)、疾病、年老等因素導(dǎo)致的白發(fā),從而體現(xiàn)自己年輕的精神面

2、貌,加之我國(guó)已經(jīng)進(jìn)入快速老齡化階段,染發(fā)劑作為老年人的護(hù)發(fā)用品有很大的市場(chǎng);另一方面,許多人將原色改變或調(diào)整為金色、黃色、亞麻色、紅棕色、紫羅蘭等國(guó)際流行色來(lái)彰顯個(gè)性和追求時(shí)尚。雖然他們讓外表看起來(lái)更好，但卻忽視了染發(fā)帶來(lái)的危害。染發(fā)劑是一種改變頭發(fā)顏色的特殊用途化妝品,根據(jù)染色原理和染色牢度，可胺作為主要原料,再輔以分為暫時(shí)性染發(fā)劑，半耐久性 ( 或非氧化性) 染發(fā)劑和永久性( 或氧化性) 染發(fā)劑。目前,市場(chǎng)上銷售的染發(fā)劑絕大部分都是以染料中間體對(duì)苯二胺，間苯二酚等偶合劑而制成的。對(duì)苯二胺又名烏爾絲D，微溶于水、有毒，暴露在空氣中易氧化為棕褐色，由于對(duì)苯二胺具有一定的毒性和致敏性,所以對(duì)苯二

3、胺在染發(fā)劑中的用量受到嚴(yán)格限制1,以保證消費(fèi)者的健康。對(duì)苯二胺是染發(fā)劑的有效成分，目前通過(guò)研究能確定對(duì)苯二胺是有很強(qiáng)的致敏作用，可引起接觸性皮炎、濕疹、支氣管哮喘。國(guó)內(nèi)外有學(xué)者認(rèn)為對(duì)苯二胺氧化產(chǎn)物可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，提示氧化型染發(fā)劑具有潛在的致癌危險(xiǎn)性。因此對(duì)本二胺含量檢測(cè)十分重要。如今染發(fā)已成為世界流行時(shí)尚，成千上萬(wàn)的消費(fèi)者在使用染發(fā)劑，人們對(duì)胺類有毒物質(zhì)的分析測(cè)定倍加關(guān)注。目前文獻(xiàn)報(bào)道的多采用毛細(xì)管色譜、色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分析測(cè)定，但這些方法需要使用合適接觸染發(fā)產(chǎn)品的廣度和頻度，近年來(lái)染發(fā)劑中苯二的溶劑對(duì)樣品進(jìn)行多次萃取，由于萃取不完全，所以造成原分析方不準(zhǔn)確。薄層色譜(TLC)雖能很好地分

4、離和鑒定各種染料成分，但進(jìn)行精確定量尚存在一定困難。通過(guò)綜合考慮我們選用常用的氣相色譜法2，但對(duì)此法做出一定的改進(jìn)，即采用一種經(jīng)改進(jìn)的新的溶劑體系,把對(duì)苯二胺類中間體經(jīng)中和反應(yīng)后再萃取出來(lái)的方法。該方法對(duì)含有對(duì)苯二胺類中間體的各種類型染發(fā)劑均適用3。近年來(lái)， 國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)市售知名品牌的染發(fā)劑的致突變作用進(jìn)行研究，證實(shí)所檢測(cè)的染發(fā)劑均具有移碼突變致突變作用，其中有兩種染發(fā)劑同時(shí)具有堿基置換和移碼突變致突變作用，長(zhǎng)期使用可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生4。研究者還比較了不同實(shí)驗(yàn)條件對(duì)染發(fā)劑染色體畸變實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響5，以及染發(fā)劑的遺傳生殖毒性，如對(duì)小鼠精子畸形及骨髓細(xì)胞微核的影響等6，明確證實(shí)染發(fā)劑對(duì)使用者的健康存

5、在潛在危害。染發(fā)劑是一種改變頭發(fā)顏色的特殊用途的化妝品，其中以染料中間體對(duì)苯二胺作為主要原料，由于對(duì)苯二胺類具有一定的毒性和致癌性，因此要嚴(yán)格控制和檢測(cè)對(duì)苯二胺的含量。按照染發(fā)過(guò)程中發(fā)生的化學(xué)變化，有機(jī)合成染料可分成氧化染料、還原染料和仿天然黑素染料。氧化染料是目前最廣泛應(yīng)用的染發(fā)劑原料。氧化染料的染發(fā)原理是在氧化劑作用下，苯胺類物質(zhì)在染色過(guò)程中被氧化為染料中間體，該中間體又在偶合劑(苯二酚類)的作用下發(fā)生偶合反應(yīng)后產(chǎn)生顏色而染發(fā)。用的最多的染發(fā)劑有鄰苯二胺(用于染成金黃色)、間苯二胺(用于染成紫色)、對(duì)苯二胺(用于染成棕黑色)。根據(jù)不同的染色需要。染發(fā)劑中苯二胺異構(gòu)體的含量也各不相同。苯二胺

6、在化妝品中屬于嚴(yán)格限用物質(zhì)，GB791687規(guī)定最大允許含量為6長(zhǎng)期以來(lái), 人們使用的傳統(tǒng)染發(fā)劑大多數(shù)是鉛或苯胺衍生物制劑。這些化合物均具有一定的毒性或致敏性。長(zhǎng)期使用芳胺類化合物, 還可致癌, 直接危害著人們的身體健康。因此, 其應(yīng)用局限性較大。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上還是以這些傳統(tǒng)染發(fā)劑為主, 很少有新型無(wú)毒染發(fā)劑面市。上世紀(jì)60年代，日本和歐洲部分國(guó)家已流行染發(fā)。到1971年，美國(guó) 40% 的成年婦女和 10%的中老年男性也是染發(fā)劑的長(zhǎng)期使用者7。 對(duì)二胺是一種國(guó)際的疑似致癌物質(zhì) ，苯二胺3種同分異構(gòu)體均是有毒的化學(xué)物質(zhì)，可經(jīng)皮膚吸收，引起皮疹和使肝臟受損害，吸人粉塵可引起過(guò)敏、鼻炎、支氣管炎、發(fā)

7、燒等不同的病癥8 。對(duì)苯二胺是國(guó)際公認(rèn)的一種致癌物對(duì)人體的危害已經(jīng)得到國(guó)內(nèi)外的廣泛認(rèn)同。在染發(fā)劑中，對(duì)苯二胺(PPD)是目前最重要的著色劑成分，1939年首次被定義為強(qiáng)過(guò)敏原，是一個(gè)眾所周知的引起染發(fā)劑皮炎的最常見抗原。在染發(fā)產(chǎn)品中的PPD最大允許濃度為6% 。由于染發(fā)人群中染黑發(fā)的數(shù)量眾多，PPD是黑色染發(fā)劑中的染色劑成分之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，PPD斑貼試驗(yàn)致敏率隨著地區(qū)、國(guó)家、人種的不同而不同，歐洲有的地區(qū)PPD致敏率為01 1 ，在泰國(guó)則達(dá)到239。國(guó)外的研究顯示，經(jīng)常染發(fā)的人群患乳腺癌、皮膚癌、自血病、膀胱癌的發(fā)病概率都會(huì)增加。在美國(guó)明尼蘇達(dá)州曾經(jīng)做過(guò)一個(gè)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)亻L(zhǎng)期染發(fā)人群白血病發(fā)病幾

8、率是非染發(fā)人群的4倍，國(guó)內(nèi)一些調(diào)查結(jié)果是38倍。對(duì)苯二胺1939年首次被定義為強(qiáng)過(guò)敏原，并被選入北美、歐洲和TRuE斑貼試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)抗原組，被認(rèn)為是測(cè)試染發(fā)劑皮炎的最佳抗原10，MartinJM 11等也報(bào)道了相關(guān)病例。歐盟國(guó)家主要通過(guò)歐盟化妝品指令(76/768/EEC)對(duì)染發(fā)劑實(shí)行監(jiān)管。歐盟化妝品指令頒布于1976年,隨著科技的發(fā)展,該法規(guī)已修訂50余次,在2008一2009年進(jìn)行的修訂中,降低了染發(fā)劑內(nèi)PPD(對(duì)苯二胺及PTD(甲苯2,5一二胺,的最高準(zhǔn)許濃度,即兩種物質(zhì)于氧化條件下混合后,PPD及PTD的最高濃度分別不可高于2%及4%12。美國(guó)CIR（化妝品成分評(píng)審指導(dǎo)委員會(huì)）經(jīng)過(guò)研究認(rèn)

9、為，動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持對(duì)苯二胺無(wú)致畸性和致癌性的結(jié)論。而流行病學(xué)數(shù)據(jù)也證實(shí)，含有對(duì)苯二胺的染發(fā)劑無(wú)致癌性。歐盟SCCP（歐盟獨(dú)立科學(xué)委員會(huì)）同樣得出沒有證據(jù)表明對(duì)苯二胺具有致癌性的結(jié)論。IARC（國(guó)際癌癥研究所）的結(jié)論亦表明，沒有證據(jù)可以認(rèn)為對(duì)苯二胺具有致癌性，最新的致癌性評(píng)估仍為第三類致癌物，即動(dòng)物可疑致癌物，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)PPD致癌任然存爭(zhēng)議。對(duì)于PPD的檢測(cè)目前方法也是眾多，最初的有高效液相色譜法、非極性毛細(xì)管柱(HP-5)氣相色譜法、方波溶出伏安法快速測(cè)定染發(fā)劑中對(duì)苯二胺13、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光抑制法測(cè)定染發(fā)劑中對(duì)苯二胺14、循環(huán)伏安法測(cè)定染發(fā)劑中的對(duì)苯二胺15。不論是對(duì)PPD含量的限制，還

10、是對(duì)方法、萃取劑的改進(jìn)，都證明人們對(duì)PPD的檢測(cè)非常重視。參考文獻(xiàn)：1GB7916 -87化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)S2 QB/T1863 -93染發(fā)劑中對(duì)苯二胺的測(cè)定 氣相色譜法S3宋連珍,陳海.燕染發(fā)劑中對(duì)本二胺測(cè)定方法的改進(jìn).江西化工,2003,(4): 112-113.4賀小瓊，陳彥紅，吳雙鳳1O種常用染發(fā)劑的致突變作用研究J昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,(4)：365魏嵐，徐永俊，王獅 不同實(shí)驗(yàn)條件對(duì)染發(fā)劑染色體畸變實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響J環(huán)境與健康雜志,2010,(8)： 11-146王麗麗，郭營(yíng)，周彥生 氧化型染發(fā)劑對(duì)小鼠精子畸形及骨髓細(xì)胞微核的影響J新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2O1O， 27(6)： 564-5

11、667周永貴，李貞觀 .染發(fā)劑的致突變、致癌和毒代動(dòng)力學(xué)的研究進(jìn)展 J. 3 環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2008,25 (1): 403-404.8黃正兵染發(fā)劑一對(duì)苯二胺J中學(xué)生數(shù)理化，2006，7-8：158-l599 Nielsen NH， Linneberg A， Menne T， el a1Allegric contact sensitization in an adult Danishpopulation： two crosssectional surveys eight years apart(the Copenhagen Allergy Study)JActa Derm Venereol，

12、 2007， 81(1)： 3l-34.10陳繼鶯，王學(xué)民，周玉田，等對(duì)苯二胺皮膚接觸致敏的劑量反應(yīng)關(guān)系J毒理學(xué)雜志，2007，21(5)：417.11Martin J M，Revert A，A，A1ons0 V，et a1.Accute contact eczemfrom para-phenylenediamine contained in temporary henna tattoos J.Aelas Dermosifiliogi，2005，96(6)：382.12孫波,耿莉,王艷,金鑫等.歐盟化妝品標(biāo)準(zhǔn)的最新修訂及其啟示.中國(guó)衛(wèi)生監(jiān)督雜志,2010,(2):153-156.13苗力孝,馬

13、紅艷,孫雪花,劉阿靜.方波溶出伏安法快速測(cè)定染發(fā)劑中對(duì)苯二胺J.延安大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2008,(3):71-74.14付小寧.流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光抑制法測(cè)定染發(fā)劑中對(duì)苯二胺J.日用化學(xué)工業(yè),2011,41(2):154-156.15郭靜,張睿,金根娣.循環(huán)伏安法測(cè)定染發(fā)劑中的對(duì)苯二胺J.揚(yáng)州職業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2011,15(3): 41-43.2、 研究?jī)?nèi)容、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案、預(yù)期結(jié)果研究?jī)?nèi)容1. 達(dá)州市市面上染發(fā)劑的合格情況2. 達(dá)州市各階段人群染發(fā)頻率3. 染發(fā)劑對(duì)人體健康狀況的影響實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案（國(guó)標(biāo)方法改進(jìn)萃取劑）1.技術(shù)路線 市售染發(fā)劑樣品前處理離心萃取進(jìn)樣分析2.實(shí)驗(yàn)方案2.1儀器和試劑

14、 儀器:日本島津GC-7A氣相色譜儀,FID檢測(cè)器 試劑:3%NaOH溶液(新配制),乙酸乙酯 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):對(duì)苯二胺(分析純)2.2 色譜條件色譜柱:玻璃柱管3mm2m,內(nèi)充填10%Carobowax20M+Chromsorb WAW60-80目經(jīng)氫氧化鉀一甲醇處理溫度:氣化室250 ,檢測(cè)器250 ,柱溫210流量:氮?dú)?0mL/min,氫氣30mL/min,空氣250mL/min,進(jìn)樣量1L2.3對(duì)苯二胺標(biāo)準(zhǔn)系列制備1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml對(duì)苯二胺溶液，溶劑乙酸乙酯。2.4 樣品處理及檢測(cè)10mL離心管：0.30g試樣 + 3mlNa0H溶液（3%）+ 5mL乙酸

15、乙酯 + 2滴1%亞硫酸鈉，振蕩30s；加0.1g氯化鈉,振蕩30s；2000r/min離心5min。2.5mL乙酸乙酯萃取下層水相2次,合并萃取液,乙酸乙酯定容至10mL。進(jìn)樣分析，1ul/次。3.方案流程圖標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備樣品前處理稱取試樣測(cè)定下層萃取，合并有機(jī)相分出上層有機(jī)相加試劑離心定容至容量瓶中備用稀釋定容至容量瓶中，備用測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線結(jié)果分析預(yù)期結(jié)果1. 達(dá)州市市面上染發(fā)劑基本合格，但有個(gè)別私營(yíng)店染發(fā)劑中對(duì)苯二胺含量超標(biāo)。2. 達(dá)州市青少年染發(fā)較為多。3. 染發(fā)劑中對(duì)苯二胺對(duì)人體健康有危害，不能短時(shí)間內(nèi)多次染發(fā)。三、現(xiàn)有工作基礎(chǔ)、所需條件和完成時(shí)間1.現(xiàn)有工作基礎(chǔ)：現(xiàn)目前，達(dá)

16、州市達(dá)川區(qū)婦幼保健院沒有合適的實(shí)驗(yàn)條件，所以經(jīng)由和科室申請(qǐng)，協(xié)商決定，本實(shí)驗(yàn)可在達(dá)州市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行。達(dá)州市疾病預(yù)防控制中心是一家設(shè)備設(shè)施較為齊全的疾病預(yù)防控制中心，該單位已購(gòu)買了氣相色譜儀及所需試劑、帶氫火焰離子化檢測(cè)器的色譜儀、離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)所需儀器。理化檢驗(yàn)的所有實(shí)驗(yàn)人員均知道儀器的使用方法、注意事項(xiàng)、維護(hù)等知識(shí)，并且經(jīng)常自己動(dòng)手操作。在人員方面，檢驗(yàn)科共有15人，其中中級(jí)及以上職稱的有9人，在操作技術(shù)上有豐富的經(jīng)驗(yàn)。采樣人員方面（該單位稱之為監(jiān)測(cè)科），單位幾乎每一個(gè)季度都會(huì)派監(jiān)測(cè)科到省級(jí)相關(guān)部門學(xué)習(xí)，對(duì)采樣有著豐富的經(jīng)驗(yàn)。因此，實(shí)驗(yàn)室完全可滿足該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要求。2.所需條件：1) 儀器：帶氫火焰離子化檢測(cè)器的色譜儀，離心機(jī)，千分之一天平、萬(wàn)分之一天平等。2) 試劑及材料：a. 乙酸乙酯（分析純），對(duì)苯二胺