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文檔簡介
1、Good is good, but better carries it.精益求精,善益求善。Abcam抗體產(chǎn)品保存指南-Abcam產(chǎn)品保存指南抗體保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當(dāng),大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。本指南以Abcam抗體保存方法為主,同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分公司的抗體產(chǎn)品!請謹(jǐn)記!無論何時(shí)請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體!1.收到抗體后請務(wù)必在12000rpm離心1-5分鐘后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長離心時(shí)間至5分鐘,以保證全部抗體均離心下來)!Abcam的抗體使用非常特殊的儲存管,只有在12000rp
2、m離心1-5分鐘才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來。即使是在10000rpm離心也會導(dǎo)致離心不完全,導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象!2.對于Abcam大部分抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在-20or-80。對絕大多數(shù)抗體來說,保存在-20是完全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80會有更多的好處!分裝可以最大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害,同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,最少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4,避免再凍起來!抗體工作液
3、應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,在4盡量不要超過1天。絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上3.大部分抗體收到后4短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。如果抗體很快(1-2周)會使用,推薦在4保存,這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20or-80。最關(guān)鍵的一點(diǎn)是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體!但是,腹水形式的產(chǎn)品請?jiān)谑盏胶罅⒓磧銎饋?!因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長期在4oC保存會導(dǎo)致抗體的降解!4.大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時(shí)間,所以是在4的條件下來完成的。4運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的
4、損害(如果使用干冰運(yùn)輸,那么收到時(shí)抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程)。所以運(yùn)輸過程中絕對避免干冰運(yùn)輸!特殊抗體的保存條件:酶聯(lián)抗體:永遠(yuǎn)保存在4,避免凍起來。否則會導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4保存。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的!IgG3的同型對照:永遠(yuǎn)保存在4,避免凍起來。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體無論是保存還是運(yùn)輸,絕對避免反復(fù)凍融!反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性,導(dǎo)致多聚體形成,從而降低抗體的結(jié)合能力!抗體保存其它相關(guān)信息:關(guān)于加入甘油保存:有些人會加50%的甘油
5、到抗體中來避免反復(fù)凍融,甘油在-20會降低冰點(diǎn)。這對很多抗體可能是可行的。但是abcam僅對非常小的一部分抗體檢測過其在這種條件下的穩(wěn)定性;而Abcam只對按照推薦條件保存的抗體提供質(zhì)量保證!加入甘油的溶液不建議在-80保存,因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請謹(jǐn)慎注意無菌操作,避免污染!關(guān)于蛋白保護(hù)劑:蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解(1mg/ml或者更高),這就是為什么在抗體中加入BSA之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。關(guān)于疊氮化
6、鈉(sodiumazide)的使用:為了防止微生物污染,疊氮化鈉經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度0.02%(w/v))。Abcam的很多抗體已經(jīng)含有了0.02-0.05%的疊氮化鈉,在說明書的“Storagebuffer”中有標(biāo)明的。在下述情況中不能使用疊氮化鈉:如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究:疊氮化鈉在抵抗微生物的同時(shí),對其它大部分有機(jī)物也是有毒的,因?yàn)樗钄嗔司€粒體的cytochromeelectrontransportsystem.要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體:疊氮化鈉會干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,應(yīng)將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存,但是濃度只能是0.01。對于需要偶聯(lián)的抗體,thimerosal(merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護(hù)劑!注:疊
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