1、第五章蛋白質(zhì)的通性、純化和表征第1頁，共88頁。目的要求1、掌握蛋白質(zhì)的兩性電離、膠體、沉淀的性質(zhì)。2、熟悉蛋白質(zhì)分離純化的一般原則，掌握蛋白質(zhì)分離純化方法。3、掌握蛋白質(zhì)的含量測定與純度鑒定。重點(diǎn)難點(diǎn)1、蛋白質(zhì)的兩性電離、膠體、沉淀的性質(zhì)。2、蛋白質(zhì)的分離純化方法。第2頁，共88頁。一、蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)1. 蛋白質(zhì)分子的可解離基團(tuán) 2. 等電點(diǎn)：使蛋白質(zhì)分子所帶的正電荷與負(fù)電荷恰好相等，凈電荷為零的溶液pH。（與AA相同）蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。蛋白質(zhì)所帶電荷性質(zhì)取決于可解離基團(tuán)的種類和數(shù)目以及溶

2、液的pH。 第3頁，共88頁。 每種蛋白質(zhì)都有特定的等電點(diǎn)，這是鑒別蛋白質(zhì)的指標(biāo)之一。蛋白質(zhì)的酸性氨基酸和堿性氨基酸含量與等電點(diǎn)的關(guān)系:等電點(diǎn)和蛋白質(zhì)分子中所含氨基酸的種類和數(shù)目有關(guān)。第4頁，共88頁。3. 等離子點(diǎn)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)在有中性鹽（Ca2+，Mg2+，Cl-，SO42-）存在下可以發(fā)生明顯的變化。等離子點(diǎn)：蛋白質(zhì)在沒有其它鹽類干擾的純水中，蛋白質(zhì)質(zhì)子供體基團(tuán)解離出來的質(zhì)子數(shù)與質(zhì)子受體基團(tuán)結(jié)合的質(zhì)子數(shù)相等時的溶液的pH值。等離子點(diǎn)是一個特征常數(shù) 第5頁，共88頁。二 蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)與蛋白質(zhì)的沉淀 蛋白質(zhì)溶液中，蛋白質(zhì)分子的直徑介于1100nm，該分散系統(tǒng)為膠體溶液系統(tǒng)。布郎運(yùn)動、丁道

3、爾現(xiàn)象、不能透過半透膜）。膠體系統(tǒng)保持穩(wěn)定的三個因素 顆粒大小在1100nm范圍內(nèi)顆粒表面帶有同種凈電荷與水形成水化層（一）膠體性質(zhì)第6頁，共88頁。第7頁，共88頁。 當(dāng)破壞了維持蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素甚至蛋白質(zhì)的構(gòu)象時，蛋白質(zhì)就會從溶液中析出的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的沉淀。應(yīng)用:(1)蛋白質(zhì)分離純化(2)解毒(3)臨床檢驗(yàn)（二）蛋白質(zhì)的沉淀 第8頁，共88頁。 引起蛋白質(zhì)沉淀的原因1、加入脫水劑以除去它的水化層。2、改變?nèi)芤旱膒H達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使質(zhì)點(diǎn)失去攜帶相同凈電荷。3、加入電解質(zhì)破壞雙電層，蛋白質(zhì)分子就會凝集成大的質(zhì)點(diǎn)而沉淀。第9頁，共88頁。+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白

4、質(zhì)水化層+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用 蛋白質(zhì)的聚沉蛋白質(zhì)膠體溶液沉淀作用示意圖第10頁，共88頁。(1) 鹽析法( salting out)向蛋白質(zhì)溶液中加入大量中性鹽使蛋白質(zhì)沉淀稱為鹽析。常用的中性鹽：不破壞蛋白質(zhì)的構(gòu)象，蛋白質(zhì)不發(fā)生變性。硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等使蛋白質(zhì)沉淀的方法特點(diǎn)：作用原理:鹽離子與水的親和力極強(qiáng)，可脫去蛋白分子表面的水化層；鹽離子中和蛋白分子表面的電荷，最終蛋白質(zhì)聚集沉淀。第11頁，共88頁。(2) 有機(jī)溶劑沉淀法使蛋白質(zhì)脫去水化層，又能降低溶液的介電常數(shù)，增強(qiáng)異性電荷間的相互作用而使蛋白質(zhì)分子聚集沉淀。 必

5、須在低溫下操作注意事項(xiàng):盡量縮短處理的時間 及時將蛋白質(zhì)中殘存的有機(jī)溶劑除去甲醇、乙醇、丙酮缺點(diǎn)： 原理:常用有機(jī)溶劑:常會使蛋白質(zhì)變性第12頁，共88頁。重金屬離子如Cu2+、Hg2+、Ag2+、Pb2+等帶有正電荷，能與蛋白質(zhì)分子中帶負(fù)電的基團(tuán)結(jié)合，生成不溶性的重金屬蛋白鹽而沉淀。(3) 重金屬鹽沉淀法常使蛋白質(zhì)變性失活。若溶液pH大于蛋白質(zhì)的pI，沉淀更易發(fā)生缺點(diǎn)：原理:第13頁，共88頁。生物堿試劑(如鞣酸、苦味酸、鎢酸等)，某些酸類(主要是指三氯醋酸、磺酰水楊酸和硝酸等)與帶正電的蛋白質(zhì)結(jié)合生成不溶性的鹽而沉淀。(4) 生物堿試劑和某些酸類沉淀法反應(yīng)溶液的pHpI，確保蛋白質(zhì)以陽離子

6、形式存在 缺點(diǎn)： 原理:常引起蛋白質(zhì)變性注意事項(xiàng):第14頁，共88頁。（5）加熱變性幾乎所有的蛋白質(zhì)都因加熱變性而凝固當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于等電點(diǎn)時，加熱凝固最完全，最迅速。原理： 1、蛋白質(zhì)天然結(jié)構(gòu)解體，疏水基外露，破壞了蛋白質(zhì)的水化層 2、破壞電荷情況第15頁，共88頁。第16頁，共88頁。（一） 純化的目標(biāo) （二） 蛋白質(zhì)分離純化的一般原則 三 蛋白質(zhì)分離純化的一般原則第17頁，共88頁。（一）目標(biāo) 蛋白質(zhì)在生物體中一般都是以復(fù)雜的混合物形式存在，在實(shí)際工作中，要研究或應(yīng)用某種蛋白質(zhì)，必須將其分離提純到一定的水平。 研究蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)、組成和某些物理化學(xué)性質(zhì)，需要純的均一的甚至是晶體的蛋白質(zhì)樣品

7、； 研究活性蛋白質(zhì)的生物功能，不但需要把樣品提純到一定的水平，而且樣品還要保持它的天然構(gòu)象，要盡量避免因變性而失活； 在制藥工業(yè)中，需要把某些具有特殊功能的蛋白質(zhì)提純到規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，特別是要把一些具有干擾或拮抗性質(zhì)的成分除去。第18頁，共88頁。1、總目標(biāo) （1）增加制品的純度（purity）或比活性（specific activity）即增加單位蛋白質(zhì)重量中目標(biāo)蛋白質(zhì)的含量或生物活性；（2）并且使目標(biāo)蛋白質(zhì)的產(chǎn)量達(dá)到最高值。（二）一般原則 第19頁，共88頁。2、分離提純的一般程序 含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的動植物組織、細(xì)胞或微生物體 前處理 可溶性蛋白質(zhì)混合物抽提液 粗分級分離已除去大量雜質(zhì)的蛋白質(zhì)濃

8、縮液 細(xì)分級分離高純度的蛋白質(zhì)制品第20頁，共88頁。 電泳 前處理粗分離細(xì)分離生物組織 無細(xì)胞提取液破碎、抽提、差速離心選擇性沉淀法親和層析離子交換層析精制后的蛋白質(zhì)凝膠過濾疏水層析吸附層析第21頁，共88頁。四 蛋白質(zhì)的分離純化方法 分離提純蛋白質(zhì)的各種方法主要是利用蛋白質(zhì)之間的各種特異性的差異，包括： （1）分子大?。?（2）溶解度； （3）電荷不同； （4）選擇性吸附； （5）對配體分子的生物學(xué)親和力等。 第22頁，共88頁。（一）根據(jù)分子大小不同的純化方法 1 透析(dialysis)和超濾(ultrafiltration)2 凝膠過濾(gel filtration) 第23頁，共8

9、8頁。1 透析和超濾* 透析(dialysis)利用蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)大分子與其他小分子物質(zhì)分開的方法。* 超濾法 應(yīng)用正壓或離心力，使水和其他小分子通過半透膜而蛋白質(zhì)被截留在膜上，達(dá)到濃縮或脫鹽粗分級的目的。第24頁，共88頁。透析與超過濾簡易裝置第25頁，共88頁。超濾裝置第26頁，共88頁。（1）凝膠過濾的介質(zhì)2 凝膠過濾第27頁，共88頁。凝膠的網(wǎng)孔大小決定分離范圍能被該凝膠分離開來的蛋白質(zhì)混合物的相對分子質(zhì)量范圍Sephadex G-50 1 50030 000 有時用排阻極限來表示分離范圍的上限,排阻極限指不能擴(kuò)散進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔的最小相對分子量,如Sephade

10、x G-50的極限為30 000第28頁，共88頁。 常用的凝膠 : 葡聚糖凝膠（商品名Sephadex）是由線型的-1,6-葡萄糖與1-氯-2,3-環(huán)氧丙烷反應(yīng)而成,商品名為Sephadex 。聚丙烯酰胺凝膠(商品名Bio-GelP)是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺共聚而成，商品名為Bio-Gel P。瓊脂糖凝膠(Sepharose，Bio-gel A)是從瓊脂中分離制得的，商品名為Sepharose或Bio-Gel A第29頁，共88頁。交聯(lián)葡聚糖凝膠 Sephadex第30頁，共88頁。瓊脂糖凝膠 Sepharose第31頁，共88頁。以甲叉雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑，將丙烯酰胺（單體）聚

11、合而成聚丙烯酰胺凝膠 （Bio-gel P）第32頁，共88頁。(2)凝膠過濾的原理第33頁，共88頁。凝膠過濾的原理： 當(dāng)含有各種組分的樣品流經(jīng)凝膠層析柱時，大分子物質(zhì)由于分子直徑大，不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔，沿凝膠顆粒的間隙以較快的速度流過凝膠柱。而小分子物質(zhì)能夠進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，向下移動的速度較慢，從而使樣品中各組分按相對分子質(zhì)量從大到小的順序先后流出層析柱，而達(dá)到分離的目的。 第34頁，共88頁。應(yīng)用凝膠層析法適用于分離和提純蛋白質(zhì)、酶、多肽、激素、多糖、核酸類等物質(zhì)。分子大小彼此相差25%的樣品，只要通過單一凝膠床就可以完全將它們分開。利用凝膠的分子篩特性，可對這些物質(zhì)的溶液進(jìn)行脫

12、鹽、去熱源和脫色。第35頁，共88頁。（二）根據(jù)溶解度差別純化的方法 影響蛋白質(zhì)溶解度的外界因素主要有：（1）溶液的pH，（2）離子強(qiáng)度I，（3）介電常數(shù)，（4）溫度T。 根據(jù)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，適當(dāng)改變上述外界因素，就可以選擇性的控制蛋白質(zhì)混合物中某一成分的溶解度，作為分離純化蛋白質(zhì)的一種手段。第36頁，共88頁。利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時溶解度最低以及不同的蛋白質(zhì)具有不同等電點(diǎn)一這特性，對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化的方法稱為等電點(diǎn)沉淀法。 在等電點(diǎn)時，蛋白質(zhì)分子的凈電荷為零，消除了分子間的靜電斥力，但由于水膜的存在，蛋白質(zhì)仍有一定的溶解度而沉淀不完全，所以等電沉淀法經(jīng)常與鹽析法或有機(jī)溶劑沉淀法聯(lián)合使用

13、。 單獨(dú)使用等電點(diǎn)法主要是用于去除等電點(diǎn)相距較大的雜蛋白。在加酸或加堿調(diào)節(jié)pH的過程中，要一邊攪拌一邊慢慢加入，以防止局部過酸或過堿 。1. 等電點(diǎn)沉淀和pH控制 第37頁，共88頁。第38頁，共88頁。2. 鹽溶和鹽析 鹽溶(salting in) 是指低濃度的中性鹽可以增加蛋白質(zhì)溶解度的現(xiàn)象。鹽析(salting out) 是指當(dāng)中性鹽的離子強(qiáng)度增加到足夠高時，（如飽和或半飽和的程度），很多蛋白質(zhì)可以從水溶液中沉淀出來的現(xiàn)象。 常用鹽析鹽類： (NH4)2SO4 ，NaCl等第39頁，共88頁。鹽溶原理示意圖第40頁，共88頁。鹽溶主要由于蛋白質(zhì)分子吸附某種鹽類離子后，帶電表層使蛋白質(zhì)彼此

14、排斥，而蛋白質(zhì)分子與水分子之間的相互作用卻加強(qiáng)。鹽析原因：在蛋白質(zhì)溶液中大量加入中性鹽使水的活度降低，原來溶液中大部分自由水轉(zhuǎn)變?yōu)辂}離子的水化水，從而降低蛋白質(zhì)極性基團(tuán)與水分子之間的相互作用，破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化層。第41頁，共88頁。鹽析原理示意圖第42頁，共88頁。應(yīng)用鹽析是一種最常用的分級分離的方法之一,利用好了一步即能去大量的雜蛋白?，F(xiàn)在已有的很多蛋白水解酶或其酶原都已經(jīng)利用鹽析進(jìn)行了沉淀并結(jié)晶,如:胰凝乳蛋白酶原,胰蛋白酶等。優(yōu)點(diǎn):保持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象,能再溶解第43頁，共88頁。雞蛋清球蛋白沉淀濾液卵清蛋白晶體半飽和(NH4)2SO4卵清蛋白的分離全飽和(NH4)2SO4第44

15、頁，共88頁。3. 有機(jī)溶劑分級法 與水互溶的有機(jī)溶劑（如乙醇和丙酮）能使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低， 原因之一是降低了介質(zhì)的介電常數(shù)，蛋白質(zhì)表面的離子化程度減弱，水化程度降低，因此促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子的聚集沉淀； 原因之二與鹽析相似，有機(jī)溶劑與蛋白質(zhì)爭奪水化水，致使蛋白質(zhì)聚集沉淀。第45頁，共88頁。有機(jī)溶劑分級分離原理示意圖第46頁，共88頁。4 溫度對溶解度的影響 在低離子強(qiáng)度時，蛋白質(zhì)的溶解度大多數(shù)在一定范圍（約0-40）內(nèi)是隨著溫度增加而增加的。但在40-50以上，大部分蛋白質(zhì)變得不穩(wěn)定并開始變性，一般在中性介質(zhì)中就會失去溶解力。大多數(shù)蛋白質(zhì)在低溫下比較穩(wěn)定。因此，蛋白質(zhì)的分級分離操作

16、一般都要求在低溫下進(jìn)行。第47頁，共88頁。（三）根據(jù)電荷不同的分離方法 1 . 電泳 電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小不同的蛋白質(zhì)所帶凈電荷密度不同，遷移率不同，在電泳時可以分開。 F=FfqE=fV=v/E泳動度第48頁，共88頁。電泳的發(fā)展a. 自由界面電泳：蛋白質(zhì)溶于緩沖液中進(jìn)行電泳。 b. 區(qū)帶電泳：將蛋白質(zhì)溶液點(diǎn)在浸了緩沖液的支持物上進(jìn)行電泳，不同組分形成帶狀區(qū)域。 1）紙電泳：用濾紙作支持物。 2）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。 第49頁，共88頁。Protein DenaturedPartialDenatured濾紙電泳 Cellulose薄層

17、電泳 (TLE) Cellulose acetate膠體 Starch Gel 電泳形式的演進(jìn)第50頁，共88頁。圓盤電泳：玻璃管中進(jìn)行的凝膠電泳。平板電泳：鋪有凝膠的平板上進(jìn)行的電泳。+ -+第51頁，共88頁。 純化中應(yīng)用最多的是聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦電泳，它們既可以作為蛋白質(zhì)純度檢驗(yàn)方法，也可以純化、制備蛋白質(zhì)。第52頁，共88頁。 （1） PAGE：PAGE電泳：以聚丙烯酰胺凝膠為支持介質(zhì)的電泳凝膠板分為兩部分：濃縮膠分離膠PAGE垂直平板電泳示意圖第53頁，共88頁。高效的分辨率濃縮效應(yīng)電荷效應(yīng)分子篩效應(yīng)PAGE的三種分離效應(yīng)第54頁，共88頁。第55頁，共88頁。（2）等電點(diǎn)

18、聚焦蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)當(dāng)pH=pI時凈電荷為零，在電場中既不向正極也不向負(fù)極移動，此時的pH就是該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI)第56頁，共88頁。以PAG為電泳支持物，并在其中加入兩性電解質(zhì)載體，在電場作用下，兩性電解質(zhì)載體在凝膠中移動，形成pH梯度，蛋白質(zhì)在凝膠中遷移至其pI的pH處，即不再泳動而聚焦成帶，這種方法稱聚丙烯酰胺等電聚焦電泳(isoelectric focusing，IEF)原理:第57頁，共88頁。第58頁，共88頁。 等電聚焦的運(yùn)作機(jī)制：-+pH357911+-+-+-+-+-+Adapted from Alberts et al (2002) Molecular Biology

19、 of the Cell (4e) p.487+-第59頁，共88頁。（3）雙向凝膠電泳第60頁，共88頁。第61頁，共88頁。第62頁，共88頁。 2.離子交換層析法 不同載體： 離子交換纖維素 離子交換交聯(lián)葡聚糖：兼有分子篩效應(yīng) 離子交換交聯(lián)瓊脂糖第63頁，共88頁。親和層析法(AC) （七）利用對配體的特異生物學(xué)親和力 的純化方法 Pr瓊脂糖小珠配體：凝集素，抗原，抗體金屬螯合劑雜質(zhì)雜質(zhì)蛋白質(zhì) 配體 蛋白質(zhì)配體復(fù)合物第64頁，共88頁。第65頁，共88頁。配體的選擇可選擇配體的種類：抑制劑效應(yīng)物酶的輔助因子類似底物抗體其它（外源凝集素，PolyA， PolyU 金屬離子）第66頁，共88

20、頁。（六） HPLC原理：，GF，吸附層析技術(shù)上的改進(jìn)顆粒力度小而均勻，機(jī)械性能強(qiáng)化學(xué)性能穩(wěn)定高壓柱，計(jì)算機(jī)輔助設(shè)備分辨率提高，效率提高第67頁，共88頁。第68頁，共88頁。第69頁，共88頁。五、蛋白質(zhì)相對分子量的測定1.凝膠過濾法測定相對分子質(zhì)量 第70頁，共88頁。Note：蛋白質(zhì)分子通過凝膠柱的速度并不直接取決于分子質(zhì)量，而是分子的半徑。用凝膠過濾法測定分子質(zhì)量，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（已知Mr）與待測蛋白質(zhì)必須具有相同的分子形狀（球形）分子形狀為線形或能與凝膠發(fā)生吸附作用的蛋白質(zhì)，不能用此法測定。第71頁，共88頁。將已知分子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，在同一凝膠柱上以相同條件進(jìn)行過濾層析，在一定的范圍內(nèi)

21、，各個組分的洗脫液體積Ve與其分子量的對數(shù)成線性關(guān)系（反比）： Veb lg MWc第72頁，共88頁。優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單，不要求復(fù)雜的儀器對待測樣品的純度要求不高。待測樣品可以是不純的，只要具有專一的生物活性。第73頁，共88頁。聚丙烯酰胺凝膠：具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和分子篩性質(zhì)。以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳普通蛋白質(zhì)電泳的泳動速率取決于荷質(zhì)比（凈電荷、大小、形狀）（二）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 （SDS） 第74頁，共88頁。 SDS 在蛋白質(zhì)表面均勻附上一層負(fù)電： SDS（十二烷基磺酸鈉），它能夠與蛋白質(zhì)多肽鏈中的氨基酸殘基按大約1 1.4比例結(jié)合。 SDS可將蛋白質(zhì)解離成亞基，

22、所以測出的分子量是亞基的分子量。 第75頁，共88頁。SDSPAGE的依據(jù)：物質(zhì)分子量的差異性當(dāng)SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后：1)SDS使蛋白質(zhì)分子即帶有大量的負(fù)電荷，掩蓋了蛋白質(zhì)分子間的電荷差別2）改變了蛋白質(zhì)單體的構(gòu)象，SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合體形狀趨向一致，所以各種SDS一蛋白質(zhì)復(fù)合物在電泳時產(chǎn)生的泳動率差異，就反映了分子量的差異。 第76頁，共88頁。方法：用SDS和巰基乙醇（打開二硫鍵）處理 蛋白質(zhì)變性（肽鏈伸展）并與SDS結(jié)合，形成 SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使得不同蛋白質(zhì)分子均帶 負(fù)電（SDS帶負(fù)電），且荷質(zhì)比相同； 不同蛋白質(zhì)分子具有相似的構(gòu)象。 用幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的對數(shù)值對它們 的遷

23、移率作圖 測出待測樣品的遷移率 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品的相對分子質(zhì)量第77頁，共88頁。第78頁，共88頁。 六 蛋白質(zhì)的含量測定與純度鑒定：（一）總蛋白質(zhì)含量測定： 凱氏定氮法：測樣品中N含量雙縮脲法：不十分精確，但較簡便Folin-酚試劑(Lowry法)： 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)測定方法：染料結(jié)合法（Bradford法）靈敏度較高, g水平 染料：考馬斯亮藍(lán)紫外吸收法： A280比色膠體金法(ng水平)第79頁，共88頁。（二）蛋白質(zhì)的純度鑒定 電泳：一條帶 層析(HPLC)：一個峰 N-末端分析；一種AA第80頁，共88頁。一、單項(xiàng)選擇題1. 構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸屬于下列哪種氨基酸？（）。 A. L-氨

24、基酸 B. L-氨基酸 C. D-氨基酸 D. D-氨基酸2. 280nm波長處有吸收峰的氨基酸為（ ）。 A.精氨酸 B.色氨酸 C.絲氨酸 D.谷氨酸3. 有關(guān)蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)描述，錯誤的是（ ）。 A.具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈都有生物學(xué)活性 B.三級結(jié)構(gòu)是單體蛋白質(zhì)或亞基的空間結(jié)構(gòu) C.三級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性由次級鍵維持 D.親水基團(tuán)多位于三級結(jié)構(gòu)的表面A. L-氨基酸B.色氨酸A.具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈都有生物學(xué)活性第81頁，共88頁。4. 關(guān)于蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的正確敘述是（ ）。 A.蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性由二硫鍵維系 B.四級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)保持生物學(xué)活性的必要條件 C.蛋白質(zhì)都有四級結(jié)構(gòu) D.蛋白質(zhì)亞基間由非共價鍵聚合。D第82頁，共88頁。二、多項(xiàng)選擇題1. 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域（ ）。 A.都有特定的功能 B.折疊得較為緊密的區(qū)域 C.屬于三級結(jié)構(gòu) D.存在每一種蛋白質(zhì)中2. 空間構(gòu)象包括（ ）。 A. -折疊 B.結(jié)構(gòu)域 C.亞基 D.模序A B CA B C D第83頁，共88頁。三、名詞解釋1. 蛋白質(zhì)等電點(diǎn) 2. 蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)3. 蛋白質(zhì)變性 4. 模