1、關(guān)于實(shí)驗(yàn)一大腸桿菌的分離和培養(yǎng)第一張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增，利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作。2.進(jìn)行大腸桿菌的分離，用固體平面培養(yǎng)基本進(jìn)行細(xì)菌的劃線培養(yǎng)。3.說(shuō)明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和實(shí)驗(yàn)原理。 第二張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、基礎(chǔ)知識(shí)(一)微生物:1.特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單,個(gè)體多數(shù)十分微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu).且體內(nèi)一般不含有葉綠素.不能進(jìn)行光合作用.2.微生物包括五類病 毒細(xì) 菌放線菌真 菌原生動(dòng)物第三張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(二)培養(yǎng)基1.分類(按物理形態(tài)分)(

2、1)液體培養(yǎng)基(2)固體培養(yǎng)基常用的固體培養(yǎng)基: 瓊脂固體培養(yǎng)基. 微生物在固體培養(yǎng)基 表面生長(zhǎng),可以形成 肉眼可見(jiàn)的菌落.第四張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)(1)水(2)碳源 (3)氮源(4)無(wú)機(jī)鹽第五張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件(1)pH值如:培養(yǎng)霉菌需酸性、培養(yǎng)細(xì)菌需中性或微堿性(2)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)- ?如：培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素(3)氧氣的含量如:培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無(wú)氧的條件生長(zhǎng)因子第六張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(三)無(wú)菌技術(shù)1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵: 2、無(wú)菌技術(shù) 的四個(gè)方

3、面(參看教材20頁(yè))3、消毒與滅菌(1)消毒：概念：使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物。包括芽孢和孢子嗎？方法:煮沸消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒化學(xué)藥劑消毒:酒精、氯氣、石碳酸、煤酚皂溶液等紫外線消毒(不包括芽孢和孢子)防止外來(lái)雜菌的入侵第七張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）滅菌概念：使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。方法：a 灼燒滅菌 b 干熱滅菌 c 高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌微生物的接種工具 (接種環(huán)、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒注意適用范圍第八張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月干熱滅菌

4、 160170 ；12h能耐高溫的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌第九張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板（二）分離純化大腸桿菌接種方法有：劃線分離法和涂布分離法（三）將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h和24h后，觀察并記錄第十張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、課題延伸：菌種的保藏1、斜面保藏 （臨時(shí)保存）2、甘油保藏 （長(zhǎng)期保存）第十一張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)1：大腸桿菌的培養(yǎng)和分離設(shè)備及

5、用品： 滅菌鍋或高壓鍋、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈、直徑90mm的培養(yǎng)皿、接種環(huán)和玻璃三角刮刀、恒溫培養(yǎng)箱、搖床、酒精燈和超凈臺(tái)、一次性塑料手套、裝有酒精棉球的廣口瓶、鑷子、有棉塞的試管（15mm120mm）5支實(shí)驗(yàn)材料：(1)50mlLB液體培養(yǎng)基：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、NaCl 0.5g、加水50ml。(2)大腸桿菌菌種斜面(3)空白斜面 第十二張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)步驟(1) 滅菌：將配制好的50mlLB液體培養(yǎng)基和50mlLB液體培養(yǎng)基分別裝入兩個(gè)250ml的三角瓶中，加上封口膜，用高壓鍋進(jìn)行滅菌。(2) 制平板：在酒精燈火焰旁將固體培養(yǎng)

6、基分別倒在4個(gè)培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)基鋪平皿底部，待凝，使之形成平面。(3)接種擴(kuò)大培養(yǎng)：靠近酒精燈火焰將大腸桿菌接種到三角燒瓶的液體培養(yǎng)基中，三角燒瓶在37搖床振蕩培養(yǎng)12h。(4) 劃線分離：將搖床上培養(yǎng)12h的菌液在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，然后將蓋好的培養(yǎng)皿倒置，放在37恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。(5)單菌落接種培養(yǎng)：在無(wú)菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在空白斜面上，在37下培養(yǎng)24h, 4冰箱保存。第十三張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月單菌落第十四張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)完成后，接觸過(guò)細(xì)菌的器皿應(yīng)如何處理？實(shí)驗(yàn)完成后，所有接觸過(guò)細(xì)菌的器皿都

7、必須先高壓滅菌后再洗滌，特別是培養(yǎng)基，有可能被有害菌體污染，在培養(yǎng)繁殖后，大量有害菌體影響人畜健康，也污染環(huán)境，因此必須高壓滅菌。使用后的廢棄物也要高壓滅菌后再拋棄。對(duì)于取樣器的取樣頭，通常是滅菌后在超聲波清洗器中加洗衣粉洗滌綸30 min ,再用清水洗凈，仍可再用。封口膜也可再用。第十五張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月無(wú)菌技術(shù)的四個(gè)方面（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌 ；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。 (三)無(wú)菌技術(shù)返回第十六張，P

8、PT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月倒平板第十七張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月討論:(1).培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？(2).為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？(3).平板冷凝后，為什么要將平板倒置？(4).在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，

9、既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。返回第十八張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、平板劃線法第十九張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月討論:(1).為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？(2).在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？(3).在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物

10、；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。返回第二十張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.稀釋涂布法:(1)系列稀釋操作:第二十一張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月涂布平板操作討論:涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？提示：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。返回第二十二張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月返回菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。不同的細(xì)菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。第二十三張，PPT共二十五頁(yè)，創(chuàng)作于2